發(fā)布時(shí)間：2020-07-23 20:31

【摘要】：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(Glucose regulated protein 94,grp94)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白,發(fā)揮分子伴侶功能,可協(xié)助蛋白的折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、分泌及降解。許多腫瘤內(nèi)源性及外源性因素可引起腫瘤細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,激活未折疊蛋白反應(yīng),上調(diào)grp94等分子伴侶蛋白的表達(dá),維持腫瘤內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生存。分子伴侶grp94尚可協(xié)助多個(gè)受體蛋白的折疊與胞膜轉(zhuǎn)運(yùn),包括Toll樣受體、LRP6、GARP、IGF、整合素、HER2等,這些蛋白在腫瘤的免疫微環(huán)境,血管生成及侵襲轉(zhuǎn)移中扮演關(guān)鍵作用。此外,grp94蛋白的細(xì)胞表面表達(dá)在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮一定作用。綜上所述,分子伴侶grp94可通過(guò)協(xié)助多個(gè)促癌蛋白的折疊和轉(zhuǎn)運(yùn),維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及腫瘤內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),參與機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng),在腫瘤的早期啟動(dòng)及惡性進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。grp94在多種腫瘤中過(guò)表達(dá),和侵襲性臨床表型及不良預(yù)后密切相關(guān),使得grp94有望成為新的腫瘤分子標(biāo)志。靶向grp94分子的腫瘤疫苗,單克隆抗體及小分子抑制劑的臨床前研究使得grp94有望成為新的腫瘤治療靶點(diǎn)。本課題旨在探討分子伴侶grp94在人類(lèi)常見(jiàn)腫瘤中的表達(dá),評(píng)估其作為腫瘤標(biāo)志和臨床預(yù)測(cè)分子的潛能;并進(jìn)一步通過(guò)體內(nèi)和體外研究探討grp94的促癌作用及靶向grp94的小分子抑制劑的抗癌作用。研究方法1.分子伴侶grp94的臨床研究應(yīng)用基因組數(shù)據(jù)庫(kù),從基因水平探討grp94在人類(lèi)常見(jiàn)腫瘤中的表達(dá),并進(jìn)一步分析grp94基因表達(dá)和臨床表型和預(yù)后的相關(guān)性。構(gòu)建腫瘤組織芯片,從蛋白水平驗(yàn)證grp94在人類(lèi)常見(jiàn)腫瘤中的表達(dá),并進(jìn)一步分析grp94蛋白表達(dá)和臨床表型的相關(guān)性。2.分子伴侶grp94的促癌作用及機(jī)制研究構(gòu)建grp94降表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方法,建立grp94降表達(dá)和對(duì)照細(xì)胞系。利用細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)(CCK-8實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn))檢測(cè)grp94對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。利用Western blot檢測(cè)grp94降表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡蛋白caspase-7、CHOP及磷酸化JNK蛋白表達(dá)的影響。應(yīng)用JNK抑制劑干預(yù)grp94降表達(dá)細(xì)胞系,利用細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)及Western blot檢驗(yàn)JNK磷酸化對(duì)grp94蛋白促癌作用的影響。3.靶向grp94的小分子抑制抗癌作用的體內(nèi)、外研究應(yīng)用grp94小分子抑制劑治療腫瘤細(xì)胞,應(yīng)用細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)(CCK-8實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn))觀察其對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響,Western blot檢驗(yàn)其對(duì)grp94、HSP70及凋亡蛋白caspase-7及survivin等表達(dá)的影響。構(gòu)建免疫缺陷小鼠皮下移植瘤模型,應(yīng)用grp94小分子抑制劑治療,觀察其對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響,Western blot檢驗(yàn)其對(duì)體內(nèi)grp94、HSP70及凋亡相關(guān)蛋白PARP的影響;提取脾臟和腫瘤淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)脾臟及腫瘤Myeloid細(xì)胞分化和浸潤(rùn)的影響。研究結(jié)果1.grp94編碼基因和蛋白在人類(lèi)常見(jiàn)腫瘤中均呈過(guò)表達(dá),grp94過(guò)表達(dá)和臨床侵襲性表型和不良預(yù)后密切相關(guān)。在乳腺癌中,grp94過(guò)表達(dá)和三陰性乳腺癌、HER2高表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較差的組織學(xué)分化、疾病進(jìn)展和較差的生存顯著相關(guān)。在結(jié)直腸和肺癌中,grp94過(guò)表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較差的組織學(xué)分化、疾病進(jìn)展和較差的生存顯著相關(guān)。2.grp94降表達(dá)腫瘤細(xì)胞增殖減少,凋亡增加,活化型Caspase-7及CHOP蛋白表達(dá)增加,JNK磷酸化增強(qiáng);應(yīng)用JNK抑制劑可逆轉(zhuǎn)grp94降表達(dá)引起的細(xì)胞增殖和凋亡,同時(shí)減少活化型caspase-7和CHOP蛋白的表達(dá)。3.靶向grp94的小分子抑制劑可抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,促進(jìn)活化型caspase-7的表達(dá),減少survivin蛋白的表達(dá),不影響grp94和HSP70蛋白的表達(dá)。4.靶向grp94的小分子抑制可抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng),呈劑量依賴(lài)性,并促進(jìn)凋亡相關(guān)蛋白PARP的表達(dá),不影響grp94和HSP70蛋白的表達(dá)。研究結(jié)論1.grp94在人類(lèi)腫瘤中過(guò)表達(dá),提示侵襲性表型和不良預(yù)后。2.grp94通過(guò)抑制JNK磷酸化發(fā)揮促癌作用。3.靶向grp94的小分子抑制在體外及小鼠體內(nèi)發(fā)揮抗癌作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R730.2
【圖文】：

