【摘要】：目的探究二甲雙胍對人結(jié)腸癌HT29細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響及可能機制,以為臨床對結(jié)腸癌的治療增添新的實驗數(shù)據(jù)。方法體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌細胞株HT29,隨機分兩組。實驗組二甲雙胍干預(yù)濃度分5、10、20、40 mmol/L四個梯度,對照組加入相應(yīng)量PBS液,干預(yù)24h,48h,72h分別用MTT法檢測細胞增殖情況。對照組加入相應(yīng)量PBS液,實驗組的二甲雙胍干預(yù)濃度為5、40 mmol/L,做劃痕實驗,48h后測量遷移距離。對照組加入相應(yīng)量PBS液,實驗組二甲雙胍干預(yù)濃度為5、40mmol/L,做transwell侵襲實驗,48h后測各組穿過的細胞數(shù)目。另一transwell侵襲實驗,二甲雙胍濃度40mmol/L干預(yù)人結(jié)腸癌細胞HT29,分別干預(yù)24h、48h、72h后測各組穿過的細胞數(shù)目。實驗組HT29細胞用濃度5,10,20,40mmol/L二甲雙胍干預(yù)24h后,光鏡觀察形態(tài)學(xué)改變。5,10,20,40mmol/L二甲雙胍干預(yù)HT29細胞48h后,Annerxin VFITC和PI染色后用流式細胞術(shù)檢測分析凋亡情況。實驗組二甲雙胍干預(yù)濃度為低濃度(5mmol/L)、高濃度(40mmol/L),對照組加入相應(yīng)量PBS液,干預(yù)48h,Western Blot實驗(蛋白質(zhì)印跡法)通過檢測蛋白PI3K、AKT、P-AKT(磷酸化AKT)、GSK-3β、P-GSK-3β(磷酸化GSK-3β)蛋白的表達。結(jié)果二甲雙胍可以抑制人結(jié)腸癌HT29細胞的增殖,并呈時間-劑量依賴性,各組之間的抑制率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。劃痕實驗表明,40mmol/L二甲雙胍加藥組在24h、48h平均的遷移距離明顯減小(P均0.05)。transwell侵襲實驗體現(xiàn)出40mmol/L二甲雙胍加藥組在24h、48h平均的侵襲癌細胞數(shù)目明顯減少(均P0.05)。光鏡下可見人結(jié)腸癌HT29數(shù)目減少,且細胞由多邊形變?yōu)閳A形、體積縮小、核固縮、細胞核溶解等凋亡現(xiàn)象,且隨著二甲雙胍濃度增高細胞凋亡比例升高。流式實驗結(jié)果示干預(yù)48h的實驗組凋亡率大于陰性對照組(P0.05)。Western Blot實驗檢測結(jié)果示二甲雙胍可以抑制HT29細胞PI3K、PAKT、P-GSK-3β蛋白表達量,對AKT、GSK-3β蛋白表達量無明顯影響。低濃度組較對照組、高濃度組較低濃度組PI3K、P-AKT、P-GSK-3β蛋白表達量差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),且呈濃度依賴性。結(jié)論1本實驗說明了二甲雙胍可以明顯抑制結(jié)腸癌細胞增殖,且呈濃度-時間效應(yīng)關(guān)系。且二甲雙胍對人結(jié)腸癌HT29細胞具有抑制遷移、侵襲及促進凋亡的作用。2二甲雙胍對結(jié)腸癌細胞以上幾種生物學(xué)行為的影響機制可能與抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路的PI3K、PAKT、P-GSK-3β蛋白表達有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.35
【圖文】：

P＜0.05；與 5 mmol/L 二甲雙胍處理組比較較，c：P＜0.05；與 20mmol/L 二甲雙胍處 17 二甲雙胍對 HT29 細胞凋亡的影響7 Effect of metformin on apoptosis of HT29 ce細胞相關(guān)蛋白表達的影響rn Blot 結(jié)果示：實驗組的 AKT、GSK05，圖 18、圖 19），而二甲雙胍終濃-AKT、P-GSK-3β 蛋白表達量較對照組二甲雙胍終濃度 40 mmol/L 干預(yù)的高達量較低濃度組明顯減少，說明二甲T、P-GSK-3β 蛋白的表達，呈濃度依賴

【參考文獻】

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本文編號：2780454