發(fā)布時間：2020-08-10 17:06

【摘要】：目的:1.篩選腎透明細胞癌中差異表達的miRNA,驗證miR-9-5p在腎透明細胞癌中低表達并鑒定其臨床價值。2.探索miR-9-5p對體外腎癌細胞生物學特性的影響。3.預測miR-9-5p的作用靶點并初步探索其相關機制。4.探索miR-9-5p在腎透明細胞癌患者血清外泌體中的表達情況。方法:1.通過查閱文獻并篩選腎透明細胞癌中表達差異的miRNA,運用熒光qR T-PCR測定miR-9-5p在44對腎透明細胞癌組織及其癌旁組織、腎透明細胞癌細胞系786-O和SN12-PM6中的表達情況,應用統(tǒng)計學分析其臨床意義。2.構建對照質粒pFlag-cmv2及miR-9-5p表達質粒phsa-miR-9,分別轉染786-O和SN12-PM6細胞,構建高表達miR-9-5p的腎癌細胞模型,并通過qR TPCR分析其轉染后的表達情況。3.采用CCK8、transwell實驗分析miR-9-5p上調后786-O細胞在增殖、侵襲和轉移能力上的變化。4.通過Targetscan等多個靶點預測軟件篩選miR-9-5p的靶點,預測其靶基因,應用qR T-PCR、Western blot技術檢測所預測靶基因在腎透明細胞癌組織及其癌旁組織、轉染后的786-O和SN12-PM6細胞中的表達情況。5.通過超速離心法分離4例腎透明細胞癌患者和4例健康對照者的血清外泌體并以透射電子顯微鏡觀察,采用HiSeq深度測序檢測和分析外泌體中的miRNA表達譜,運用生物信息技術分析miRNA表達譜。6.采用熒光q RT-PCR測定10例腎透明細胞癌患者和4例健康對照者的血清外泌體中miR-9-5p的表達情況。結果:1.根據文獻報道,高通量microarray分析腎透明細胞癌及其癌旁組織的miRNA表達譜結果顯示癌組織中miR-9-5p的表達下調7.6倍,且miR-9-5p在多種腫瘤中表達下調并具有一定的抑癌作用;qRT-PCR結果顯示miR-9-5p在93.2%(41/44)的腎透明細胞癌中明顯下調(p=0.00010.05),平均下調3.8倍,相對于癌旁正常組織,786-O和SN12-PM6細胞miR-9-5p的表達分別下調836.3倍和24.1倍;miR-9-5p的表達水平與腎透明細胞癌患者的性別、年齡、腫瘤分期、分級、大小均無統(tǒng)計學相關性。2.轉染phsa-miR-9后的786-O和SN12-PM6細胞miR-9-5p的表達顯著提高,分別為21610.3倍和4599.5倍。3.上調miR-9-5p的表達后,786-O細胞的增殖、侵襲和轉移能力明顯受到抑制。4.靶點預測軟件顯示CXCR4、NFκB1、FN1、Bcl-2的3’UTR上均分別有miR-9-5p種子序列的結合位點,四者在腎透明細胞癌組織中的mR NA表達水平升高,分別為癌旁組織的71倍、5.8倍、19.3倍和9.7倍,對應的蛋白水平表達也升高;CXCR4在高表達miR-9-5p的786-O和SN12-PM6細胞中表達下調明顯。5.4例腎透明細胞癌患者和4例健康對照者的血清外泌體測序結果顯示miR-9-5p在腎透明細胞癌患者血清外泌體中表達上調。6.10例腎透明細胞癌患者和4例健康對照者的血清外泌體的qR T-PCR結果顯示miR-9-5p在腎透明細胞癌患者血清外泌體中表達上調。結論:miR-9-5p在腎透明細胞癌中表達下調,其通過抑制腎癌細胞的增殖和轉移發(fā)揮抑癌基因的作用;CXCR4可能是miR-9-5p發(fā)揮功能的直接作用靶點,其在腎透明細胞癌組織中高表達可能是由于miR-9-5p的下調所致;腎透明細胞癌可能通過外泌體介導排出具有抑癌作用的miR-9-5p。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.11
【圖文】：

