【摘要】：[目的]研究生理性深層海水(PDSW)聯(lián)合熱療對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌SGC-7901細(xì)胞株、裸鼠皮下SGC-7901移植瘤中相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響,為PDSW與熱療聯(lián)合治療胃癌提供理論基礎(chǔ)。[方法]第一部分:研究探討PDSW聯(lián)合熱療的體外抗癌作用及其機(jī)制。在體外培養(yǎng)的胃癌SGC-7901細(xì)胞株被隨機(jī)分為三組:空白組、生理鹽水組和PDSW組;空白組的培養(yǎng)基不做任何處理,PDSW組在培養(yǎng)基中加入PDSW,生理鹽水組則加入等量的生理鹽水,24小時(shí)后,每天分別置于培養(yǎng)箱中,在37℃(持續(xù)培養(yǎng))、40℃熱療6h及43℃熱療1h,在37℃復(fù)溫后0d、1d、2d、3d,分別繪制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,進(jìn)行MTT檢測(cè),并檢測(cè)細(xì)胞克隆形成率和細(xì)胞凋亡率;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析檢測(cè)各樣品細(xì)胞中的PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21 和 P16 基因的表達(dá),Western Blot 檢測(cè)各組樣品細(xì)胞中 PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21 和 P16 蛋白表達(dá)。第二部分:研究PDSW聯(lián)合熱療對(duì)SGC-7901細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用機(jī)制。選擇4-5周齡的健康裸鼠50只,雌雄各半,將SGC-7901細(xì)胞注射至裸鼠皮下,建立SGC-7901人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型;待移植瘤直徑長(zhǎng)至1cm時(shí),將裸鼠隨機(jī)分成5組,每組10只,雌雄各半,分別進(jìn)行H20+RT、H2O+40℃、H2O+43℃、PDSW+40℃、PDSW+43℃處理,繪制裸鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線,觀察裸鼠腫瘤組織切片。并提取組織中的RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各裸鼠腫瘤組織中 PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16基因的表達(dá),Western Blot檢測(cè)各組裸鼠腫瘤組織中PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16蛋白表達(dá)。[結(jié)果]第一部分:PDSW聯(lián)合熱療對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞抗癌機(jī)制的研究結(jié)果表明,在37℃常規(guī)培養(yǎng)條件下,PDSW能抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖,當(dāng)PDSW聯(lián)合熱療對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞進(jìn)行處理后,其增殖能力受到更明顯的抑制。與之相似,對(duì)細(xì)胞凋亡也出現(xiàn)類似的影響。PDSW聯(lián)合熱療能使SGC-7901細(xì)胞中PTEN、Caspase-3、抑癌基因p53、p21和p16基因和蛋白的上調(diào)表達(dá),而抑制 Ki67、COX-2、Bcl-2、NF-κB、survivin 以及 vimentin 基因和蛋白的表達(dá),進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞增殖�；谝陨辖Y(jié)果,初步斷定PDSW聯(lián)合熱療可以有效地抑制SGC-7901細(xì)胞增殖并且促進(jìn)它的凋亡。第二部分:PDSW聯(lián)合熱療對(duì)體內(nèi)腫瘤抑制作用的影響研究結(jié)果表明,在37℃常規(guī)培養(yǎng)條件下,PDSW能抑制裸鼠移植瘤的增殖,當(dāng)與熱療聯(lián)合時(shí),抑制作用顯著增強(qiáng),與第一部分的結(jié)果相似,用PDSW聯(lián)合熱療處理患有胃癌移植瘤的裸鼠,其癌組織中 NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin 和 Vimentin 蛋白表達(dá)明顯受抑,而PTEN、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16蛋白的表達(dá)明顯上調(diào),通過(guò)調(diào)控促凋亡基因及凋亡抑制基因,從而有效抑制胃癌細(xì)胞的增殖�；谝陨辖Y(jié)果得出,PDSW聯(lián)合熱療能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,最終殺死腫瘤細(xì)胞,使胃癌得到治療。[結(jié)論]無(wú)論是體外培養(yǎng)的人胃癌SGC-7901細(xì)胞株,還是裸鼠中的SGC-7901移植瘤,在常規(guī)條件下,PDSW能導(dǎo)致SGC-7901細(xì)胞增殖受抑,當(dāng)與熱療聯(lián)合進(jìn)行處理后,對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的抑制效果更為顯著。熱療聯(lián)合PDSW能激活胃癌 SGC-7901 細(xì)胞和移植瘤組織中 PTEN、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和 P16 蛋白的上調(diào)表達(dá),而抑制 NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin 和 Vimentin基因和蛋白的表達(dá)。綜上所述,PDSW聯(lián)合熱療能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,最終殺死腫瘤細(xì)胞,使胃癌得到治療。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2
【圖文】：

特別是在４３°Ｃ的ＰＤＳＷ組抑制最為明顯。不同處逡逑理?xiàng)l件下ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞克隆形成情況（圖１．２）及形成率（圖１．３），空白組、對(duì)逡逑照組和實(shí)驗(yàn)組的克隆率均隨溫度的升高而降低，說(shuō)明高溫抑制細(xì)胞的克隆形成，逡逑并且在４０°Ｃ和４３°Ｃ下，ＰＤＳＷ組的克隆率顯著低于空白組和對(duì)照組，由此可見(jiàn)，逡逑ＰＤＳＷ可能通過(guò)抑制ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞活性，影響細(xì)胞克隆的形成。逡逑ｃｏｋ邐邐邋ｍｍ逡逑ＩＶ逡逑二．餐入逡逑？一邐；逡逑Ａ邋（４0ｘ）逡逑ＣＯＮ邐ＮＣ邐ＰＤＳＷ逡逑Ｂ邋（２０0ｘ）逡逑圖１．２

４．細(xì)胞爬片ＨＥ染色結(jié)果逡逑光學(xué)顯微鏡下，ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，表現(xiàn)為核紫漿紅，核大深染。并逡逑且在不同溫度的處理?xiàng)l件下，細(xì)胞形態(tài)變化無(wú)明顯差異（圖１．４）。逡逑ＣＯＮ邐ＮＣ邐ＰＤＳＷ逡逑＾邋ＩｌｌｌＪＩ逡逑Ａ邋（１０0ｘ）逡逑３６逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｔｈｅ邋ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ＳＧＣ－７９０１邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｌｉｍｂｉｎｇ邋ｐｉｅｃｅ逡逑５．流式細(xì)胞分析結(jié)果逡逑ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ檢測(cè)ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞凋亡的結(jié)果（圖１．５，邋１．６），流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)逡逑果表明，三個(gè)組ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞的凋亡均隨溫度的升高而上升，且在三個(gè)溫度處逡逑理?xiàng)l件下，同正常組相比，ＰＤＳＷ組細(xì)胞凋亡明顯增加，在４（ＴＣ和４３°Ｃ下呈顯逡逑著性差異。說(shuō)明熱療能加快ＳＧＣ－７９０１細(xì)胞的凋亡，且在ＰＤＳＷ聯(lián)合熱療的條件逡逑下，ＰＤＳＷ更能促進(jìn)人胃癌細(xì)胞的凋亡。逡逑３７逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2765520