【摘要】：研究背景：瘢痕疙瘩是一種病理性瘢痕,在臨床上非常多見,具有發(fā)紅、瘙癢、刺痛和燒灼感等顯著的臨床表現,給患者帶來很大的生理和心理負擔。瘢痕疙瘩的發(fā)病機制并不明確,最新研究發(fā)現瘢痕疙瘩的發(fā)生可能與上皮間質轉化(EMT)相關,瘢痕疙瘩中的成纖維細胞可能是角質形成細胞經EMT轉化而來。瘢痕疙瘩的治療方法眾多,但無論是手術還是單一無創(chuàng)治療的復發(fā)率均較高。手術切除聯合術后放療的方法是治療瘢痕疙瘩最有效的方法。目前尚無研究從EMT角度出發(fā)探索術后放療抑制瘢痕疙瘩復發(fā)的作用機制。研究目的：探索放療對人角質形成細胞上皮間質轉化的影響。研究方法：對人永生化角質形成細胞HaCaT細胞給予10ng/ml TGF-β1處理,以未經處理的角質形成細胞作為陰性對照,以從手術標本原代培養(yǎng)得到的成纖維細胞作為陽性對照,觀察細胞的形態(tài)變化,測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質化標志物的表達,確認是否成功構建EMT模型。對一組HaCaT細胞進行9Gy放療,對另一組HaCaT細胞同時給予9Gy放療與10ng/ml TGF-β1處理。觀察陰性對照組、放療組與放療聯合TGF-β組細胞的形態(tài)變化,進行劃痕實驗檢測細胞的遷移能力,測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質化標志物的表達。結果：1.對HaCaT細胞進行10ng/ml TGF-β1處理后,觀察到細胞形態(tài)從典型的角質形成細胞形態(tài)轉變?yōu)轭愃瞥衫w維細胞的形態(tài)；而放療后細胞形態(tài)未發(fā)生明顯的變化,同時細胞死亡速率加快。2.劃痕實驗結果顯示未經處理的HaCaT細胞遷移能力最弱,在TGF-1誘導下發(fā)生了EMT的細胞遷移能力最強,對HaCaT細胞行放療之后,細胞的遷移能力略有增強,對HaCaT行放療與TGF-β1雙重處理之后,細胞的總體遷移能力與單純行TGF-β1處理相似,略弱于后者。3.經過TGF-β1處理后1天、3天和7天細胞的上皮化標志物ZO-1與CDH1的基因表達和蛋白表達顯著下調(P0.05),間質化標志物CDH2的基因表達與蛋白表達上調,FN1的基因表達顯著上調(P0.05),Vimentin的蛋白表達上調。4.放療后培養(yǎng)1天與3天的細胞中上皮化標志物的基因表達和蛋白表達均上調,間質化標志物的基因表達和蛋白表達下調。5.放療聯合TGF-β1組細胞除了E-Cadherin蛋白表達之外,其余上皮化標志物的基因表達和蛋白表達均高于TGF-β1組；間質化標志物除了CDH2的基因表達與TGF-β1組相似,其余標志物的基因表達和蛋白表達低于TGF-β1組。結論：TGF-β1成功地構建了HaCaT細胞EMT環(huán)境。放療對HaCaT細胞EMT的影響總體以抑制為主。
【學位授予單位】：北京協和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55
【圖文】：

結果逡逑１．細胞生長形態(tài)觀察逡逑Ｃｔｒｌ組、ＦＢ組與Ｔ組細胞形態(tài)見圖１－１至圖１－５。逡逑圖１－１顯示Ｃｔｒｌ組細胞具有典型的角質形成細胞的形態(tài)，細胞呈多邊形，連成逡逑片狀，呈典型的鋪路石樣。逡逑圖１－２顯示ＦＢ組細胞具有典型的成纖維細胞形態(tài)，細胞呈長梭形，胞核較大，逡逑呈扁卵圓形。逡逑圖１－３至圖１－５為Ｔ組細胞在經過ＴＧＦ－ｐｉ處理后１天、３天和５天的形態(tài)變化。逡逑可Ｗ觀察到Ｔ組細胞第１天的形態(tài)與Ｃｔｒｌ組相似，即細胞呈多邊形，連成片狀，具逡逑有典型的鋪路石樣。第３天細胞形態(tài)開始發(fā)生變化，細胞彼此之間的聯系變得疏松，逡逑細胞形態(tài)變得狹長，形態(tài)介于ＨａＣａＴ細胞與成纖維細胞么間，胞漿豐富，呈分泌型。逡逑圖１－５顯示Ｔ組細胞經過５天的ＴＧＦ－ｐｉ處理后，形態(tài)基本同成纖維細胞，呈現長逡逑梭形