1644例中有41例癌組織表達低于癌旁正常組織，占93.2%（41/44），平均下調3.8倍。（圖1）相對于癌旁正常組織，786-O和SN12-PM6細胞miR-9-5p的表達分別下調836.3倍和24.1倍。（圖2）miRNA P-value Fold-changehsa-miR-141 4.11E-08 103.9907hsa-miR-200c 4.35E-06 99.78783hsa-miR-138 1.14E-06 22.829311hsa-miR-514 5.95E-04 18.36648hsa-miR-135a 0.037347153 13.173383hsa-miR-509-3p 3.74E-04 8.679166hsa-miR-9* 9.41E-04 8.520466hsa-miR-508-3p 0.003473291 7.8097095hsa-miR-124 0.004608731 7.624603hsa-miR-9 0.014416155 7.6159034表 1：文獻報道高通量microarray分析5對腎透明細胞癌及其癌旁組織的miRNA表達譜結果：癌組織中miR-9-5p表達下調7.6倍[18]。Table 1：Downregulation profle of miRNAs in 5 pairs of ccRCC and adjacent normaltissues，miR-9-5p was one of the remarkably downregulated miRNAs (7.6-fold)[18]圖 1：44對腎透明細胞癌患者的癌組織及其癌旁正常組織miR-9-5p的相對表達情況Fig 1: Expression of miR-9-5p in 44 pairs of ccRCC specimens and adjacent normaltissues（***P＜0.001）

44例中有41例癌組織表達低于癌旁正常組織，占93.2%（41/44），平均下調3.8倍。（圖1）相對于癌旁正常組織，786-O和SN12-PM6細胞miR-9-5p的表達分別下調836.3倍和24.1倍。（圖2）miRNA P-value Fold-changehsa-miR-141 4.11E-08 103.9907hsa-miR-200c 4.35E-06 99.78783hsa-miR-138 1.14E-06 22.829311hsa-miR-514 5.95E-04 18.36648hsa-miR-135a 0.037347153 13.173383hsa-miR-509-3p 3.74E-04 8.679166hsa-miR-9* 9.41E-04 8.520466hsa-miR-508-3p 0.003473291 7.8097095hsa-miR-124 0.004608731 7.624603hsa-miR-9 0.014416155 7.6159034表 1：文獻報道高通量microarray分析5對腎透明細胞癌及其癌旁組織的miRNA表達譜結果：癌組織中miR-9-5p表達下調7.6倍[18]。Table 1：Downregulation profle of miRNAs in 5 pairs of ccRCC and adjacent normaltissues，miR-9-5p was one of the remarkably downregulated miRNAs (7.6-fold)[18]圖 1：44對腎透明細胞癌患者的癌組織及其癌旁正常組織miR-9-5p的相對表達情況Fig 1: Expression of miR-9-5p in 44 pairs of ccRCC specimens and adjacent normaltissues（***P＜0.001）

3.2 miR-9-5p對腎透明細胞癌的臨床價值miR-9-5p的表達水平與腎透明細胞癌患者的性別、年齡、腫瘤分期、分級、大小均無統(tǒng)計學相關性。（表2和圖3）n % Mean±SEM(Normalized)PGenderM 24 54.5 0.2347±0.08497W 20 45.5 0.2987±0.1827 0.7389Age≤50 15 34.1 0.1123±0.04939>50 29 65.9 0.3422±0.139 0.2511TNM stageT1 38 86.4 0.2919±0.1082 0.6197aT2 3 6.8 0.09682±0.06718 0.7897bT3 3 6.8 0.075±0.03669 0.5810cFuhrman classificationⅠ/Ⅱ 36 81.8 0.2808±0.1126Ⅲ/Ⅳ 8 18.2 0.1872±0.11 0.7057Tumor diame

【參考文獻】

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1 王雪剛;楊劍斌;陳晨羲;趙松濤;許斌;陳斌;劉榮福;邢金春;;血清外泌體miR-210作為腎透明細胞癌非侵入性診斷生物標志物的研究[J];中華泌尿外科雜志;2017年09期

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1 牛燕燕;miR-9、miR-125b在喉鱗癌中的生物學功能研究[D];北京協和醫(yī)學院;2011年

本文編號：2788377