發(fā)布時間：2020-07-28 13:30

【摘要】：研究背景與實(shí)驗(yàn)?zāi)康?結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)在世界范圍內(nèi)具有較高的死亡率,嚴(yán)重威脅人類健康。外科手術(shù)通常作為早期結(jié)直腸癌的首選治療,但在首次手術(shù)后患者復(fù)發(fā)率高達(dá)30-40%。此外,據(jù)報道約60%的CRC患者后期會發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移。研究表明CRC的高發(fā)病率,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移均與CRC患者免疫細(xì)胞功能低下有關(guān)。文獻(xiàn)報道顯示低活性的自然殺傷(Natural killer,NK)細(xì)胞增加了癌癥風(fēng)險的發(fā)生。NK細(xì)胞體外活化后回輸治療可以作為轉(zhuǎn)移性CRC患者的有效免疫療法。也有研究表明,與健康成年人相比,轉(zhuǎn)移性CRC患者的CD8+T細(xì)胞的數(shù)量顯著減少。西妥昔單抗(Cetuximab,CET)是一種人-小鼠嵌合型表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的單克隆抗體。雖然有一些關(guān)于體外西妥昔單抗對腫瘤細(xì)胞作用的報道,但是在CRC治療期間,西妥昔單抗的作用機(jī)制由于缺乏體內(nèi)研究而尚未完全闡明。因此,我們分析了 CRC患者治療過程中外周血的免疫學(xué)特性。我們發(fā)現(xiàn)在西妥昔單抗治療中,NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞發(fā)揮了重要作用。與體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合研究西妥昔單抗對患者免疫細(xì)胞數(shù)量和功能上的影響,旨在找到CRC治療過程中西妥昔單抗發(fā)揮作用的免疫機(jī)制及標(biāo)志西妥昔單抗治療效果的早期指標(biāo)。研究方法:通過收集,整理和詳細(xì)分析63例CRC患者和健康成年人的臨床資料,收集患者外周抗凝血樣本,分離出樣本中的單個核細(xì)胞(peripheral blood monouclear cells,PBMC),檢測健康成年人和患者治療前后體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群的的比例和分布情況。進(jìn)一步通過體外實(shí)驗(yàn)檢測其功能。利用流式細(xì)胞儀和RTCA檢測腫瘤患者和健康成年人的外周血單個核細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞系的殺傷作用。同時應(yīng)用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(Enzyme-l inked immunosorbent assay,ELISA)和液相芯片檢測 CRC 相關(guān)細(xì)胞因子IFN-y,IL-10和IL-6的表達(dá)水平。進(jìn)一步收集整理和分析結(jié)腸癌患者的臨床資料和影像學(xué)診斷將其分為西妥昔單抗治療有效組和治療無效組,按照治療有效組、無效組再次進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,檢測大腸癌患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)目比例以及分布情況,比較治療有效組和治療無效組的免疫細(xì)胞活化的差異。檢測患者外周血中IL-33的表達(dá)水平,了解其變化趨勢。分離患者PBMC,檢測IL-33對骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、IL-4、IL-10以及TNF-α等細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響。觀察OPN對腫瘤細(xì)胞侵襲作用的影響。研究結(jié)果:第一部分:研究結(jié)果提示與健康對照相比,CRC患者治療前外周血的CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量都顯著下降;而CD4+T細(xì)胞與健康成年人組相比無顯著差異,恒定自然殺傷性T(invariant natural killer T,iNKT)細(xì)胞與CD3+CD56+ NKT細(xì)胞的數(shù)量較之健康組無明顯差異。另外,CRC患者樹突狀(Dendritic cells,DC)細(xì)胞表面的BDCA1共刺激分子并沒有顯著變化。而治療后的CRC患者與治療前患者相比,CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量都顯著上升;調(diào)節(jié)性T(regulatory T,Treg)細(xì)胞治療后逐漸降低,免疫抑制作用得到了緩解;CD4+T細(xì)胞、CD3+CD56+NKT、iNKT細(xì)胞和BDCA1共刺激分子在治療后的患者與治療前相比無明顯差異。表明NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞可能在西妥昔單抗治療過程中發(fā)揮了重要作用。CD107a和CD137分子與脫顆粒和殺傷靶細(xì)胞功能相關(guān),CRC患者治療前CD107a和CD137分子在NK、CD8+T表面的表達(dá)水平與健康成人相比明顯減低,而CRC患者治療后與治療前患者相比,CD107a和CD137分子在NK、CD8+T細(xì)胞表面的表達(dá)水平顯著升高。研究還發(fā)現(xiàn)與健康組相比CRC患者治療前外周血中,IL-6、IL-10細(xì)胞因子水平均升高,而治療后4周表達(dá)水平逐漸下降;CRC患者治療前與健康成年人相比IFN-y細(xì)胞因子水平降低,治療后4周表達(dá)水平明顯上升。第二部分:我們根據(jù)患者治療后的臨床癥狀和影像學(xué)診斷將CRC患者分為西妥昔單抗治療有效組和無效組,發(fā)現(xiàn)在西妥昔單抗治療有效組外周血中IL-33水平在治療2周后明顯上升,OPN水平顯著降低;而無效組患者治療前后外周血中IL-33、OPN的水平無明顯變化;另外治療有效組患者與治療前相比血漿中IL-10水平顯著降低。而治療無效組IL-10水平無顯著差異。IL-4、TNF-α水平治療前后兩組中均沒有變化;治療有效組患者外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)中添加IL-33后,IL-10、OPN水平明顯降低。我們推測,IL-33在大腸癌早期可能調(diào)控IL-10與OPN的表達(dá)水平發(fā)揮抗腫瘤作用。結(jié)論:在西妥昔單抗治療CRC過程中,CD8+T、NK細(xì)胞在西妥昔單抗治療CRC過程中發(fā)揮重要作用;西妥昔單抗的治療可以增加CD107a和CD137分子在NK、CD8+T細(xì)胞表面的表達(dá)水平。與此同時,在體外實(shí)驗(yàn)中,也表明西妥昔單抗可以增加NK、CD8+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用,IL-33炎性因子與西妥昔單抗治療大腸癌的療效密切相關(guān),IL-33可能通過調(diào)節(jié)OPN以及IL-10的水平發(fā)揮抗腫瘤作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.34
【圖文】：

