目的：肝細胞癌(hepatocellular carcinoma cells, HCC)是原發(fā)性肝癌中最常見的惡性腫瘤,起病隱匿,惡性程度高。腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)現(xiàn)象常常導(dǎo)致肝癌化療失敗。研究發(fā)現(xiàn),HCC組織內(nèi),包括let-7家族在內(nèi)的miRNA表達譜異常。本次研究中,首先通過c-Myc反義硫代寡核苷酸技術(shù)驗證c-Myc基因?qū)Ω伟〩epG2細胞生物學(xué)活性的影響以及對5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的影響；其次通過let-7c模擬物(let-7c mimic)和let-7c模擬對照物(let-7c mimic NC)瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細胞,let-7c和c-Myc基因表達的靶向調(diào)控關(guān)系；并觀察let-7c mimic和let-7c inhibitor轉(zhuǎn)染后HepG2細胞和HepG2/5-Fu細胞生物學(xué)活性的改變,以及對化療藥物敏感性的變化。從而闡述let-7c在肝細胞癌中通過調(diào)控c-Myc基因的表達,逆轉(zhuǎn)肝細胞癌多藥耐藥的現(xiàn)象及其作用機制。方法：第一部分通過脂質(zhì)體介導(dǎo)c-Myc反義硫代寡核苷酸聯(lián)合5-Fu,研究c-Myc的異常表達對肝癌HepG2細胞生物學(xué)活性以及對5-Fu敏感性的影響;第二部分通過let-7c mimic轉(zhuǎn)染后檢測let-7c表達水平和對c-Myc表達的影響,以及對HepG2細胞增殖、凋亡等生物學(xué)活性的影響；用雙熒光素酶報告基因法驗證c-Myc是不是let-7c的靶基因；第三部分檢測HepG2細胞和HepG2/5- Fu耐藥細胞對順鉑、長春新堿和5-Fu的耐藥性；let-7c mimic和let-7c inhibitor瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細胞和HepG2/5- Fu耐藥細胞,調(diào)控其相關(guān)靶基因：c-Myc基因表達,從而改變HepG2細胞和HepG2/5-Fu耐藥細胞的生物學(xué)活,及對順鉑、長春新堿和5-Fu等化療藥物敏感性的影響。結(jié)果：(1)c-Myc反義寡核苷酸聯(lián)合5-Fu,下調(diào)HepG2細胞c-Myc的活性及其蛋白的表達,抑制HepG2細胞的增殖和侵襲,促進凋亡；并增加HepG2細胞對5-Fu的敏感性。(2)雙熒光素酶報告基因證實c-Myc是let-7c的作用靶基因,let-7cmimic和let-7c inhibitor可調(diào)控c-Myc的轉(zhuǎn)錄和翻譯表達；let-7c mimic轉(zhuǎn)染可上調(diào)let-7c的表達,抑制c-Myc的表達,抑制HepG2細胞的增殖率,促進凋亡；(3)耐藥細胞株HepG2/5- Fu對5-Fu、DDP和VCR等多種化療藥物耐藥；let-7c mimic上調(diào)細胞內(nèi)let-7c表達,靶向抑制c-Myc的表達,抑制肝癌耐藥細胞株HepG2/5-Fu的增殖率,促進其凋亡,改善耐藥細胞株HepG2/5- Fu對多種化療藥物敏感性；而let-7c inhibitor轉(zhuǎn)染后則出現(xiàn)反向結(jié)果。結(jié)論：研究通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的c-Myc反義寡核苷酸聯(lián)合5-Fu可通過抑制c-Myc基因的表達抑制肝癌HepG2細胞增殖侵襲,促進其凋亡；c-Myc反義寡核苷酸可抑制HepG2細胞活性,提高HepG2細胞對5-Fu的敏感性,降低5-Fu的治療劑量。c-Myc是let-7c的靶基因之一,let-7c是通過與c-Myc mRNA 3'UTR互補結(jié)合位點結(jié)合發(fā)揮作用,直接調(diào)控c-Myc的表達,從而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖凋亡等。Let-7c mimic調(diào)控let-7c在HepG2/5- Fu細胞內(nèi)高表達,靶向抑制c-Myc表達,抑制HepG2/5- Fu細胞增殖,提高HepG2/5- Fu對多種化療藥物的敏感性,逆轉(zhuǎn)多藥耐藥。Let-7c是重要的抑癌基因,很有可能成為肝臟惡性腫瘤未來分子靶向治療的新指標(biāo)。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R735.7

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王傳敏;李新宇;石慶鳳;陳悅;;c-myc和c-fos的陽性表達與肝細胞癌發(fā)生的相關(guān)性研究[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年04期

2 魏輝;侯俊明;董明;杜寧;任宏;;Hsa-let-7誘導(dǎo)肺癌細胞凋亡與G_0/G_1期阻滯及其分子機制[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2013年11期

本文編號：2807406