【摘要】：全反式維甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)耐藥是急性早幼粒細胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)治療中的一大難題。本研究發(fā)現(xiàn),達沙替尼(dasatinib)可協(xié)同ATRA誘導ATRA耐藥的APL細胞系NB4-R1和NB4-R2分化。兩藥聯(lián)合可活化RAF-1、MEK和ERK,并增強ATRA對PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白的上調(diào)作用。MEK特異性抑制劑U0126和RAF-1特異性抑制劑sorafenib tosylate均可阻斷兩藥聯(lián)合誘導的細胞分化、ERK活化以及C/EBPs和PU.1蛋白水平的上調(diào)。此外,sorafenib tosylate尚可抑制MEK活化。然而,兩藥聯(lián)合并不增強RAF-1經(jīng)典的上游分子——Ras活性。Ras的特異性阻斷劑不抑制兩藥聯(lián)合誘導的細胞分化和MEK活化。由此證實,兩藥聯(lián)合通過Ras非依賴的RAF-1/MEK/ERK,調(diào)控C/EBPs和PU.1的蛋白水平,誘導細胞分化。鑒于Src家族激酶(Src family kinase,SFK)和粒細胞分化呈負相關(guān)以及dasatinib可抑制SFK,我們進一步研究SFK抑制和RAF-1活化的關(guān)系,以明確RAF-1的上游分子。研究證實,在RAF-1活化前3小時,dasatinib即可抑制NB4-R1和NB4-R2細胞系中主要活化的SFK—Lyn的活性,并伴隨RAF-1的抑制性位點絲氨酸259(S259)的去磷酸化。另一種SFK抑制劑——PP2不僅抑制Lyn,還可模擬dasatinib,即它和ATRA聯(lián)合可誘導細胞分化并使RAF-1 S259去磷酸化。由此說明,通過抑制Lyn,可去除RAF-1 S259的磷酸化,啟動RAF-1活化,最終誘導細胞分化。綜上所述,dasatinib和ATRA聯(lián)合通過抑制Lyn,使RAF-1 S259去磷酸化,激活RAF-1/MEK/ERK,調(diào)控C/EBPs和PU.1的蛋白水平,最終誘導細胞分化。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R733.71
【圖文】：

的作用濃度均為ｌｕｍｏｌ／１。為了觀察劑量依賴效應，我們在ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２細胞中另設了逡逑較低劑量的達沙替尼組，分別為0．５ｕｍｏｌ／ｌ和ｌｕｍｏｌ／１。由于ＡＴＲＡ和達沙替尼均以ＤＭＳＯ配逡逑置，故對照組即用相座劑量的ＤＭＳＯ作為溶劑對照。如圖１、２所示，與對照組相比，ＡＴＲＡ逡逑單藥或不同劑量的達沙替尼單獨作用可輕度抑制ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２細胞增殖；與達沙替尼逡逑或ＡＴＲＡ單獨處理相比，達沙替尼與ＡＴＲＡ聯(lián)合應用可明顯抑制ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２細胞增逡逑殖，且呈時間和劑量依賴的效應。以上處理均不影響ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２的細胞活力。逡逑■Ｉ邋４０ｉ邋＋邋９ＭＳ。邐１００－ｌ邐＿逡逑0邋＋邋ＲＡ邐一邐？邐１邐？邋１邋１逡逑５．邋３０－邋＾邋0－５Ｄ邐Ｊ邐＾８０＇邋－邋ＤＭＳＯ逡逑ＮＢ４－Ｒ１邋？邐２０－邐＾邋０．５Ｄ＋Ｒ邐＝邋６0＇邐Ｚ邐0邋５Ｄ逡逑１邐＾邋１Ｄ＋Ｒ邐－ｇ邋４０－邐＾邐１0逡逑＝１０－邐｜邋00邐－邐０．５Ｄ＋Ｒ逡逑＝一＞邋２０－邋＋邋１Ｄ＋Ｒ逡逑Ｏ邋°０邐１邐２邐３邐４邐５邋ｄａｙｓ邋°0邐１邐２邐３邐４邐５邋ｄａｙｓ逡逑圖１邋達沙替尼（Ｄ）和／或ＡＴＲＡ（ＲＡ）對ＮＢ４－Ｒ１細胞增殖和活力的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄａｓａｔｉｎｉｂ（Ｄ）邋ａｎｄ／ｏｒ邋ＡＴＲＡ（ＲＡ）邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ＮＢ４－逡逑Ｒ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑１３逡逑

