【摘要】：目的:研究PTEN和AURKA兩種基因在胃癌中的相互影響,并探討PTEN低表達(dá)通過調(diào)節(jié)AURKA維持胃癌惡性表型的機(jī)制。方法:第一部分從兩個(gè)方面分別對(duì)PTEN和AURKA兩種基因進(jìn)行比較。先從TCGA數(shù)據(jù)庫收集臨床數(shù)據(jù),利用c Bioportal腫瘤基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫對(duì)PTEN和AURKA基因的改變和改變頻率進(jìn)行分析。再利用免疫組化技術(shù),PCR和western blot分析PTEN和AURKA在胃癌細(xì)胞和正常胃黏膜細(xì)胞的分布情況。同時(shí)分別利用小分子干擾RNA技術(shù)分別敲低胃癌細(xì)胞系中PTEN和AURKA,利用CCK-8和Transwell實(shí)驗(yàn)觀察PTEN和AURKA對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲的影響。除此之外,采用KM Plotter工具分析PTEN和AURKA基因表達(dá)水平對(duì)胃癌病人生存率的影響。第二部分利用c Bioportal腫瘤基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫對(duì)PTEN和AURKA進(jìn)行相關(guān)性分析,為了進(jìn)一步研究PTEN和AURKA之間的相互關(guān)系,我們觀察敲低胃癌細(xì)胞中的PTEN和AURKA后兩者的基因和蛋白的表達(dá)水平。此外我們發(fā)現(xiàn)P-AURKA的表達(dá)水平也受到上述基因表達(dá)水平變化的影響。通過上述實(shí)驗(yàn)提出假說:P-AURKA是PTEN的下游靶基因。采用雙變量控制法驗(yàn)證PTEN通過下調(diào)P-AURKA進(jìn)一步影響AURKA的表達(dá)水平。第三部分分析PTEN下調(diào)對(duì)胃癌細(xì)胞PI3K/AKT/GSK3?/?catenin信號(hào)通路的影響,并探討敲低PTEN后對(duì)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)?catenin的影響。結(jié)果:1.PTEN的基因改變包括四種形式,分別是擴(kuò)增,深缺失,截?cái)嗤蛔兒湾e(cuò)義突變,缺失是PTEN最常見的改變形式。AURKA基因改變形式有兩種,分別是擴(kuò)增和錯(cuò)義突變,并且擴(kuò)增是最常見的改變形式。2.免疫組化技術(shù),PCR和western blot分析顯示PTEN在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)水平低于正常胃黏膜細(xì)胞,而AURKA在胃癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)水平。3.CCK-8,Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低PTEN后促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲,相反敲低AURKA后以抑制胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲。4.KM Plotter分析PTEN高表達(dá)提高胃癌病人的生存率,AURKA高表達(dá)降低胃癌病人的生存率。5.c Bioportal數(shù)據(jù)分析PTEN和AURKA之間是負(fù)相關(guān)的關(guān)系。6.PTEN低表達(dá)導(dǎo)致胃癌細(xì)胞中AURKA在蛋白和基因水平上的高表達(dá),同時(shí)也提高了P-AURKA的蛋白表水平。而AURKA低表達(dá)促進(jìn)胃癌細(xì)胞中PTEN表達(dá)水平的升高,降低了P-AURKA的蛋白表水平。7.PTEN低表達(dá)通過上調(diào)P-AURKA調(diào)節(jié)AURKA的激活。8.PTEN下調(diào)促進(jìn)胃癌細(xì)胞PI3K/AKT/GSK3?/?catenin信號(hào)通路,進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)展。結(jié)論:PTEN和AURKA在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用。PTEN低表達(dá)通過上調(diào)P-AURKA的表達(dá)水平激活A(yù)URKA,進(jìn)而促進(jìn)胃癌細(xì)胞PI3K/AKT/GSK3?/?catenin信號(hào)通路,以促進(jìn)胃癌的發(fā)生和發(fā)展。該項(xiàng)研究提供了新型抗癌藥物的設(shè)計(jì)思路:聯(lián)合PTEN和AURKA為靶點(diǎn),設(shè)計(jì)出特異性更強(qiáng)的抗癌藥物。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 PTEN低表達(dá)通過上調(diào)P-AURKA調(diào)節(jié)AURKA的體外研究1.2 結(jié)果1.2.1PTEN 和 AURKA 在胃癌中基因改變和改變頻率的變化首先從 TCGA 數(shù)據(jù)庫中收集 478 名胃癌患者的臨床數(shù)據(jù)，利用 cBioportal在線數(shù)據(jù)庫對(duì) AURKA 和 PTEN 的基因改變進(jìn)行分析。約有 10%的患者存在PTEN 基因的改變，基因改變類型包括擴(kuò)增，深度缺失，截?cái)嗤蛔兒湾e(cuò)義突變。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn) 7%的病人出現(xiàn)AURKA 基因的改變，包括擴(kuò)增和錯(cuò)義突變（如圖 1A,1B）。在黏液性胃癌，胃的管狀腺癌，胃印戒細(xì)胞癌，胃腺癌和彌漫性胃癌中均發(fā)現(xiàn)有 AURKA 和 PTEN 的基因改變。在 PTEN 所有基因改變中，基因缺失所占的比例最大，約為 25%，但是基因擴(kuò)增所占的比例只有 1.4%。相反，在 AURKA 基因改變中，基因擴(kuò)增比例達(dá)到 18.2%。（如圖 2A,2B）

