【摘要】：背景創(chuàng)面感染是嚴(yán)重危害公共健康的感染性并發(fā)癥之一。全國(guó)每年因此消耗的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)百億元。銅綠假單胞菌是創(chuàng)面感染的常見(jiàn)致病菌之一。早前研究發(fā)現(xiàn):銅綠假單胞菌感染是細(xì)菌與機(jī)體相互作用及影響的復(fù)雜過(guò)程。其形成感染創(chuàng)面既與細(xì)菌定植的數(shù)量密切相關(guān),同時(shí)又受細(xì)菌生物膜、細(xì)菌運(yùn)動(dòng)、毒素分泌以及毒力因子表達(dá)等因素的影響。負(fù)壓創(chuàng)面療法被認(rèn)為是治療和修復(fù)創(chuàng)面的有效方法。眾多研究發(fā)現(xiàn)負(fù)壓創(chuàng)面療法治療感染性創(chuàng)面可以起到減輕感染促進(jìn)愈合的作用,但其具體機(jī)制目前尚不明確。我們的前期研究發(fā)現(xiàn):應(yīng)用負(fù)壓創(chuàng)面療法早期可以有效抑制相關(guān)毒力基因的表達(dá)、減少創(chuàng)面軟組織內(nèi)細(xì)菌毒素。而進(jìn)一步深入探索負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)銅綠假單胞菌相關(guān)毒力因素的影響有助于解釋感染的控制理論,為臨床醫(yī)生治療感染性創(chuàng)面提供理論依據(jù)和新的治療思路。目的1.分析體外負(fù)壓環(huán)境對(duì)銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)范圍、生物膜形成及毒素分泌的影響;2.通過(guò)建立在體模型探索負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)細(xì)菌生物膜形態(tài)、生物膜成分及細(xì)菌侵襲深度的影響;3.分析負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)感染創(chuàng)面pH值及免疫應(yīng)答的影響;4.定量分析負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)創(chuàng)面覆蓋情況、表皮爬行、新生肉芽組織形成及血管生成的促進(jìn)作用。方法1.建立體外負(fù)壓環(huán)境下銅綠假單胞菌培養(yǎng)模型,通過(guò)直接測(cè)量、結(jié)晶紫染色、ELIS A(enzyme linked immunosorbent assay,ELIS A)等方法分析負(fù)壓對(duì)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)能力、生物膜形成及毒素分泌的影響;2.建立負(fù)壓創(chuàng)面療法與常規(guī)無(wú)菌紗布覆蓋治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的兔耳和巴馬香豬模型,通過(guò)冰凍切片、染色、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡等方法探索負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)細(xì)菌生物膜、生物膜成分及細(xì)菌在創(chuàng)面侵襲深度的影響;3.通過(guò)pH計(jì)測(cè)量、HE(Hematoxylin and eosin,HE)染色及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)等方法分析負(fù)壓創(chuàng)面療法治療下創(chuàng)面pH值及免疫應(yīng)答變化情況;4.通過(guò)組織病理學(xué)、顯微鏡、Real-Time PCR等方法定量分析負(fù)壓創(chuàng)面療法和無(wú)菌紗布治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的愈合情況。結(jié)果1.與常壓環(huán)境相比,體外負(fù)壓環(huán)境(-125mmHg和-200mmHg)可以抑制銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)能力(涌動(dòng)、群集運(yùn)動(dòng)、蹭行運(yùn)動(dòng))、生物膜形成及毒素分泌;2.與常規(guī)紗布組相比,負(fù)壓創(chuàng)面療法可以提前將創(chuàng)面軟組織內(nèi)細(xì)菌降至臨床感染標(biāo)準(zhǔn)(105 CFU/g組織)以下,在治療的第16天(day17)時(shí)軟組織內(nèi)細(xì)菌計(jì)數(shù)平均已達(dá)102CFU/g(組織)以下;負(fù)壓創(chuàng)面療法治療下軟組織內(nèi)細(xì)菌生物膜形成相對(duì)分散、細(xì)菌侵襲深度較常規(guī)紗布治療淺,治療的第16天時(shí)侵襲深度分別為18.2±9.7μm和40.0±12.3μm(P0.01);3.與常規(guī)紗布組相比,負(fù)壓創(chuàng)面療法組在治療后創(chuàng)面平均pH值相對(duì)更低,感染早期負(fù)壓創(chuàng)面療法可以促進(jìn)炎癥因子IL-8的表達(dá),激活炎癥反應(yīng),同時(shí)抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的過(guò)度表達(dá),可以抑制創(chuàng)面淺層中性粒細(xì)胞過(guò)度募集,起到避免持續(xù)過(guò)度炎癥反應(yīng)的雙向調(diào)節(jié)作用;4.負(fù)壓創(chuàng)面療法治療下創(chuàng)面新生表皮及肉芽組織明顯多于常規(guī)紗布治療組,創(chuàng)面愈合速度更快,兩組巴馬香豬軟組織創(chuàng)面完全愈合時(shí)間分別為18.8±2.0天和23.5±2.7天(P0.01)。負(fù)壓創(chuàng)面療法組創(chuàng)面局部血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)表達(dá)水平更高,間接促進(jìn)了創(chuàng)面愈合。結(jié)論負(fù)壓作用可以有效抑制銅綠假單胞菌的運(yùn)動(dòng)能力、抑制細(xì)菌生物膜的形成及毒素分泌,尤其是-125mmHg和-200mmHg,但負(fù)壓作用不能完全阻止細(xì)菌的毒力行為;與常規(guī)紗布治療相比,負(fù)壓創(chuàng)面療法可改變創(chuàng)面細(xì)菌生物膜的狀態(tài),使其相對(duì)分散,減少創(chuàng)面生物膜的重要成分,這可能使細(xì)菌更加充分的暴露在機(jī)體免疫下,從而促進(jìn)創(chuàng)面細(xì)菌的清除;負(fù)壓創(chuàng)面療法可有效促進(jìn)感染創(chuàng)面早期炎癥細(xì)胞及因子的調(diào)動(dòng),抑制創(chuàng)面過(guò)度炎癥反應(yīng),降低感染創(chuàng)面過(guò)高的pH值,為創(chuàng)面愈合提供有利環(huán)境;負(fù)壓創(chuàng)面療法可以刺激創(chuàng)面生長(zhǎng)因子的表達(dá),促進(jìn)創(chuàng)面表皮及肉芽組織的生長(zhǎng),在其治療下創(chuàng)面愈合速度明顯快于常規(guī)無(wú)菌紗布治療。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R641
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文邐逡逑結(jié)果逡逑一、ＴＨＺ１對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖，凋亡，周期等的影響研宄逡逑１．不同胰腺癌細(xì)胞系中ＣＤＫ７表達(dá)水平逡逑我們選取了七種胰腺癌細(xì)胞系，在蛋白水平檢測(cè)ＣＤＫ７的表達(dá)。結(jié)果如下圖逡逑１－１，可見(jiàn)七種胰腺癌細(xì)胞系中蛋白水平普遍表達(dá)ＣＤＫ７。逡逑

