【摘要】：背景和目的宮頸癌是僅次于乳腺癌的女性常見惡性腫瘤,侵襲轉(zhuǎn)移影響是宮頸癌患者療效和預(yù)后的關(guān)鍵因素。因此,探索抑制宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的方法對于改善宮頸癌患者的療效和生存質(zhì)量具有重要的意義。近年來,中藥的抗腫瘤作用越來越受到受到關(guān)注,黃芪多糖(astragalus polydsaccharide, APS)是黃芪的主要活性成分之一。越來越多的研究證實APS具有抗腫瘤活性。但是,APS的抗腫瘤作用機制尚未完全明了。目前,尚未見APS對宮頸癌Hela細胞遷移侵襲能力抑制作用及相關(guān)機制的研究報道。本研究旨在探討APS對宮頸癌Hela細胞遷移侵襲能力的抑制作用及相關(guān)機制,以期為APS在宮頸癌治療中的應(yīng)用提供科學依據(jù)。方法1.提取APS并定量。2.根據(jù)預(yù)實驗的結(jié)果,實驗組：200μg/mL的APS誘導(dǎo)48h的宮頸癌Hela細胞,對照組：不加藥的宮頸癌Hela細胞。3.通過劃痕實驗、Transwell遷移和侵襲實驗探討APS對宮頸癌Hela細胞遷移侵襲能力的抑制作用。4.通過Western blotting方法觀察APS處理前后宮頸癌Hela細胞中鈣粘附蛋白E(E-cadherin)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、MMP-2等與腫瘤遷移侵襲相關(guān)基因蛋白水平表達的變化。結(jié)果1.制備的APS溶液的定量結(jié)果為53.623mg/mL。2.劃痕實驗結(jié)果顯示：實驗組宮頸癌Hela細胞傷口愈合速度慢于對照組。對照組細胞傷口48h基本愈合,72h完全愈合；而實驗組細胞傷口72h仍未愈合。3. Transwell遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示：與對照組宮頸癌Hela細胞相比,實驗組宮頸癌Hela細胞遷移和侵襲穿過transwell小室底膜的數(shù)量顯著減少(P0.05)。4. Western blotting結(jié)果顯示：實驗組宮頸癌Hela細胞中E-cadherin蛋白水平的表達顯著高于對照組宮頸癌Hela細胞(P0.01)。實驗組和對照組宮頸癌Hela細胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平的表達差異均無顯著性(P0.05),但是,與對照組宮頸癌Hela細胞相比,實驗組宮頸癌Hela細胞中MMP-2的活性形式顯著降低(P0.01),實驗組和對照組宮頸癌Hela細胞中均未見MMP-9活性形式條帶。結(jié)論1.APS對宮頸癌Hela細胞的遷移和侵襲能力具有顯著的抑制作用。2. E-cadherin表達增加和MMP-2活性降低可能與APS對宮頸癌Hela細胞遷移和侵襲能力的抑制作用有關(guān)。
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【圖文】：

補體積至５０ｍＬ。上述溶液分別�。玻恚讨糜冢保担恚淘嚬苤�，分別加入５％苯獻溶液逡逑１．５ｍＬ和濃梳酸７．５ｍＬ，振搖５ｍｉｎ，置沸水浴中力口熱１５ｍｉｎ，冰浴中冷去口邋３０ｍｉｎ。分逡逑別測ＯＤ４９０ｎｍ吸光值（表１），做標準曲線（圖１邋）。同上操作測制備的ＡＰＳ的ＯＤ４９０逡逑吸光值，根據(jù)標準曲線計算制備的ＡＰＳ溶液的濃度。逡逑表１葡萄糖標準品ＯＤ４９０值（Ｊ±５）逡逑序號邐葡萄糖濃度（ｎｇ／ｍＬ）邐ＯＤ４９０均值逡逑１邐８邐０．１１７±０．００１逡逑２邐１６邐０．２３８±０．００３逡逑３邐２４邐（Ｕ；３２：ｔ０．００１逡逑４邐３２邐０．４６３±０．００２逡逑５邐４０邐０．５５４±０．００２逡逑６邐４８邐０．６７６±０．００３逡逑７邐５６邐０．７９２±0．00３逡逑１２逡逑

逑２．２．２邐Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ邋遷移實驗逡逑Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實驗結(jié)果顯示（圖３，表２）：與對照組宮頸癌Ｈｅｌａ細胞相比，實逡逑驗組宮頸癌Ｈｅｌａ細胞遷移穿過ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室底膜的數(shù)量顯著減少（Ｐ＜化０５）。逡逑渺淀扣．中ｆｔ！逡逑圖３邋Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實驗結(jié)果（結(jié)晶紫，４００Ｘ）逡逑１：對照}D；２；實驗組逡逑表２邋ＡＰＳ對[卑齲澹歟嵯赴ㄒ頗芰Φ撓跋戾義戲腫櫬┕∈業(yè)啄は赴弒妒右埃ǎ

本文編號：2800302