ＲＴ巧組：第１、３天分別對ＲＴ＋Ｔ－ｌｄ和ＲＴ＋Ｔ－３ｄ亞組細胞進斤劃痕實驗，在逡逑劃痕后２４小時和４８小時分別觀察細胞遷移情況。逡逑如圖４所示，使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ邋ｖ６．０軟件打開圖片后，設定放大倍數５０％，逡逑隨機劃�。稐l水平線，計算細胞間距離的均值，Ｗ加間距為參照，計算２４ｈ和４８ｈ逡逑間距與Ｏｈ間距相比的百分比。使用ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｐｒｉｓｍ５作．０１軟件進行統(tǒng)計學分析（使逡逑用雙尾非配對ｔ檢驗）和作圖。逡逑圖４使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ計算劃痕間距舉例逡逑３９逡逑

圖６細胞遷移情況

【共引文獻】

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3 趙榮志;吳志浩;周清華;;上皮細胞間質化與腫瘤的轉移[J];中國肺癌雜志;2011年07期

4 楊帆;姜蕊;韓俊慶;王勝昔;宋偉;;TGF-β1對AGS細胞上皮-間充質轉化及體外侵襲的影響[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2010年02期

5 楊丞;饒翔;丁莉利;王明華;;順鉑誘導宮頸癌細胞上皮間質轉化的研究[J];重慶醫(yī)學;2013年15期

6 馮望德;伍嬌嬌;;上皮間質轉化與宮頸癌的研究進展[J];安徽醫(yī)學;2013年07期

7 蔣國燕;李瑾;施露;曹進;張獻全;;RNAi沉默MACC1基因表達抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖和遷移[J];第三軍醫(yī)大學學報;2013年18期

8 唐艷麗;邵予;孫萬邦;;基質金屬蛋白酶在類風濕關節(jié)炎免疫致病機制及信號轉導中的研究進展[J];廣東醫(yī)學;2013年17期

9 張建蓉;佘強;;上皮-間質轉化在心臟發(fā)育和損傷中的作用[J];國際心血管病雜志;2013年05期

10 張濤;王學敏;榮新洲;樊桂成;李松澤;劉思容;;增生性瘢痕與萎縮性瘢痕中c-fos mRNA、c-jun mRNA及MMP1、TIMP1表達的研究[J];廣州醫(yī)藥;2013年06期

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2 過建春;包劍鋒;;TGF-β_1基因多態(tài)性對慢性HBV感染者肝纖維化的影響[A];浙江省中醫(yī)藥學會肝病分會2008年學術年會暨中西醫(yī)結合抗肝纖維化研究進展研討會（資料匯編）[C];2008年

3 過建春;包劍鋒;;TGF-β_1基因多態(tài)性對慢性乙肝肝纖維化的影響[A];浙江省中醫(yī)藥學會肝病分會2008年學術年會暨中西醫(yī)結合抗肝纖維化研究進展研討會（資料匯編）[C];2008年

4 姚宇鋒;龔建平;秦建偉;唐金海;;ALDH1和上皮間質轉化相關蛋白在三陰性乳腺癌中的表達及其相關性[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

5 譚亞軍;侯啟明;張庶民;;腫瘤干細胞研究的問題和進展[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

6 陳妮;周力;洪陽;;腫瘤微環(huán)境與腫瘤細胞轉移的研究進展[A];第十七屆西南地區(qū)消化病學術會議暨2014貴州省消化病及消化內鏡學術年會論文匯編[C];2014年

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4 殷娟;IL-8促進人卵巢癌細胞遷移的分子機制及TMP對其的干預作用[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

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9 伍建業(yè);整合素-β_1和鈣黏附素-E在肝纖維化中的表達及白黎蘆醇干預作用研究[D];同濟大學;2005年

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本文編號：2800764