【摘要】：甲狀腺癌是常見(jiàn)的內(nèi)分泌惡性腫瘤,其患病率逐年增加,其中乳頭狀癌占80%以上,已危害身體健康,增加了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),是當(dāng)今關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。目前臨床常用的診斷及輔助檢查的方法有超聲診斷檢查、細(xì)針穿刺(FNA)細(xì)胞學(xué)檢查、血清甲狀腺素等。FNA細(xì)胞學(xué)檢查是目前臨床上區(qū)分甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的最有效手段,但在臨床中,約10%~20%的FNA細(xì)胞學(xué)難以做出準(zhǔn)確診斷。鑒別診斷和監(jiān)測(cè)手段的常規(guī)化一直是臨床上的一大難題。近年來(lái),利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),多種腫瘤早期診斷的研究取得了可喜的進(jìn)展,發(fā)現(xiàn)了一系列腫瘤相關(guān)蛋白和潛在的腫瘤標(biāo)記物并初步應(yīng)用于臨床。國(guó)內(nèi)外已有甲狀腺癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)了一些與甲狀腺癌相關(guān)的蛋白,然而這些成果尚處于初級(jí)階段,尚沒(méi)有可以應(yīng)用于臨床診斷的理想的腫瘤標(biāo)記物。大部分研究也未進(jìn)行良惡性腫瘤的鑒別分析,而且國(guó)內(nèi)外對(duì)甲狀腺癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究報(bào)道較少�；诩谞钕侔┑默F(xiàn)狀,首先對(duì)我院近幾年來(lái)甲狀腺癌發(fā)病情況作以回顧性分析。從性別、年齡、淋巴結(jié)情況及病理類(lèi)型構(gòu)成比等方面進(jìn)行比較分析。其次利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF MS)技術(shù)檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌患者、良性腫瘤和正常健康人血清中多肽,建立甲狀腺乳頭狀癌的診斷預(yù)測(cè)模型,隨后對(duì)差異血清多肽進(jìn)行分離、鑒定及功能預(yù)測(cè)分析。最后,采用蛋白質(zhì)譜成像原位分析甲狀腺乳頭癌蛋白質(zhì)的表達(dá),創(chuàng)建甲狀腺乳頭狀癌的蛋白離子成像圖。第一部分:甲狀腺癌臨床和病理學(xué)特點(diǎn)的回顧性分析回顧性分析2011年1月至2017年12月在濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的3567例甲狀腺結(jié)節(jié)病患者臨床病理資料。術(shù)后石蠟組織病理學(xué)顯示:1392例患者為良性甲狀腺腫瘤,2175例為甲狀腺癌患者,其中2135例為甲狀腺乳頭狀癌患者。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P0.05作為差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):1、甲狀腺良性腫瘤患者占所有甲狀腺結(jié)節(jié)病患者的39.02%,結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤是甲狀腺良性腫瘤的主要組成部分。2、甲狀腺癌病例數(shù)逐年增加,其中以乳頭狀癌的增加為主。3、男女患者性別比為1:3.22;2011年至2017年,甲狀腺癌患者性別比年間變化不大,年間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。男女高發(fā)年齡段均為30~59歲,男性平均年齡為44.83±11.91歲,女性平均年齡為45.69±10.98歲,男女發(fā)病的平均年齡相近(P0.05)。4、微小乳頭狀癌占乳頭狀癌的比例逐年上升(P0.05)。甲狀腺癌總的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為54.39%,年間變化無(wú)明顯差異(P0.05)。由此可以看出,甲狀腺良性腫瘤占甲狀腺疾病較大的比重,而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤是甲狀腺良性腫瘤的主要組成部分。甲狀腺乳頭狀癌的患病數(shù)量逐年增加,且乳頭狀微小癌的比例逐年上升。甲狀腺癌的性別構(gòu)成比及發(fā)病年齡年間并無(wú)明顯變化。雖然總的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高,但年間并無(wú)明顯差異。第二部分甲狀腺乳頭狀癌血清生物標(biāo)志物的篩選通過(guò)第一部分及來(lái)自不同研究人員對(duì)甲狀腺疾病的回顧性分析,我們發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌及良性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是甲狀腺疾病的主要病理類(lèi)型。為了更好的鑒別診斷甲狀腺乳頭狀癌,我們運(yùn)用弱陽(yáng)離子交換磁珠(MB-WCX)提取血清中的多肽/蛋白,MALID-TOF/TOF MS檢測(cè)52例甲狀腺乳頭狀癌(PTC)和48例非癌癥對(duì)照(18例良性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者和30例健康查體者)血清多肽/蛋白圖譜,應(yīng)用ClinProTools3.0質(zhì)譜軟件中的快速算法(Quick Classifier,QC)建立PTC與非癌癥對(duì)照的診斷預(yù)測(cè)模型。