發(fā)布時間：2020-08-21 21:37

【摘要】：目的:本課題旨在研究肺癌組織來源的間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)對肺癌細胞系生物學(xué)特征的影響,并初步探究肺癌相關(guān)MSCs促進肺癌轉(zhuǎn)移的機制。方法:無菌條件下收集新鮮切除的肺癌患者瘤組織分離肺癌相關(guān)MSCs,并進行體外培養(yǎng)傳代及鑒定。慢病毒感染建立穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白(CopGFP)的人肺腺癌細胞株A549和H1299。體外,Brdu法檢測肺癌相關(guān)MSCs對A549和H1299增殖的影響;劃痕實驗檢測肺癌相關(guān)MSCs對A549和H1299遷移能力的影響;Transwell法檢測肺癌相關(guān)MSCs對A549和H1299侵襲能力的影響。體內(nèi),檢測肺癌相關(guān)MSCs有無致瘤性;A549細胞按高、中、低三種細胞數(shù)進行裸鼠皮下接種,利用小動物活體成像技術(shù)觀察肺癌相關(guān)MSCs對A549生長的影響;尾靜脈注射A549細胞,利用小動物活體成像技術(shù)觀察肺癌相關(guān)MSCs對A549轉(zhuǎn)移能力的影響。qPCR和Western blotting檢測A549與肺癌相關(guān)MSCs共培養(yǎng)后的A549細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)指標表達的變化;qPCR檢測A549與肺癌相關(guān)MSCs共培養(yǎng)后A549細胞干性指標(CD133、CD44、NANOG、SOX2、OCT4)變化;ELISA法分別檢測A549和肺癌相關(guān)MSCs基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2的分泌水平,qPCR檢測A549與肺癌相關(guān)MSCs共培養(yǎng)后的MMP2變化,從而初步探究肺癌相關(guān)MSCs促進肺癌轉(zhuǎn)移的機制。結(jié)果:成功從肺癌患者瘤組織中分離并培養(yǎng)肺癌相關(guān)MSCs,經(jīng)鑒定其具有多向分化潛能,且表面標志表達符合國際認定標準。經(jīng)慢病毒感染成功建立穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白的人肺腺癌細胞株A549-CopGFP和H1299-CopGFP。體外,肺癌相關(guān)MSCs對肺癌細胞增殖無明顯影響,但可明顯提高肺癌細胞的遷移能力和侵襲能力。體內(nèi),肺癌相關(guān)MSCs不但能夠促進肺癌細胞的生長,提高肺癌細胞在體內(nèi)的成瘤率,還能促進肺癌細胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移。進一步研究發(fā)現(xiàn),肺癌細胞與腫瘤相關(guān)MSCs共培養(yǎng)后,肺癌細胞EMT指標(轉(zhuǎn)錄因子Snail和Slug)在RNA和蛋白水平上明顯增加,干性指標(CD133、CD44、NANOG、SOX2、OCT4)在RNA水平上明顯增加。肺癌細胞表達MMP2較低,但肺癌相關(guān)MSCs高表達MMP2;腫瘤相關(guān)MSCs能夠促進MMP2 RNA水平的表達。結(jié)論:本課題成功分離并鑒定了肺癌組織來源的肺癌相關(guān)MSCs,首次通過體內(nèi)外實驗明確肺癌相關(guān)MSCs能夠促進肺癌細胞的轉(zhuǎn)移,這一作用與肺癌相關(guān)MSCs促進肺癌細胞EMT轉(zhuǎn)化、增強干性以及肺癌相關(guān)MSCs高分泌MMP2有關(guān)。本研究有力證明了肺癌相關(guān)MSCs與腫瘤細胞的相互作用,為深入研究間充質(zhì)干細胞與腫瘤及其微環(huán)境之間的相互聯(lián)系提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

固定成軟骨細胞球，進行石蠟包于組化罐中進行脫蠟和脫水，后，完成后將切片放于自來水沖洗分離所得細胞形成的成軟骨切片染色效果（染色部分是軟骨組織 的形態(tài)特點養(yǎng) 3 天時，于顯微鏡下進行觀壁細胞，呈長梭形；約 14 天左化傳代，約 1 周左右細胞達到 ，傳代后細胞呈典型成纖維細胞行排列（圖 1）。

培養(yǎng) 3 天時，于顯微鏡下進行觀察發(fā)貼壁細胞，呈長梭形；約 14 天左右，消化傳代，約 1 周左右細胞達到 80%代，傳代后細胞呈典型成纖維細胞狀平行排列（圖 1）。圖 1 肺癌相關(guān) MSCs 的細胞形態(tài)（10s 的生長曲線分離所得細胞的生長曲線呈 S 型，細4~48h 的潛伏期，細胞進入快速生長期，細胞的增殖及生長趨勢放緩，進入

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、肺癌相關(guān) MSCs 的分離、培養(yǎng)及鑒定1.2.3 肺癌相關(guān) MSCs 的表型特點流式檢測該分離所得細胞表面標志物結(jié)果顯示，該細胞表達 CD73（99.8%）、CD90（99.8%）、CD105（57.1%）和 CD166（98.0%），不表達 CD14、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR（圖 3）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李梅;武毅;劉仁旺;郭麗麗;徐婷婷;陳軍;徐嵩;;間充質(zhì)干細胞對非小細胞肺癌細胞增殖和侵襲能力的初步探討[J];中國肺癌雜志;2015年11期

本文編號：2799890