圖１－２胰腺癌細(xì)胞增殖曲線。細(xì)胞經(jīng)不同濃度梯度的ＴＨＺｌ處理４８ｈ和７２ｈ，再由ＭＴＳ方法測(cè)量逡逑增殖狀態(tài)，數(shù)據(jù)顯示均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。逡逑表１邋ＴＨＺ１抑制胰腺癌細(xì)胞系增殖逡逑Ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅ邐ＩＣ５０邋（ｕＭ，邋４８ｈｏｕｒｓ）邐ＩＣ５０邐（ｕＭ，邐７２ｈｏｕｒｓ）邐逡逑ＣＡＰＡＮ２邐￣邋０．０３２邐￣邋０．０２５邐＾逡逑ＰＡＮＣ０３．２７邐０．０９１邐０．０５６逡逑ＰＡＮＣ０８．１３邐０．１８７邐０．１１５逡逑ＰＡＮＣ０２．０３邐０．１２２邐０．１０３逡逑ＰＡＮＣ邋１０．０５邐０．１３５邐０．０９３逡逑ＳＷ１９９０邐￣邐０．１８９邐０．１９５逡逑ＰＳＮ－１邐—邐０．１４４邐０．１９０逡逑ＨｕＰ－Ｔ３邐０．１２５邐０．１３０逡逑Ｈｓ７６６Ｔ邐—邐０．１７２邐０．１９８逡逑ＢｘＰｃ３邐０．１７７邐０．１０８逡逑

５．邋ＴＨＺ１對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響逡逑為進(jìn)一步揭示ＴＨＺ１引發(fā)細(xì)胞凋亡和周期變化的機(jī)制，我們?cè)诘鞍姿竭M(jìn)行逡逑了檢測(cè)。結(jié)果如下圖１－５，１－７所示，在ＣＡＰＡＮ２以及ＰＡＮＣ０３．２７兩個(gè)細(xì)胞系中，逡逑ＴＨＺ１藥物作用在相同時(shí)間Ｃ６ｈ），不同濃度處理（０，２０，１００，５００，邋２５００ｎＭ），逡逑調(diào)亡相關(guān)蛋白Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ明顯增商，而周期相關(guān)蛋白ＣｙｃｌｉｎＨ表達(dá)水平未見(jiàn)逡逑明顯變化。如圖１－６，１－８所示，在相同ＴＨＺ１濃度（ｌＯＯｎＭ），處理不同時(shí)間（０，逡逑３，邋６，邋１２，邋２４ｈ）之后，我們也觀察到，Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ蛋白水平明顯增高，而Ｃｙｃｌｉｎ逡逑Ｈ表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化。逡逑ＣＡＰＡＮ２邋（ＫＲＡＳ邋ｐ邋Ｇ１２Ｖ）逡逑ＴＨＺ－１邋（ｎＭ），邋６邋ｈｏｕｒ逡逑ＤＭＳＯ邋２０邐１００邐５００邐２５００逡逑邐邐＿ｒ邋？Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ逡逑？Ｃｙｃｌｉｎ邋Ｈ逡逑？ＧＡＰＤＨ逡逑圖１－５不同濃度ＴＨＺｌ對(duì)ＣＡＰＡＮ２細(xì)胞Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ，邋ＣｙｃｌｉｎＨ蛋白水平的影響逡逑１６逡逑

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10 ;碳青霉烯類(lèi)抗生素[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

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本文編號(hào)：2786514