【摘要】：背景與目的:肝癌在我國是最常見的惡性腫瘤之一,在全國癌癥死亡病因中排在第二位;腫瘤的發(fā)生發(fā)展與其炎癥微環(huán)境密切相關(guān)。隨著分子生物學(xué)和生物信息學(xué)的發(fā)展,相同或不同的研究學(xué)者發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞在與微環(huán)境共同進(jìn)化的過程中可促進(jìn)腫瘤炎癥微環(huán)境的形成。研究腫瘤微環(huán)境中高表達(dá)的促炎因子與炎癥-癌癥信號(hào)通路關(guān)系已成為目前腫瘤微環(huán)境研究重點(diǎn)。C-X-C結(jié)構(gòu)趨化因子配體2(CXCL2)是一類主要趨化中性粒細(xì)胞的趨化因子,與其特異性受體C-X-C結(jié)構(gòu)趨化因子受體2(CXCR2)結(jié)合后可促進(jìn)中性粒細(xì)胞的趨化和部分腫瘤細(xì)胞的生長和遷移。我們的前期研究在選擇性活化的巨噬細(xì)胞(M2型)與肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中驗(yàn)證出了差異分泌蛋白CXCL2,中和共培養(yǎng)體系中的CXCL2后肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力降低,提示了CXCL2可能對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能產(chǎn)生影響。目前關(guān)于CXCL2與肝癌發(fā)生發(fā)展間關(guān)系的報(bào)導(dǎo)還比較少,本研究將進(jìn)一步驗(yàn)證CXCL2過表達(dá)在肝癌細(xì)胞上會(huì)對(duì)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)功能產(chǎn)生什么樣的影響,為肝癌的早斷、尋求新的治療方案、改善患者預(yù)后提供依據(jù)。方法:將過表達(dá)CXCL2基因的慢病毒載體感染SMMC-7721肝癌細(xì)胞,即設(shè)為慢病毒感染組;空白對(duì)照組為不做任何感染處理的SMMC-7721肝癌細(xì)胞。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印跡法(Western-blot)分別檢測CXCL2基因mRNA和CXCL2蛋白的表達(dá)情況;用CCK-8法檢測細(xì)胞活力來驗(yàn)證細(xì)胞的增殖能力;利用Transwell法細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來評(píng)估肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力;運(yùn)用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞粘附力;使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。運(yùn)用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:穩(wěn)定過表達(dá)CXCL2的SMMC-7721肝癌細(xì)胞株構(gòu)建成功,慢病毒感染組CXCL2基因mRNA和CXCL2蛋白的表達(dá)均高于空白對(duì)照組;CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),慢病毒感染組細(xì)胞增殖相對(duì)較多(P0.05);Transwell法細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),慢病毒感染組穿過基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)比空白對(duì)照組多且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察在劃痕后0h、8h、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的遷移情況并計(jì)算遷移率,結(jié)果顯示慢病毒感染組從8h開始其細(xì)胞的遷移率較高(8h時(shí)P=0.01,24h時(shí)P=0.035);細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)慢病毒感染組粘附細(xì)胞的數(shù)量較少(P0.05);兩組細(xì)胞周期檢測結(jié)果為,慢病毒感染組細(xì)胞G1期所占比例較高(P=0.034),S期所占比例較低(P=0.017),G2/M期無明顯改變。結(jié)論:通過慢病毒感染,CXCL2基因在SMMC-7721肝癌細(xì)胞株上穩(wěn)定過表達(dá),CXCL2可促進(jìn)SMMC-7721細(xì)胞的增殖、增強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲能力,抑制細(xì)胞的粘附;根據(jù)兩組細(xì)胞的細(xì)胞周期結(jié)果,推斷細(xì)胞周期可能被阻滯在G1期。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

