【摘要】：目的:探討具有兩親性、智能性、靶向性的接枝式HA-SS-PZLL@SPIO/DOX肝癌診療一體化納米探針的理化性質、生物安全性、抗腫瘤作用及磁共振增強顯影效果。研究方法:1、通過化學方法合成具有二硫鍵的接枝聚合物膠束HA-SS-PZLL,在水性介質中與超順磁性氧化鐵(SPIO)及阿霉素(DOX)自組裝形成HA-SS-PZLL@SPIO/DOX肝癌診療一體化納米探針;采用核磁共振氫譜(~1HNMR)、傅立葉紅外光譜(FTIR)分析特征性質子峰及吸收峰,證實納米膠束的成功合成;采用動態(tài)光散射(DLS)、透射電鏡(TEM)檢測膠束的粒徑及形貌;采用芘熒光法檢測臨界膠束濃度(CMC);通過DOX及SPIO含量測定評價膠束的阿霉素包封率及SPIO載藥量、藥物釋放(還原敏感性測定);通過磁共振掃描計算納米探針的T_2弛豫率,評價其增強顯影能力。實驗另制備了不含二硫鍵的HA-PZLL@SPIO/DOX作為對照研究。2、在細胞水平:通過對照實驗,用四唑鹽比色法(MTT)計算細胞存活率評價HA-SS-PZLL膠束的生物安全性,及HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針對人肝癌細胞的殺傷力;采用DOX熒光觀察、DAPI染核以及流式細胞術定性、定量分析人肝癌細胞對納米探針的攝取情況、胞內分布,以及納米探針的抗腫瘤細胞能力;通過細胞懸液MRI檢查,測量平均T_2值評價納米探針體外MR增強顯影效果。3、在動物體內水平:建立BALB/c裸鼠肝癌原位模型及皮下荷瘤模型并分組給藥對照,通過HE染色明確腫瘤組織及對主要器官進行藥物安全性評價,通過普魯士藍染色觀察藍染細胞分布情況,定性檢測各主要臟器及腫瘤的鐵分布;通過測量皮下荷瘤模型腫瘤的體積及重量,繪制腫瘤生長曲線及計算腫瘤抑制率,進行統(tǒng)計學分析,評價納米探針的抗腫瘤療效;通過皮下荷瘤模型磁共振檢查,測量平均CNR值及T_2值并進行分析比較,評價納米探針的體內MR增強顯影效果。研究結果:1、通過~1HNMR和FTIR證實了HA-SS-PZLL接枝聚合物膠束的特征性質子峰及吸收峰;DLS測得HA-SS-PZLL膠束平均粒徑128.5±5.7 nm,TEM測得HA-SS-PZLL膠束及HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針呈球形,平均粒徑分別為91.5±3.5 nm、105.5±4.8 nm;芘熒光法測得HA-SS-PZLL具有較低CMC值0.0092 mg/mL;通過DOX含量測定得知膠束DOX包封率及SPIO載藥量達50%以上,在含谷胱甘肽(GSH)的還原條件下納米探針具有更高效的藥物釋放;MR檢查發(fā)現(xiàn)該納米探針具有較高的T_2馳豫率(231.0 Fe mM~(-1)·s~(-1))。2、MTT法測得HA-SS-PZLL接枝聚合物膠束生物安全性高,細胞生存率80%以上(孵育48 h),在較高藥物濃度(10 ug/mL)條件下,HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組及HA-PZLL@SPIO/DOX組,腫瘤細胞殺傷作用與Free DOX組接近(孵育48 h);熒光觀察、DAPI染核以及流式細胞分析結果顯示:Free DOX組熒光強于載藥膠束組,Free DOX主要進入細胞核內,而HA-SS-PZLL@SPIO/DOX及HA-PZLL@SPIO/DOX主要位于細胞質內;體外MRI結果顯示HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組平均T_2值明顯低于空白對照組及SPIO組。3、HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組實驗鼠平均體重比對照組增長良好,且HE染色顯示主要臟器未見明顯損害,具有良好生物安全性;普魯士藍染色顯示HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組腫瘤組織有更多的鐵聚集(代表藥物分布);治療周期內,HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組皮下荷瘤模型腫瘤的體積及重量均比對照組顯著縮小,有統(tǒng)計學差異;通過皮下荷瘤模型的磁共振檢查,HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組比對照組腫瘤平均T_2值及T_2WI信號下降更明顯,差異有統(tǒng)計學意義。結論:本實驗制備的HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針具有良好的理化性質,在體內外具有良好的生物安全性、智能性及靶向性,抗腫瘤效果及MR增強顯像效果較好,有利于肝癌診療一體化的應用。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

的生物相容性較高[34]，可以很容易的被代謝分解而然可降解高分子材料：前一類主要如聚磷酸酯，聚氨要如一些纖維蛋白和膠原等[35，36]。其中聚氨基酸的霉素，紫杉醇相關藥物[37，38]；對比也可以看出這種的結構、磁性等也較容易控制，此外其穩(wěn)定性高，不可以較好的滿足藥物載體材料的多方面要求。料的選擇luronic Acid，HA)是一種酸性粘多糖，是細胞外基質結構和功能方面其作用很重要，是由 D-葡萄糖醛酸線性高分子，見圖 1-1。

勢種物質的生物相容性很高，也可以方便的合成，其，因而在生物醫(yī)學應用領域中表現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摰囊患壗Y構較為單一，其對應的 NCA 開環(huán)聚合產于實驗研究的前提。性：聚氨基酸可在體內酶類作用下發(fā)生降解，這在，這種降解的方式和途徑存在一定的差異，因而在這些影響因素進行控制而實現(xiàn)。性：由于聚氨基酸結構組成和天然蛋白質及多肽相一氨基酸聚合形成的產物均不具有免疫原性，有良基-L-賴氨酸(PZLL)一類簡單的合成型多聚物，其基本的單元為賴氨酸成中。

圖 2-2 a-alkyne-SS-PZLL 的合成路線圖在氬氣環(huán)境下，先將 100.0 mL 四氫呋喃加入到三口圓底燒瓶中，接著向其中加入 5.0ε-芐氧羰基-L-賴氨酸 (17.8mmol)及 3.0 g 三聚光氣 (10.1mmol)，在 50 攝氏度條件下反應 h，然后減壓蒸餾將四氫呋喃蒸發(fā)去除掉，將所得油狀物通過乙酸乙酯溶解之后，利用冷碳酸氫鈉洗滌處理而將其中的有機相提取出之后，接著進行干燥、過濾處理之后就可得中間目標產物 Nε-芐氧羰基-L-賴氨酸環(huán)內酸酐。將 Nε-芐氧羰基-L-賴氨酸環(huán)內酸酐及無水 DMF 加入到圓底燒瓶中，接著再加入PA -Cyst，通入氬氣，25 攝氏度條件下反應 3 h，通過甲醇沉淀、過濾處理之后接著干燥得到(α-alkyne-SS-PZLL)白色粉末產物。.1.3 HA-SS-PZLL的合成

【參考文獻】

相關期刊論文 前8條

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本文編號：2770192