p90b1 基因在常見(jiàn)腫瘤組織中表達(dá)水平顯著高于相應(yīng)正常組織，表明 grp9進(jìn)腫瘤發(fā)生的腫瘤微環(huán)境中扮演重要作用。在含有 hsp90b1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)的 158 個(gè)數(shù)據(jù)集中，hsp90b1 在腫瘤組織表于正常組織的數(shù)據(jù)集為 136 個(gè)（圖 1a；限定條件為：1.5 倍于正常組織，P < 0因排序 All）；在含有 hsp90b1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)的 93 個(gè)數(shù)據(jù)集中，hsp90b1 在組織表達(dá)高于正常組織的數(shù)據(jù)集為 80 個(gè)（圖 1a；限定條件為：1.5 倍于正織，P < 0.05，基因排序 Top 10%）；在含有 hsp90b1 基因表達(dá)數(shù)據(jù)的 48 個(gè)集中，hsp90b1 在腫瘤組織表達(dá)高于正常組織的數(shù)據(jù)集為 40 個(gè)（圖 1a；限件為：1.5 倍于正常組織，P < 0.05，基因排序 Top 5%）；在含有 hsp90b1 基達(dá)數(shù)據(jù)的 11 個(gè)數(shù)據(jù)集中，hsp90b1 在腫瘤組織表達(dá)高于正常組織的數(shù)據(jù)集 個(gè)（圖 1a；限定條件為：1.5 倍于正常組織，P < 0.05，基因排序 Top 1%p90b1 基因在常見(jiàn)的腫瘤組織，包括乳腺癌、肉瘤、結(jié)腸癌、肺癌、食管頸部腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central nervous system，CNS）腫瘤、前列腺癌癌、宮頸癌、膽囊癌、黑色素瘤及卵巢癌中的表達(dá)水平顯著高于正常組織（；限定條件為：1.5 倍于正常組織，P < 0.05，基因排序 Top 10%）。

b1 基因在乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌中表達(dá)上調(diào)。a 592）顯示乳腺癌組織中 hsp90b1 表達(dá)顯著高于正常數(shù)據(jù)集（n = 2136）顯示乳腺癌組織中 hsp90b1 表達(dá). TCGA 結(jié)腸癌數(shù)據(jù)集（n = 237）顯示結(jié)直腸癌組織腸癌組織中的表達(dá)無(wú)顯著差異；d. Ki 結(jié)直腸癌數(shù)據(jù)組織中 hsp90b1 表達(dá)顯著高于癌旁正常組織（Adjae. Hou 肺癌數(shù)據(jù)集（n = 146）顯示肺鱗狀細(xì)胞癌（）、肺腺癌（Adecocarcinoma，AC）和小細(xì)胞肺癌（SC）中 hsp90b1 表達(dá)顯著高于正常肺組織；f. Selama肺腺癌組織中 hsp90b1 表達(dá)顯著高于癌旁正常組織** p < 0.01，*** p < 0.001，**** p < 0.0001）。因表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性ine Research Premium Edition 版本，我們下載所有

15圖 3. 三陰性乳腺癌患者 hsp90b1 基因表達(dá)高于其它非三陰性乳腺癌。9 項(xiàng)立的研究，包括 a. Curtis 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 2136）、b. Bonnefoi 乳腺癌數(shù)據(jù)（n = 124）、c. Miyake 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 115）、d. Minn 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 96）、. Julka 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 39）、f. Gluck 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 151）、g. Kao 乳腺數(shù)據(jù)集（n = 327）、h. Bittner 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n = 204）、i. Lu 乳腺癌數(shù)據(jù)集（n 129）的分析結(jié)果顯示 hsp90b1 基因在三陰性乳腺癌患者的表達(dá)水平顯著高于三陰性乳腺癌患者，提示腫瘤侵襲性更高，預(yù)后較差（* p < 0.05，** p < 0.01，

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本文編號(hào)：2767804