并用一個(gè)獨(dú)立的驗(yàn)證組(36例PTC患者及19例良性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者和13例健康查體者)驗(yàn)證診斷預(yù)測(cè)模型的診斷能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該診斷預(yù)測(cè)模型的識(shí)別能力(Recognition ability,RC)和交叉驗(yàn)證(cross validation,CV)分別為:90.95%和82.90%。通過(guò)獨(dú)立樣本的驗(yàn)證,該模型具有84.38%的敏感性和78.13%的特異性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)PTC患者組與對(duì)照組之間存在差異多肽峰97個(gè),其中6個(gè)多肽差異明顯(P0.05),且ROC曲線下的面積不小于0.75;4個(gè)峰m/z 5905.22、2671.17、1464.68、1738.92在兩組之間差異最大。因此基于MALDI-TOF MS技術(shù)建立的甲狀腺乳頭狀癌的診斷預(yù)測(cè)模型具有較高的敏感性和特異性,能夠較好的區(qū)分PTC患者和良性甲狀腺結(jié)節(jié)患者及健康人群。6個(gè)具有較高診斷能力的多肽具有成為鑒別診斷PTC生物標(biāo)志物的潛能。第三部分甲狀腺乳頭狀癌血清生物標(biāo)志物的鑒定為了進(jìn)一步了解這些差異多肽的序列及相應(yīng)蛋白質(zhì)的性質(zhì)、功能及在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病機(jī)制中的作用,應(yīng)用納升液相電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(nano-LC/ESI-MS/MS)系統(tǒng)對(duì)4個(gè)差異最明顯的多肽進(jìn)行分離鑒定。首先取30個(gè)差異峰高表達(dá)的樣本,運(yùn)用MB-WCX富集多肽。收集富集的多肽液,運(yùn)用nano-LC-MS/MS進(jìn)行分離鑒定,數(shù)據(jù)分析軟件BioworksBrowser3.3.1進(jìn)行Sequest~(TM)(IPI Human(3.45)搜庫(kù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),峰位于m/z 2671.17和1464.68處的多肽質(zhì)譜分析確定其氨基酸序列為“K.SYKMADEAGSEADHEGTHSTKRGHA.K”和“A.DSGEGDFLAEGGGVR.G”,通過(guò)搜庫(kù)發(fā)現(xiàn)都為血纖維蛋白原a鏈(Fibrinogen alpha chain)上的肽段。峰m/z1738.92的氨基酸序列為“R.NGFKSHALQLNNRQI.R”,搜庫(kù)發(fā)現(xiàn)為補(bǔ)體C4A/B的肽段;而峰在m/z 5905.22處的多肽未被鑒定出,但通過(guò)檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)其也為纖維蛋白原a鏈上的一段肽段。因此,血纖維蛋白原a鏈和補(bǔ)體C4A/B上的肽段可能是潛在的甲狀腺乳頭狀癌的特異性分子標(biāo)志物而有望應(yīng)用于血液學(xué)的檢測(cè)。第四部分甲狀腺乳頭狀癌組織MALDI質(zhì)譜成像原位蛋白質(zhì)表達(dá)分析在本研究中,我們通過(guò)MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜成像17例甲狀腺乳頭狀癌組織、15例癌旁正常組織及5例腺瘤組織,獲得不同組織的蛋白圖譜,把MALDI MSI圖譜輸入到SCiLS Lab(2014b)軟件(質(zhì)譜成像分析軟件)中,比較來(lái)自不同組織的平均譜圖。Kruskal-Wallis檢驗(yàn)癌組織和腺瘤組織與癌旁正常組織之間的蛋白峰。發(fā)現(xiàn)m/z9278.369,4945.61,6847.11和4614.838的蛋白分子在不同組織中呈現(xiàn)不同的表達(dá)且具有明顯差異(P0.001)。m/z 9278.369和4945.61蛋白分子富集于癌旁組織區(qū)域;m/z4614.838蛋白分子在腺瘤組織區(qū)最為豐富;而m/z6847.11蛋白分子特異地表達(dá)于癌組織區(qū)域。利用這4個(gè)差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜成像。從質(zhì)譜成像圖中可以看出,不同質(zhì)荷比的蛋白分子在甲狀腺組織中的分布明顯不同。這項(xiàng)研究顯示了MALDI MSI在分子水平上分析組織冷凍切片的臨床應(yīng)用。不同質(zhì)荷比的蛋白質(zhì)分子在甲狀腺組織中分布的豐度及區(qū)域明顯不同,那么這些在特定組織中差異表達(dá)的蛋白分子有望發(fā)展成為鑒別甲狀腺乳頭狀癌、腺瘤與癌旁組織的潛在標(biāo)志物。而且創(chuàng)建的不同蛋白離子的質(zhì)譜成像圖,可以發(fā)現(xiàn)腫瘤的邊界,明確腫瘤的進(jìn)展,為臨床病理診斷提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。同時(shí)可以建立組織病理與質(zhì)譜成像相補(bǔ)充的系統(tǒng)診斷方法來(lái)解決臨床病理診斷中的難題。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R736.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李曉靜;蔣玲;婁萍萍;;甲狀腺癌臨床及病理學(xué)特點(diǎn)的回顧性分析[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2013年12期

2 孫嘉偉;許曉君;蔡秋茂;許燕君;顧江;;中國(guó)甲狀腺癌發(fā)病趨勢(shì)分析[J];中國(guó)腫瘤;2013年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 吳艷樂(lè);甲狀腺癌臨床和病理特點(diǎn)的回顧性分析[D];華中科技大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2788043