【摘要】：研究背景：瘢痕疙瘩是一種病理性瘢痕,在臨床上非常多見,具有發(fā)紅、瘙癢、刺痛和燒灼感等顯著的臨床表現(xiàn),給患者帶來很大的生理和心理負擔(dān)。瘢痕疙瘩的發(fā)病機制并不明確,最新研究發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩的發(fā)生可能與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān),瘢痕疙瘩中的成纖維細胞可能是角質(zhì)形成細胞經(jīng)EMT轉(zhuǎn)化而來。瘢痕疙瘩的治療方法眾多,但無論是手術(shù)還是單一無創(chuàng)治療的復(fù)發(fā)率均較高。手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后放療的方法是治療瘢痕疙瘩最有效的方法。目前尚無研究從EMT角度出發(fā)探索術(shù)后放療抑制瘢痕疙瘩復(fù)發(fā)的作用機制。研究目的：探索放療對人角質(zhì)形成細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。研究方法：對人永生化角質(zhì)形成細胞HaCaT細胞給予10ng/ml TGF-β1處理,以未經(jīng)處理的角質(zhì)形成細胞作為陰性對照,以從手術(shù)標(biāo)本原代培養(yǎng)得到的成纖維細胞作為陽性對照,觀察細胞的形態(tài)變化,測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質(zhì)化標(biāo)志物的表達,確認是否成功構(gòu)建EMT模型。對一組HaCaT細胞進行9Gy放療,對另一組HaCaT細胞同時給予9Gy放療與10ng/ml TGF-β1處理。觀察陰性對照組、放療組與放療聯(lián)合TGF-β組細胞的形態(tài)變化,進行劃痕實驗檢測細胞的遷移能力,測定處理后1天、3天與7天上皮化與間質(zhì)化標(biāo)志物的表達。結(jié)果：1.對HaCaT細胞進行10ng/ml TGF-β1處理后,觀察到細胞形態(tài)從典型的角質(zhì)形成細胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃瞥衫w維細胞的形態(tài)；而放療后細胞形態(tài)未發(fā)生明顯的變化,同時細胞死亡速率加快。2.劃痕實驗結(jié)果顯示未經(jīng)處理的HaCaT細胞遷移能力最弱,在TGF-1誘導(dǎo)下發(fā)生了EMT的細胞遷移能力最強,對HaCaT細胞行放療之后,細胞的遷移能力略有增強,對HaCaT行放療與TGF-β1雙重處理之后,細胞的總體遷移能力與單純行TGF-β1處理相似,略弱于后者。3.經(jīng)過TGF-β1處理后1天、3天和7天細胞的上皮化標(biāo)志物ZO-1與CDH1的基因表達和蛋白表達顯著下調(diào)(P0.05),間質(zhì)化標(biāo)志物CDH2的基因表達與蛋白表達上調(diào),FN1的基因表達顯著上調(diào)(P0.05),Vimentin的蛋白表達上調(diào)。4.放療后培養(yǎng)1天與3天的細胞中上皮化標(biāo)志物的基因表達和蛋白表達均上調(diào),間質(zhì)化標(biāo)志物的基因表達和蛋白表達下調(diào)。5.放療聯(lián)合TGF-β1組細胞除了E-Cadherin蛋白表達之外,其余上皮化標(biāo)志物的基因表達和蛋白表達均高于TGF-β1組；間質(zhì)化標(biāo)志物除了CDH2的基因表達與TGF-β1組相似,其余標(biāo)志物的基因表達和蛋白表達低于TGF-β1組。結(jié)論：TGF-β1成功地構(gòu)建了HaCaT細胞EMT環(huán)境。放療對HaCaT細胞EMT的影響總體以抑制為主。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55
【圖文】：

結(jié)果逡逑１．細胞生長形態(tài)觀察逡逑Ｃｔｒｌ組、ＦＢ組與Ｔ組細胞形態(tài)見圖１－１至圖１－５。逡逑圖１－１顯示Ｃｔｒｌ組細胞具有典型的角質(zhì)形成細胞的形態(tài)，細胞呈多邊形，連成逡逑片狀，呈典型的鋪路石樣。逡逑圖１－２顯示ＦＢ組細胞具有典型的成纖維細胞形態(tài)，細胞呈長梭形，胞核較大，逡逑呈扁卵圓形。逡逑圖１－３至圖１－５為Ｔ組細胞在經(jīng)過ＴＧＦ－ｐｉ處理后１天、３天和５天的形態(tài)變化。逡逑可Ｗ觀察到Ｔ組細胞第１天的形態(tài)與Ｃｔｒｌ組相似，即細胞呈多邊形，連成片狀，具逡逑有典型的鋪路石樣。第３天細胞形態(tài)開始發(fā)生變化，細胞彼此之間的聯(lián)系變得疏松，逡逑細胞形態(tài)變得狹長，形態(tài)介于ＨａＣａＴ細胞與成纖維細胞么間，胞漿豐富，呈分泌型。逡逑圖１－５顯示Ｔ組細胞經(jīng)過５天的ＴＧＦ－ｐｉ處理后，形態(tài)基本同成纖維細胞，呈現(xiàn)長逡逑梭形

ＲＴ巧組：第１、３天分別對ＲＴ＋Ｔ－ｌｄ和ＲＴ＋Ｔ－３ｄ亞組細胞進斤劃痕實驗，在逡逑劃痕后２４小時和４８小時分別觀察細胞遷移情況。逡逑如圖４所示，使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ邋ｖ６．０軟件打開圖片后，設(shè)定放大倍數(shù)５０％，逡逑隨機劃�。稐l水平線，計算細胞間距離的均值，Ｗ加間距為參照，計算２４ｈ和４８ｈ逡逑間距與Ｏｈ間距相比的百分比。使用ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｐｒｉｓｍ５作．０１軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析（使逡逑用雙尾非配對ｔ檢驗）和作圖。逡逑圖４使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ計算劃痕間距舉例逡逑３９逡逑

圖６細胞遷移情況

【共引文獻】

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本文編號：2800764