【摘要】：目的(1)采用聲諾維(SonoVue)聯(lián)合超聲輻照介導(dǎo)PEX基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞,旨在探討其可行性以及PEX基因?qū)κ竽z質(zhì)瘤C6細(xì)胞的影響。(2)將超聲靶向微泡破壞與脂質(zhì)體聯(lián)合來增強(qiáng)PEX基因在鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,旨在探討超聲靶向微泡破壞增強(qiáng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的可行性及優(yōu)勢所在。方法(1)體外生長良好的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞經(jīng)0.25%胰酶消化計數(shù)后,按照2×105/孔的密度接種于6孔板,分為空白對照組、超聲+微泡組、質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+超聲+微泡組。超聲輻照參數(shù)為頻率1MHz、輻照功率1.0W/cm2、持續(xù)時間30s、占空比20%。各組分別相應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)24h,應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的表達(dá)情況、流式細(xì)胞儀檢測各組熒光細(xì)胞比例以此來評估基因轉(zhuǎn)染率、逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測細(xì)胞中PEX mRNA的表達(dá)量、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的分布。(2)體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞按照實驗要求可分為對照組、微泡組、超聲組、超聲+微泡組、脂質(zhì)體組、超聲+微泡+脂質(zhì)體組。經(jīng)過相應(yīng)的處理,24 h后應(yīng)用熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)、流式細(xì)胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染率。結(jié)果(1)質(zhì)粒+超聲+微泡組:熒光顯微鏡下表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞最多,流式細(xì)胞儀檢測基因轉(zhuǎn)染率最高,逆轉(zhuǎn)錄PCR可見特異性PEX電泳條帶高表達(dá),流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布G0/G1期百分?jǐn)?shù)明顯升高,與其他各組細(xì)胞相比,上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。(2)熒光顯微鏡下,超聲+微泡+脂質(zhì)體組可見大量EGFP表達(dá),明顯多于其他各組;流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染率,超聲+微泡組為(8.59±1.94)%,脂質(zhì)體組為(13.71±2.99)%,明顯高于前者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);超聲+微泡+脂質(zhì)體組為(18.31±2.66)%,明顯高于其他各組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論(1)聲諾維聯(lián)合超聲輻照可增強(qiáng)PEX基因在鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染;體外實驗中,PEX基因可通過影響細(xì)胞周期來抑制鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的增殖。(2)超聲靶向微泡破壞可增強(qiáng)脂質(zhì)體介導(dǎo)PEX基因在鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R445.1;R739.41
【圖文】：

第一部分 超聲靶向微泡破壞增強(qiáng) PEX 基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞的實驗研究3 實驗結(jié)果3.1 各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率1) 加入質(zhì)粒的各組細(xì)胞于熒光顯微鏡下 EGFP 的表達(dá)（圖 1-1）：空白對照組、超聲+微泡組因未加入重組質(zhì)粒 pEGFP-C1-PEX，所以無表達(dá)綠色熒光蛋白之說，不可能出現(xiàn)綠色熒光蛋白；質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組可見極少量綠色熒光蛋白或無綠色熒光蛋白表達(dá)；質(zhì)粒+超聲組可見少量綠色熒光蛋白表達(dá)；而質(zhì)粒+微泡+超聲組可見較多的綠色熒光蛋白表達(dá)，與以上各組細(xì)胞比較EGFP 表達(dá)量最多。

部分 超聲靶向微泡破壞增強(qiáng) PEX 基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞的實0.18)％ ，兩者之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；超聲輻照基因轉(zhuǎn)染率有一定程度的提高，為(1.02±0.29)％，與質(zhì)粒組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而超聲聯(lián)合微泡共同作用時，提高，即質(zhì)粒+超聲+微泡組轉(zhuǎn)染率為(8.59±1.94)％，與其計學(xué)意義(P 均＜0.05)。

圖 1-3 加入質(zhì)粒的各組細(xì)胞表達(dá) PEX mRNA 的比較圖1：質(zhì)粒組；2：質(zhì)粒+微泡組；3：質(zhì)粒+超聲組；4：質(zhì)粒+超聲+微式細(xì)胞儀檢測 C6 細(xì)胞周期分布（表 1-1，圖 1-4）白對照組相比，質(zhì)粒+超聲組細(xì)胞中G0/G1期細(xì)胞比例有一定的.47)％，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而質(zhì)粒+超聲+微中G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加為(75.09±2.46)％，S期比例顯.63)％，與其余各組細(xì)胞相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05表 1-1 流式細(xì)胞儀檢測 C6 細(xì)胞周期分布(％， x ±s) 別 G0/G1期 S期 G2對照組微泡組粒組微泡組51.18±1.2751.75±1.8752.05±2.6152.12±1.4728.84±1.8928.02±2.3228.57±1.8028.16±1.8519.920.219.319.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2766616