B 478 例胃癌患者中 PTEN 和 AURKA 的基因改變頻率 PTEN 和 AURKA 在胃癌細(xì)胞中的異常表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)AURKA參與多種惡性腫瘤的發(fā)生[20-23]。但是，AURKA和PT互總用的機(jī)制并不是很清楚。為了研究這個(gè)問題，首先我們采用免疫、實(shí)時(shí) RT-PCR 以及 Western blot 技術(shù)觀察 AURKA 和 PTEN 在胃癌織的表達(dá)量。免疫組化結(jié)果顯示:胃腺癌細(xì)胞高表達(dá) AURKA，正常胃 低表達(dá) AURKA。(圖 3A)。除此 以外，我們也發(fā)現(xiàn) P-AKT3β ,P-GSK3βh 和 β-catenin 在正常胃黏膜細(xì)胞和胃癌細(xì)胞的表達(dá)水平RT-PCR 和 Western blot 結(jié)果表明,胃癌細(xì)胞 MGC-803 和 SGC-79KA 基因和蛋白表達(dá)水平明顯高于正常的 GES-I 細(xì)胞(圖 3C,3D)。研究表明 PTEN 和 AURKA 在惡性腫瘤中有共同的細(xì)胞信號(hào)通路[24-我們也分析了 PTEN 在胃癌細(xì)胞 MGC-803 和 SGC-7901 的表達(dá)情況KA 的 mRNA 水平表達(dá)相反，PTEN 基因的 mRNA 水平在胃癌細(xì)胞中(P<0.05; 圖 3B)。同時(shí) PTEN 蛋白表達(dá)水平也是減少的（圖 3D）。因C-803 和 SGC-7901 細(xì)胞將被用來進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)以供研究 PTEN 和 AU

12圖 3PTEN 和 AURKA 在胃癌細(xì)胞和正常細(xì)胞中的分布1.2.3 PTEN 和 AURKA 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響為了探究 AURKA 和 PTEN 胃癌細(xì)胞增殖能力的影響，我們用 CCK-8 試驗(yàn)評(píng)估胃癌細(xì)胞的增殖能力。首先用小分子干擾 RNA 技術(shù)分別抑制胃癌細(xì)胞中AURKA 和 PTEN 的表達(dá)水平，觀察它們對(duì)胃癌細(xì)胞的影響。結(jié)果分析顯示，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染siAURKA組胃癌細(xì)胞的增殖能力明顯降低，而敲低PTEN導(dǎo)致 MGC-803，SGC-7901 細(xì)胞的增殖能力明顯高于對(duì)照組。（如圖 4A,4B）。

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1 李麗偉;胃癌中PTEN低表達(dá)通過上調(diào)P-AURKA調(diào)節(jié)AURKA是維持胃癌惡性表型的本質(zhì)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2771474