【摘要】：背景胰腺癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,由于早期診斷困難,大部分患者確診時(shí)已屬于中晚期。由于胰腺癌對現(xiàn)有化療藥物的耐藥性問題,目前尚無顯著改善患者生存狀況的治療藥物。雷公藤甲素具有抗腫瘤活性,作用機(jī)制復(fù)雜,胰腺癌細(xì)胞內(nèi)存在大量TPL誘導(dǎo)其凋亡的作用靶點(diǎn)。目的研究雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞凋亡與Pim3蛋白的相關(guān)性,分析其在雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制。方法MTT法檢測雷公藤甲素對胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞的增殖抑制效果;Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)分析各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡比例的差別;Western Blot法檢測胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞中蛋白Pim-3、EST-1及pBad(s112)表達(dá)量的變化,用相對定量法分析比較各蛋白表達(dá)水平的差異。結(jié)果MTT檢測細(xì)胞增殖抑制率結(jié)果顯示:分別給予不同濃度(6.25nM/L-400nM/L)雷公藤甲素處理24h、48h、72h后,相比于無處理對照組細(xì)胞,各實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)明顯的細(xì)胞增殖抑制作用,(F=40.52,p0.05;F=245.2,p0.05;F=500.3,p0.05),且生長抑制率與時(shí)間呈正相關(guān)。給予不同濃度(12.5、25和50nM/L)雷公藤甲素處理48h后各實(shí)驗(yàn)組的生長抑制率與濃度呈正相關(guān),分別為38.16±1.86%(12.50 nM/L)、47.20±0.95%(25 nM/L)、63.86±1.30%(50 nM/L)(組與組間多重比較,F=1451,p0.05);倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示:相比于對照組,實(shí)驗(yàn)組胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞隨著雷公藤甲素濃度增加,細(xì)胞密度降低,凋亡增加。Annexin V-FITC、PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:經(jīng)不同濃度(12.50nM/L,25 nM/L,50 nM/L)雷公藤甲素處理48h后胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞凋亡比例增加,分別為10.78±0.80%、30.15±1.37%、48.65±2.57%(F=602.6,p0.05)。Western blot結(jié)果顯示:相比于無處理對照組,各實(shí)驗(yàn)組Ets-1,Pim-3,pBad(s112)蛋白相對表達(dá)量在雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌Bxpc-2細(xì)胞中的表達(dá)降低,且隨著雷公藤甲素濃度增加(0-50nM/L)其表達(dá)水平與之呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論1.雷公藤甲素對人胰腺癌Bxpc-3細(xì)胞具有增殖抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用;2.雷公藤甲素可抑制人胰腺癌細(xì)胞Bxpc-3中Pim-3蛋白的表達(dá);3雷公藤甲素可以通過Ets-1調(diào)控Pim-3表達(dá),從而降低磷酸化Bad蛋白表達(dá)發(fā)揮凋亡誘導(dǎo)作用。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.9
【圖文】：

腺癌 Bxpc-3 細(xì)胞具有明顯的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)作用（圖2）。圖 2：倒置熒光顯微鏡觀察胰腺癌細(xì)胞 Bxpc-3 生長狀況Control TPL 12.5nM/LTPL 25nM/L TPL 50nM/L3 雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞 Bxpc-3 凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示 TPL 對 Bxpc-3 細(xì)胞具有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用（圖 3）。經(jīng) TPL 處理 48h 后，加藥 12.5、25、50 組凋亡比例分別為 10.78±0.80%、30.15±1.37%、48.65±2.57%( F=602.6，p<0.05)，并在一定加藥濃度范圍（12.5~50nM/L）隨著 TPL 劑量的增加，凋亡數(shù)量亦明顯增加（各組間 p<0.01）

圖 3：雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡4 蛋白質(zhì)電泳檢測目的蛋白表達(dá)情況Western Blot 方法檢測各組中 Pim-3、pBad(s112)蛋白相對表達(dá)水平。檢測結(jié)果顯實(shí)驗(yàn)組 Pim-3、pBad(s112)蛋白在胰癌細(xì)胞 BxPC-3 的相對表達(dá)量低于對照組細(xì)胞（p<0.01）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2774218