100× 100×圖 1-1 慢病毒感染 SMMC-7721 組轉(zhuǎn)染結(jié)果（100×）。A：光鏡；B：熒光顯微鏡。Figure 1-1 lentiviral vector transfection into SMMC-7721 cells.3.2 qRT-PCR 檢測兩組細(xì)胞中 CXCL2 mRNA 的表達(dá)量。

肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響研究 2018 屆碩士學(xué)位論文28圖1-2 兩組細(xì)胞CXCL2的mRNA相對(duì)表達(dá)情況。CON:空白對(duì)照組；OE：慢病毒感染組（。*P＜0.05）。Figure 1-2 The mRNA expression of CXCL2 in the two groups.（*P＜0.05）.3.3 Western Blot 檢測兩組細(xì)胞 CXCL2 蛋白表達(dá)情況兩組細(xì)胞 CXCL2 蛋白表達(dá)情況如圖 1-3 所示。過表達(dá) CXCL2 慢病毒感染組 CXCL2 蛋白的表達(dá)高于空白對(duì)照組。CXCL2 11KDβ-actin 42KDOE CON圖 1-3CXCL2 蛋白在兩組細(xì)胞中的表達(dá)情況；OE：慢病毒感染組；CON：空白對(duì)照組。Figure 1-3 The expressions of CXCL2 protein in the two group cells .綜上所述，穩(wěn)定過表達(dá) CXCL2 基因 SMMC-7721 肝癌細(xì)胞株構(gòu)建成功。

2的mRNA相對(duì)表達(dá)情況。CON:空白對(duì)照組xpression of CXCL2 in the two groups.（*P＜t 檢測兩組細(xì)胞 CXCL2 蛋白表達(dá)CL2 蛋白表達(dá)情況如圖 1-3 所示白的表達(dá)高于空白對(duì)照組。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫思進(jìn);彭小忠;高紅軍;;GROβ在基礎(chǔ)及腫瘤研究領(lǐng)域的新進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2015年10期

2 陳升;劉嬌;張新;謝渭芬;;趨化因子及其受體在肝細(xì)胞癌微環(huán)境中的作用[J];國際消化病雜志;2015年03期

3 于慧杰;吳曄;李峰生;李偉;江其生;;敲低Plk1對(duì)人肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移影響研究[J];中華腫瘤防治雜志;2015年08期

4 孟凡榮;陳琛;萬海粟;周清華;;慢病毒載體及其研究進(jìn)展[J];中國肺癌雜志;2014年12期

5 伊日貴;徐曉艷;李時(shí)榮;;腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究進(jìn)展[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2014年10期

6 劉星;;原發(fā)性肝癌病因與其臨床表現(xiàn)分析[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2013年22期

7 劉頁玲;朱清仙;;CXCL2、HIF-1α在前列腺癌組織中的表達(dá)及意義[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年04期

8 王培園;李結(jié);朱興全;楊桂連;袁子國;;重組病毒載體研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2012年03期

9 Jacqueline C Bracher;Denver T Hendricks;;Clinical significance of serum expression of GROβ in esophageal squamous cell carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2011年21期

10 吉登波;崔景榮;;腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療與炎癥的關(guān)系[J];中國新藥雜志;2010年17期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 李春艷;趨化因子CXCL13在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2017年

2 盧宇;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞—肝癌細(xì)胞三維共培養(yǎng)體系中分泌蛋白的差異及CXCL2在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

3 秦超超;MIP-2對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2017年

4 楊曉宇;趨化因子CCL20誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 鄭敏;miR-192靶向CXCL2基因?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲遷移能力的抑制作用[D];華北理工大學(xué);2017年

2 皇甫冰;基于高通量測序的中國地鼠頰囊鱗癌轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 陳偉;CXCL1對(duì)肝癌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的相關(guān)性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

4 張玉琴;Pokemon基因沉默促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生Fas-及線粒體途徑介導(dǎo)的Caspase-依賴性細(xì)胞凋亡[D];廈門大學(xué);2014年

5 黃林義;抑癌基因p16和p27在原發(fā)性肝癌的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其臨床意義的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2764981