示治療前ＣＲＣ患者的Ｔｒｅｇ細(xì)胞功能可能存在缺陷。此外，與健康對照組及西妥昔逡逑單抗治療前相比，ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞，ＮＫＴ樣細(xì)胞，ｉＮＫＴ細(xì)胞和ＤＣ的數(shù)量在西妥昔單逡逑抗治療后外周血中未發(fā)生明顯改變（Ｐ＝邋０．３４，圖１Ｃ，邋２Ａ－Ｂ，Ｄ）�？偟膩碚f，這逡逑些結(jié)果表明，外周血中ＣＤ３＋Ｔ，邋ＣＤ８＋Ｔ和ＮＩＣ細(xì)胞與西妥昔單抗促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)功逡逑能相關(guān)。逡逑１９逡逑

胞（ＣＤ４＋，ＣＤ２５＋，邐在外周血中的比例較_た刀哉沼邢陸登魘頻遣㈠義喜幻饗�，而治疗后}苤鸞ハ陸擔(dān)瘟坪螅粗芤蠶災(zāi)陸擔(dān)ǎ校跡埃埃擔(dān)ㄍ跡玻茫�，提辶x鮮局瘟魄埃茫遙沒頰叩模裕潁�？z赴δ蕓贍艽嬖諶畢蕁４送�，与健康对照组及西妥昔辶x系タ怪瘟魄跋啾齲茫模矗韻赴�，ＮＫＴ样细胞，ｉＮＫｍ嵏胞和ＤＣ的数量灾X魍孜艫ュ義峽怪瘟坪笸庵苧形捶⑸饗愿謀洌ǎ校藉澹埃常�，哇E保�，邋２Ａ－n模�。总的来藫�(dān)忮義閑┙峁礱鰨庵苧校茫模常�，邋ＣＤ８＋Ｔ和ＮＩＣ细胞与西妥纹Aタ勾俳庖叩鶻詮﹀義夏芟喙�。辶x希保瑰義

本文編號：2772947