發(fā)布時間：2020-08-25 15:37

【摘要】：目的:檢測mi R-155在肝癌標(biāo)本及細(xì)胞系中的表達(dá)情況,探討mi R-155在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物學(xué)功能,并探究其與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為肝癌的診治及預(yù)后判斷提供新的策略。方法:1、用人肝癌細(xì)胞Hep G2和Hu H7和正常肝細(xì)胞HL-7702,并收集30例原發(fā)性肝癌癌組織標(biāo)本,癌旁組織,12例正常肝組織標(biāo)本,運(yùn)用q RT-PCR技術(shù)檢測mi R-155在肝癌組及正常對照組中的表達(dá)。2、由慢病毒介導(dǎo)將基因mi R-155轉(zhuǎn)染至mi R-155表達(dá)量低的細(xì)胞株(Hu H-7)中,將抑制劑inhibitor(mi R-155 inhibitor)轉(zhuǎn)染至表達(dá)量高的細(xì)胞株(Hep G2)中,通過MTT檢測細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期變化,以及應(yīng)用劃痕愈合試驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)了解其對細(xì)胞遷移、侵襲的影響。3、通過q RT-PCR技術(shù)檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)表型相關(guān)因子基因的表達(dá)及Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá),分析mi R-155與EMT的關(guān)系。4、通過q RT-PCR分析mi R-155與腫瘤大小及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系,了解其對原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的影響。結(jié)果:1、mi R-155在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于對照組,其中Hep G2細(xì)胞株表達(dá)量較高,Hu H7細(xì)胞株表達(dá)量較低,mi R-155在肝癌組織中的表達(dá)量明顯高于癌旁組織和正常組織(P0.05)。2、Hu H7細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染mi R-155后細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化不明顯,細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng),轉(zhuǎn)染mi R-155 inhibitor至Hep G2細(xì)胞株后,細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化也不明顯,而細(xì)胞的遷移及侵襲能力減弱。3、Hu H7細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染mi R-155后上皮表型CDH1的m RNA及蛋白表達(dá)減少,而間質(zhì)表型snai1和zeb1的m RNA及蛋白表達(dá)增加。Hep G2細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染mi R-155 inhibitor后,呈現(xiàn)出相反的結(jié)果。4、臨床統(tǒng)計(jì)分析mi R-155與肝癌的大小無關(guān),與有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)表明mi R-155在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá),并能夠通過促進(jìn)EMT增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,進(jìn)而提高肝癌的轉(zhuǎn)移作用。因此,mi R-155可成為監(jiān)測肝癌預(yù)后的一個新的指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【圖文】：

第三章 結(jié) 果 miR-155 在肝癌中的表達(dá)及其對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響第三章 結(jié) 果1 R-155 在肝癌細(xì)胞及組織樣本中的表達(dá)情況1.1 miR-155 基因和內(nèi)參 U6 基因的溶解曲線為測定肝癌組和正常對照組中 miR-155 的表達(dá)量，本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時熒光定量PCR 技術(shù)來進(jìn)行檢測，以 U6 為內(nèi)參（圖 1）。

第三章 結(jié) 果 miR-155 在肝癌中的表達(dá)及其對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響圖 3 慢病毒介導(dǎo)的 miR-155 轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞 HepG2 和 HuH7 的情況由圖 3 所見：轉(zhuǎn)染 miR-155 inhibitor 的 HepG2 細(xì)胞 miR-155 的表達(dá)量變化不明顯，而轉(zhuǎn)染 miR-155 的 HuH7 的表達(dá)量明顯升高（*P<0.05）。4 miR-155 對肝癌細(xì)胞活力的影響MTT 是一種四氮唑鹽化合物，活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能將黃色的 MTT 還原

圖 3 慢病毒介導(dǎo)的 miR-155 轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞 HepG2 和 HuH7 的情況由圖 3 所見：轉(zhuǎn)染 miR-155 inhibitor 的 HepG2 細(xì)胞 miR-155 的表達(dá)量變化不明顯，而轉(zhuǎn)染 miR-155 的 HuH7 的表達(dá)量明顯升高（*P<0.05）。4 miR-155 對肝癌細(xì)胞活力的影響MTT 是一種四氮唑鹽化合物，活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能將黃色的 MTT 還原成藍(lán)黑色可溶于有機(jī)溶劑的甲佨(Formazan)，同時，甲佨生成量與活細(xì)胞數(shù)成正比，而死細(xì)胞沒有這種功能。二甲亞砜（DMSO）能溶解沉積在細(xì)胞中的藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的 Formazan 量成正比，最后用酶標(biāo)儀測定 OD 值可間接反應(yīng)細(xì)胞的活力。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Hepatitis B virus and hepatocellular carcinoma at the miRNA level[J];World Journal of Gastroenterology;2011年28期

本文編號：2803882