【摘要】：肺癌是全世界范圍內癌癥相關死亡的主要原因,在我國肺癌的發(fā)生率和致死率居高不下,五年生存率仍然非常低。然而肺癌發(fā)生發(fā)展所涉及的復雜的分子機制尚未完全闡明,因此探索肺癌的發(fā)生、發(fā)展機制尤其重要。研究發(fā)現許多RNA結合蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切關系,本文旨在研究RNA結合蛋白ASS1和CSRP1對人肺癌細胞增殖和遷移侵襲潛能的影響及其可能作用機制。我們分別構建了穩(wěn)定過表達或穩(wěn)定敲減ASS1和CSRP1肺癌穩(wěn)轉細胞系。首先通過實時熒光定量PCR及蛋白質印記法檢測ASS1和CSRP1 mRNA及蛋白在肺癌細胞中的表達水平。然后通過CCK-8法、Transwell遷移侵襲實驗和細胞劃痕實驗,我們發(fā)現ASS1過表達可抑制肺癌細胞的遷移侵襲能力而對肺癌細胞的增殖能力無明顯影響;CSRP1過表達可促進肺癌細胞的增殖和遷移侵襲能力。在各自的分子機制研究方面,我們發(fā)現ASS1可以參與MAPK通路的調控;CSRP1參與調控p-FAK信號轉導通路。此外通過蛋白質免疫共沉淀實驗,我們發(fā)現ASS1可與促癌基因CPS1結合,并調控后者表達水平。綜上所述,我們揭示了RNA結合蛋白ASS1以及CSRP1在肺癌增殖和侵襲遷移中的作用以及可能的分子機制。這些發(fā)現為尋找肺癌新的治療靶點提供了新的線索。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

25 ng/ml，100ng/ml，200ng/ml，400ng/ml，培養(yǎng) 96h 后，CCK8 法檢測細胞活力。統(tǒng)計學方法采用 SPSS 13.0 和 GraphPad Prism 5 軟件對實驗數據進行統(tǒng)計學分析。組間差異分析采用 t 檢驗（two-tailed，P <0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義）。2 結果2.1 肺癌 低轉移細胞系 mRNA 表達譜芯 結果的驗證在我們實驗室的前期工作中，我們對 SPC-A-1 和 SPC-A-1sci 細胞進行了兩次 mRNA 表達譜芯片分析，我們從中挑選了 10 個轉移相關的基因進行 mRNA水平驗證，圖 1-1 顯示驗證結果基本與芯片結果一致，由此證實了我們芯片結果的可靠性。

第一部分 ASS1 抑制肺癌細胞遷移和侵襲能力及cells compared with the SPC-A-1 cells. ASS1 = argininosuccinate synthase 12.2 3 個候選基因在肺癌細胞系中的功能驗證接下來我們挑選了 ASS1， ALDH2，MSLN 這三個基因進行初步實驗。首先我們在 mRNA 表達水平較高的 SPC-A-1 細胞中通過 si-RN染的方法，敲低這三個基因的表達水平，mRNA 表達水平的質控如圖 1-2轉染有效。Transwell 遷移實驗（圖 1-2B）顯示敲減 ASS1 之后，SPC-的遷移潛能明顯增強，而敲減 ALDH2 和 MSLN 之后，SPC-A-1 細胞的并未發(fā)生明顯改變。A

after transfecting with si-ASS1/si-ALDH2/ si-MSLN or si-NC in SPC-A-1 cell line, β-actin was used as the loading control. (B)The migration ability of SPC-A-1 cells wasdetected by Transwell assays. The left panels show photos of representative fields(magnification: 100×) of migration cells and the right panel shows histograms of theresults. Student’s t-test was used for Statistical analysis.2.3 重組慢病毒感染后 ASS1 的過表達和干擾效果檢測根據 2.1.1 qRT-PCR 結果顯示，ASS1 在 SPC-A-1sci 中表達水平較低，而在SPC-A-1 中表達水平較高，因此我們選擇在 SPC-1-1sci 中穩(wěn)定過表達 ASS1，并在 SPC-A-1 中穩(wěn)定干擾 ASS1.qRT-PCR 實驗和 WesternBlot 實驗分別檢測過表達效率以及干擾效率檢測，結果如圖 1-3 所示。A B

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5 張賀龍;溫華;;吉非替尼對肺癌細胞生長的抑制作用[J];現代腫瘤醫(yī)學;2006年04期

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9 陳玉成;C-myc抑制肺癌細胞的腫瘤發(fā)生并且下調血管內皮生長因子表達[英][J];中國肺癌雜志;2000年03期

10 ;腫瘤壞死因子受體在人類肺癌細胞和正常肺組織中的表達[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1997年02期

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4 陳澤忠;蔡立;唐宏武;;硅殼納米熒光探針用于肺癌細胞表面癌胚抗原的檢測[A];中國化學會第28屆學術年會第4分會場摘要集[C];2012年

5 謝慶軍;李季風;胡曉燕;;超級智能基因藥物對人惡性肺癌細胞的的抑制作用[A];中國細胞生物學學會醫(yī)學細胞生物學學術大會論文集[C];2006年

6 熊杰;周云峰;王偉峰;孫文潔;廖正凱;周福祥;謝叢華;;新型嵌合啟動子介導的肺癌細胞自殺基因治療的研究[A];湖北省抗癌協(xié)會青年委員會成立大會暨第一屆青年學術論壇資料匯編[C];2009年

7 王穎;李琳;林春艷;;免疫組化及RT-PCR方法檢測肺癌細胞VEGF的表達[A];2012年全國微循環(huán)與血液流變學基礎研究及臨床應用學術研討會專題報告及論文集[C];2012年

8 郝好杰;谷志遠;劉文英;宋海靜;趙亞力;李琦;;血小板因子4基因轉染對肺癌細胞中血管生成因子基因表達的影響[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

9 李鳴;黃承鈺;魏大鵬;;藥食兩用植物提取物影響肺癌細胞生長的血清藥理學研究[A];中國營養(yǎng)學會第九次全國營養(yǎng)學術會議論文摘要匯編[C];2004年

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5 ;美證實SLC蛋白能殺死肺癌細胞[N];中國中醫(yī)藥報;2000年

6 ;美發(fā)現殺死肺癌的細胞蛋白[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

7 記者 何屹;英利用“冷凍療法”殺死肺癌細胞[N];科技日報;2005年

8 本版編輯邋夏洪平 編譯 復旦大學附屬中山醫(yī)院肺科 張新;肺癌細胞有“致命弱點”[N];健康報;2008年

9 本報記者 張佳星;這枚“木馬”探針，能“摸底”肺癌細胞[N];科技日報;2018年

10 新訊;利用納米技術數分鐘可識別九成以上肺癌細胞[N];醫(yī)藥經濟報;2006年

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