【摘要】：背景和目的宮頸癌是僅次于乳腺癌的女性常見惡性腫瘤,侵襲轉(zhuǎn)移影響是宮頸癌患者療效和預(yù)后的關(guān)鍵因素。因此,探索抑制宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的方法對(duì)于改善宮頸癌患者的療效和生存質(zhì)量具有重要的意義。近年來,中藥的抗腫瘤作用越來越受到受到關(guān)注,黃芪多糖(astragalus polydsaccharide, APS)是黃芪的主要活性成分之一。越來越多的研究證實(shí)APS具有抗腫瘤活性。但是,APS的抗腫瘤作用機(jī)制尚未完全明了。目前,尚未見APS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞遷移侵襲能力抑制作用及相關(guān)機(jī)制的研究報(bào)道。本研究旨在探討APS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞遷移侵襲能力的抑制作用及相關(guān)機(jī)制,以期為APS在宮頸癌治療中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。方法1.提取APS并定量。2.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,實(shí)驗(yàn)組：200μg/mL的APS誘導(dǎo)48h的宮頸癌Hela細(xì)胞,對(duì)照組：不加藥的宮頸癌Hela細(xì)胞。3.通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)探討APS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞遷移侵襲能力的抑制作用。4.通過Western blotting方法觀察APS處理前后宮頸癌Hela細(xì)胞中鈣粘附蛋白E(E-cadherin)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、MMP-2等與腫瘤遷移侵襲相關(guān)基因蛋白水平表達(dá)的變化。結(jié)果1.制備的APS溶液的定量結(jié)果為53.623mg/mL。2.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞傷口愈合速度慢于對(duì)照組。對(duì)照組細(xì)胞傷口48h基本愈合,72h完全愈合；而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞傷口72h仍未愈合。3. Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組宮頸癌Hela細(xì)胞相比,實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲穿過transwell小室底膜的數(shù)量顯著減少(P0.05)。4. Western blotting結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞中E-cadherin蛋白水平的表達(dá)顯著高于對(duì)照組宮頸癌Hela細(xì)胞(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組宮頸癌Hela細(xì)胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平的表達(dá)差異均無顯著性(P0.05),但是,與對(duì)照組宮頸癌Hela細(xì)胞相比,實(shí)驗(yàn)組宮頸癌Hela細(xì)胞中MMP-2的活性形式顯著降低(P0.01),實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組宮頸癌Hela細(xì)胞中均未見MMP-9活性形式條帶。結(jié)論1.APS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的遷移和侵襲能力具有顯著的抑制作用。2. E-cadherin表達(dá)增加和MMP-2活性降低可能與APS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲能力的抑制作用有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【圖文】：

補(bǔ)體積至５０ｍＬ。上述溶液分別�。玻恚讨糜冢保担恚淘嚬苤校謩e加入５％苯獻(xiàn)溶液逡逑１．５ｍＬ和濃梳酸７．５ｍＬ，振搖５ｍｉｎ，置沸水浴中力口熱１５ｍｉｎ，冰浴中冷去口邋３０ｍｉｎ。分逡逑別測(cè)ＯＤ４９０ｎｍ吸光值（表１），做標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖１邋）。同上操作測(cè)制備的ＡＰＳ的ＯＤ４９０逡逑吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算制備的ＡＰＳ溶液的濃度。逡逑表１葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品ＯＤ４９０值（Ｊ±５）逡逑序號(hào)邐葡萄糖濃度（ｎｇ／ｍＬ）邐ＯＤ４９０均值逡逑１邐８邐０．１１７±０．００１逡逑２邐１６邐０．２３８±０．００３逡逑３邐２４邐（Ｕ；３２：ｔ０．００１逡逑４邐３２邐０．４６３±０．００２逡逑５邐４０邐０．５５４±０．００２逡逑６邐４８邐０．６７６±０．００３逡逑７邐５６邐０．７９２±0．00３逡逑１２逡逑

逑２．２．２邐Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ邋遷移實(shí)驗(yàn)逡逑Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖３，表２）：與對(duì)照組宮頸癌Ｈｅｌａ細(xì)胞相比，實(shí)逡逑驗(yàn)組宮頸癌Ｈｅｌａ細(xì)胞遷移穿過ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室底膜的數(shù)量顯著減少（Ｐ＜化０５）。逡逑渺淀扣．中ｆｔ！逡逑圖３邋Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果（結(jié)晶紫，４００Ｘ）逡逑１：對(duì)照}D；２；實(shí)驗(yàn)組逡逑表２邋ＡＰＳ對(duì)[卑齲澹歟嵯赴ㄒ頗芰Φ撓跋戾義戲腫櫬┕∈業(yè)啄は赴弒妒右埃ǎ

本文編號(hào)：2800302