ＮＢ４－Ｒ１的細胞周期分布，而ｌｕｍｏｌ／ｌ、２ｕｍｏｌ／ｌ的達沙替尼對ＮＢ４－Ｒ２細胞有輕度Ｇ０／Ｇ１阻滯逡逑作用；與達沙替尼單藥相比，達沙替尼與ＡＴＲＡ的聯(lián)合對兩種細胞均有明顯的Ｇ０／Ｇ１阻滯作逡逑用，且呈劑量依賴效應（圖３、圖４）。逡逑ＤＭＳＯ邐０．５Ｄ邐１Ｄ逡逑Ｇ０＿／Ｇ１：４１．１４％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：３７．１２％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：４０．４８％逡逑８－邐ｊ邋Ｓ：４０．０３％邐ｊ邋Ｓ：４５．０８％邐Ｉ；邋５：４２．２９％逡逑｜Ｇ２／Ｍ：１８．８３％邋ｔ邐ｉＧ２／Ｍ：１７．７９％邋ｓ－邐｜Ｇ２／Ｍ：１７．２３％逡逑－ｉ：邋Ｉ邋Ｉ－邋［邐１＾邐１逡逑＂，，逡逑■ｆｃ邋－Ｔ－ＪＪ邋Ｊ邋－ＴＪ邋Ｍ邐��？：？邋？邋Ｋ邐ｔｆｊ＊邋１Ｂ邐？Ｊ邋＊邋？邐１？＾邐？邋▲邋ｉ．逡逑ＪＮｍ－Ｋｌ邋＾邐Ｇ０／Ｇ１：３４．９４％邋ｄ邐Ｇ０／Ｇｌ：４５．０６％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：６１．１１％逡逑ｊＳ：４１．１８％邐Ｓ：３７．０７％邋ｌｉ邐Ｓ：２６Ｊ６％逡逑ｉ－邐｜Ｇ２／Ｍ：２３．８８％邐ｉＧ２／Ｍ：１７．８７％邋＾邐Ｉｇ２／Ｍ：１１１３％逡逑１邋，邋＾邋＾逡逑丨．．…ｙ邋＇＇－＂ｉ＂邋＂Ｆ邋？＇ｉ＇■邋■邋ｒ邋■邋？邐１＂邋＂ｒ邋１邋＇ｒ邐（Ｊ逡逑ＰＩ逡逑圖３邋達沙替尼（Ｄ）和／或ＡＴＲＡ（ＲＡ）對ＮＢ４＿Ｒ１細胞周期的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄａｓａｔｉｎｉｂ（Ｄ）邋ａｎｄ／ｏｒ邋ＡＴＲＡ（ＲＡ）邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｃｅｌｌ邋ｃｙｃｌｅ邋ｏｆ邋ＮＢ４－Ｒ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑１４逡逑

ＮＢ４－Ｒ１的細胞周期分布，而ｌｕｍｏｌ／ｌ、２ｕｍｏｌ／ｌ的達沙替尼對ＮＢ４－Ｒ２細胞有輕度Ｇ０／Ｇ１阻滯逡逑作用；與達沙替尼單藥相比，達沙替尼與ＡＴＲＡ的聯(lián)合對兩種細胞均有明顯的Ｇ０／Ｇ１阻滯作逡逑用，且呈劑量依賴效應（圖３、圖４）。逡逑ＤＭＳＯ邐０．５Ｄ邐１Ｄ逡逑Ｇ０＿／Ｇ１：４１．１４％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：３７．１２％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：４０．４８％逡逑８－邐ｊ邋Ｓ：４０．０３％邐ｊ邋Ｓ：４５．０８％邐Ｉ；邋５：４２．２９％逡逑｜Ｇ２／Ｍ：１８．８３％邋ｔ邐ｉＧ２／Ｍ：１７．７９％邋ｓ－邐｜Ｇ２／Ｍ：１７．２３％逡逑－ｉ：邋Ｉ邋Ｉ－邋［邐１＾邐１逡逑＂，，逡逑■ｆｃ邋－Ｔ－ＪＪ邋Ｊ邋－ＴＪ邋Ｍ邐��？：？邋？邋Ｋ邐ｔｆｊ＊邋１Ｂ邐？Ｊ邋＊邋？邐１？＾邐？邋▲邋ｉ．逡逑ＪＮｍ－Ｋｌ邋＾邐Ｇ０／Ｇ１：３４．９４％邋ｄ邐Ｇ０／Ｇｌ：４５．０６％邋丨邐Ｇ０／Ｇ１：６１．１１％逡逑ｊＳ：４１．１８％邐Ｓ：３７．０７％邋ｌｉ邐Ｓ：２６Ｊ６％逡逑ｉ－邐｜Ｇ２／Ｍ：２３．８８％邐ｉＧ２／Ｍ：１７．８７％邋＾邐Ｉｇ２／Ｍ：１１１３％逡逑１邋，邋＾邋＾逡逑丨．．…ｙ邋＇＇－＂ｉ＂邋＂Ｆ邋？＇ｉ＇■邋■邋ｒ邋■邋？邐１＂邋＂ｒ邋１邋＇ｒ邐（Ｊ逡逑ＰＩ逡逑圖３邋達沙替尼（Ｄ）和／或ＡＴＲＡ（ＲＡ）對ＮＢ４＿Ｒ１細胞周期的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄａｓａｔｉｎｉｂ（Ｄ）邋ａｎｄ／ｏｒ邋ＡＴＲＡ（ＲＡ）邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｃｅｌｌ邋ｃｙｃｌｅ邋ｏｆ邋ＮＢ４－Ｒ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑１４逡逑

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10 鄭培p

本文編號：2786722