【摘要】：研究背景與實驗?zāi)康?結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)在世界范圍內(nèi)具有較高的死亡率,嚴重威脅人類健康。外科手術(shù)通常作為早期結(jié)直腸癌的首選治療,但在首次手術(shù)后患者復(fù)發(fā)率高達30-40%。此外,據(jù)報道約60%的CRC患者后期會發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移。研究表明CRC的高發(fā)病率,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移均與CRC患者免疫細胞功能低下有關(guān)。文獻報道顯示低活性的自然殺傷(Natural killer,NK)細胞增加了癌癥風險的發(fā)生。NK細胞體外活化后回輸治療可以作為轉(zhuǎn)移性CRC患者的有效免疫療法。也有研究表明,與健康成年人相比,轉(zhuǎn)移性CRC患者的CD8+T細胞的數(shù)量顯著減少。西妥昔單抗(Cetuximab,CET)是一種人-小鼠嵌合型表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的單克隆抗體。雖然有一些關(guān)于體外西妥昔單抗對腫瘤細胞作用的報道,但是在CRC治療期間,西妥昔單抗的作用機制由于缺乏體內(nèi)研究而尚未完全闡明。因此,我們分析了 CRC患者治療過程中外周血的免疫學(xué)特性。我們發(fā)現(xiàn)在西妥昔單抗治療中,NK細胞和CD8+T細胞發(fā)揮了重要作用。與體內(nèi)、外實驗相結(jié)合研究西妥昔單抗對患者免疫細胞數(shù)量和功能上的影響,旨在找到CRC治療過程中西妥昔單抗發(fā)揮作用的免疫機制及標志西妥昔單抗治療效果的早期指標。研究方法:通過收集,整理和詳細分析63例CRC患者和健康成年人的臨床資料,收集患者外周抗凝血樣本,分離出樣本中的單個核細胞(peripheral blood monouclear cells,PBMC),檢測健康成年人和患者治療前后體內(nèi)淋巴細胞亞群的的比例和分布情況。進一步通過體外實驗檢測其功能。利用流式細胞儀和RTCA檢測腫瘤患者和健康成年人的外周血單個核細胞對腫瘤細胞系的殺傷作用。同時應(yīng)用酶聯(lián)免疫實驗(Enzyme-l inked immunosorbent assay,ELISA)和液相芯片檢測 CRC 相關(guān)細胞因子IFN-y,IL-10和IL-6的表達水平。進一步收集整理和分析結(jié)腸癌患者的臨床資料和影像學(xué)診斷將其分為西妥昔單抗治療有效組和治療無效組,按照治療有效組、無效組再次進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,檢測大腸癌患者體內(nèi)淋巴細胞的數(shù)目比例以及分布情況,比較治療有效組和治療無效組的免疫細胞活化的差異。檢測患者外周血中IL-33的表達水平,了解其變化趨勢。分離患者PBMC,檢測IL-33對骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、IL-4、IL-10以及TNF-α等細胞因子產(chǎn)生的影響。觀察OPN對腫瘤細胞侵襲作用的影響。研究結(jié)果:第一部分:研究結(jié)果提示與健康對照相比,CRC患者治療前外周血的CD3+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞數(shù)量都顯著下降;而CD4+T細胞與健康成年人組相比無顯著差異,恒定自然殺傷性T(invariant natural killer T,iNKT)細胞與CD3+CD56+ NKT細胞的數(shù)量較之健康組無明顯差異。另外,CRC患者樹突狀(Dendritic cells,DC)細胞表面的BDCA1共刺激分子并沒有顯著變化。而治療后的CRC患者與治療前患者相比,CD3+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞數(shù)量都顯著上升;調(diào)節(jié)性T(regulatory T,Treg)細胞治療后逐漸降低,免疫抑制作用得到了緩解;CD4+T細胞、CD3+CD56+NKT、iNKT細胞和BDCA1共刺激分子在治療后的患者與治療前相比無明顯差異。表明NK細胞和CD8+T細胞可能在西妥昔單抗治療過程中發(fā)揮了重要作用。CD107a和CD137分子與脫顆粒和殺傷靶細胞功能相關(guān),CRC患者治療前CD107a和CD137分子在NK、CD8+T表面的表達水平與健康成人相比明顯減低,而CRC患者治療后與治療前患者相比,CD107a和CD137分子在NK、CD8+T細胞表面的表達水平顯著升高。研究還發(fā)現(xiàn)與健康組相比CRC患者治療前外周血中,IL-6、IL-10細胞因子水平均升高,而治療后4周表達水平逐漸下降;CRC患者治療前與健康成年人相比IFN-y細胞因子水平降低,治療后4周表達水平明顯上升。第二部分:我們根據(jù)患者治療后的臨床癥狀和影像學(xué)診斷將CRC患者分為西妥昔單抗治療有效組和無效組,發(fā)現(xiàn)在西妥昔單抗治療有效組外周血中IL-33水平在治療2周后明顯上升,OPN水平顯著降低;而無效組患者治療前后外周血中IL-33、OPN的水平無明顯變化;另外治療有效組患者與治療前相比血漿中IL-10水平顯著降低。而治療無效組IL-10水平無顯著差異。IL-4、TNF-α水平治療前后兩組中均沒有變化;治療有效組患者外周血單個核細胞培養(yǎng)中添加IL-33后,IL-10、OPN水平明顯降低。我們推測,IL-33在大腸癌早期可能調(diào)控IL-10與OPN的表達水平發(fā)揮抗腫瘤作用。結(jié)論:在西妥昔單抗治療CRC過程中,CD8+T、NK細胞在西妥昔單抗治療CRC過程中發(fā)揮重要作用;西妥昔單抗的治療可以增加CD107a和CD137分子在NK、CD8+T細胞表面的表達水平。與此同時,在體外實驗中,也表明西妥昔單抗可以增加NK、CD8+T細胞對腫瘤細胞的細胞毒作用,IL-33炎性因子與西妥昔單抗治療大腸癌的療效密切相關(guān),IL-33可能通過調(diào)節(jié)OPN以及IL-10的水平發(fā)揮抗腫瘤作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.34
【圖文】：

示治療前ＣＲＣ患者的Ｔｒｅｇ細胞功能可能存在缺陷。此外，與健康對照組及西妥昔逡逑單抗治療前相比，ＣＤ４＋Ｔ細胞，ＮＫＴ樣細胞，ｉＮＫＴ細胞和ＤＣ的數(shù)量在西妥昔單逡逑抗治療后外周血中未發(fā)生明顯改變（Ｐ＝邋０．３４，圖１Ｃ，邋２Ａ－Ｂ，Ｄ）�？偟膩碚f，這逡逑些結(jié)果表明，外周血中ＣＤ３＋Ｔ，邋ＣＤ８＋Ｔ和ＮＩＣ細胞與西妥昔單抗促進免疫調(diào)節(jié)功逡逑能相關(guān)。逡逑１９逡逑

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本文編號：2772947