發(fā)布時間：2020-08-05 16:43

【摘要】：背景:肝細(xì)胞癌(HCC)是全球第二大癌癥死亡原因。全球每年約有100萬例肝癌病例,為了提高肝癌患者的生存率,研究控制轉(zhuǎn)移的基因以及識別新的預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)十分重要。Abi3(也被稱為NESH)是Abi家族三個成員,具有Src同源3(SH3)結(jié)構(gòu)域,脯氨酸富集區(qū)(PR),無催化區(qū)域,作為一種信號蛋白,目前的研究表明Abi3很可能是抑制細(xì)胞運(yùn)動和轉(zhuǎn)移的抑制因子。p21激活激酶(PAK)家族作為小GTPase Cdc42和Rac的下游效應(yīng)器,在細(xì)胞骨架重組、生存、運(yùn)動性和腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用,PAK4與癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可能成為癌癥的預(yù)測標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。本研究以HCC作為Abi3的研究模型,闡明由PAK4介導(dǎo)的Abi3在HCC增殖、遷移和侵襲中的潛在作用和下游通路。我們的研究結(jié)果表明,Abi3在HCC進(jìn)展中發(fā)揮作用,是一個潛在的有用的分子預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。目的:研究Abi3在HCC中的作用;研究PAK4與Abi3間的作用方式;研究PAK4與Abi3間的調(diào)控對HCC侵襲轉(zhuǎn)移的影響。方法:選取合適的HCC細(xì)胞株穩(wěn)定下調(diào)Abi3,利用細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)研究Abi3丟失對HCC的影響。利用免疫共沉淀反應(yīng),確定Abi3與PAK4的相互作用,根據(jù)Abi3的結(jié)構(gòu)域構(gòu)建Abi3的不同截短載體,利用免疫共沉淀確定二者相互作用的區(qū)域。確定PAK4對Abi3的調(diào)節(jié)作用,選取合適的HCC細(xì)胞株穩(wěn)定上調(diào)Abi3,檢測上調(diào)Abi3對Abi3的作用,以及對細(xì)胞HCC細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:穩(wěn)定下調(diào)Hep3B細(xì)胞中的Abi3能夠增加細(xì)胞的增值能力,促進(jìn)細(xì)胞非錨定依賴生長,增加細(xì)胞遷移及侵襲能力。Abi3的SH3結(jié)構(gòu)域與PAK4能夠以非激酶依賴的方式相互作用。PAK4能夠抑制Abi3的表達(dá),并且這種作用與PAK4的激酶活性相關(guān)。過表達(dá)Abi3能夠減緩HCC細(xì)胞株遷移和侵襲的過程,而PAK4能夠翻轉(zhuǎn)這種作用。結(jié)論:在HCC細(xì)胞株中Abi3丟失能夠促進(jìn)腫瘤增殖、遷移與侵襲。PAK4通過非激酶依賴的方式與Abi3的SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合,下調(diào)Abi3的表達(dá),促進(jìn)HCC的遷移與侵襲。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7;R730.43
【圖文】：

１．３．１瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證Ｂｇ邋ＩＩＩ和Ｈｉｎｄ邋ＩＥ酶切ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ載體逡逑ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ載體經(jīng)Ｂｇ邋１ＩＩ和Ｈｉｎｄ邋ＨＩ酶切后，用瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證酶切逡逑產(chǎn)物，結(jié)果顯示ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ載體被切割成線性化載體，如圖１－３：逡逑ｐＳＵＰＥＲ．邋ｒｅｌｒｏ－ｖｅｔｏｒ邐ｍａｒｋｅｒ逡逑＿逡逑圖１－３瓊脂糖凝膠電泳顯示ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ載體被切割成線性化載體逡逑１．３．２插入片段Ａｂｉ３邋ｓｈＲＮＡ的復(fù)性與測序逡逑本部分課題從ＮＣＢＩ中g(shù)粒猓椋郴虻娜ず塑賬嶁蛄校ǎ危停擼埃保叮矗玻福�，严辶x細(xì)癜湊丈鮮觶螅椋遙危遼杓圃潁茫粒恚猓椋錚罟鏡模遙危糧扇旁諳呱杓迫砑杓棋義希粒猓椋郴蛺匾煨緣模保梗睿艄押塑賬嶁蛄�，经n蹋粒櫻苑治鑫尥質(zhì)粑鎦滯蔥孕蟈義狹�，阴羞h(yuǎn)哉眨ǎ危澹紓幔簦椋觶邋澹茫錚睿簦潁錚歟┪被沸蛄校⒕攏蹋粒櫻苑治鑫尥質(zhì)粑鎦皺義賢蔥孕蛄械募罨蛄�，并灾G杓頻模螅瑁遙危亮蕉朔直鵂由希攏玨澹桑桑珊停齲椋睿溴澹桑桑擅蓋繡義希玻跺義

本文編號：2781759