【摘要】：目的闡明CPSF4(剪切和多聚腺苷酸化特異性因子4)在肺癌中是否對(duì)催化花生四烯酸轉(zhuǎn)換成前列腺素的重要限速酶環(huán)氧合酶2具有調(diào)控作用。如有調(diào)控作用,在一定程度上闡明其具體調(diào)控機(jī)制。闡明此二種基因?qū)τ谂R床患者腫瘤分期,腫瘤演進(jìn),大體生存率是否具有臨床病理相關(guān)性。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)通過體外實(shí)驗(yàn)以及臨床病例所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。方法選定兩類肺癌細(xì)胞系,H1299和H460,用慢病毒轉(zhuǎn)染H1299使其穩(wěn)定高表達(dá)CPSF4,用脂質(zhì)體混合質(zhì)粒轉(zhuǎn)染H460使其瞬時(shí)高表達(dá)CPSF4。用脂質(zhì)體混合CPSF4小干擾RNA特異性敲低CPSF4表達(dá),用蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)在蛋白水平過表達(dá)以及敲低CPSF4后細(xì)胞環(huán)氧合酶2蛋白水平的表達(dá)變化。用DNA免疫印跡檢測(cè)在RNA水平過表達(dá)以及敲低CPSF4后細(xì)胞環(huán)氧合酶2 RNA水平的表達(dá)變化。用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)或敲低CPSF4后細(xì)胞遷移能力的變化。用體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)胞增殖能力的變化。用熒光活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)或敲低CPSF4后細(xì)胞環(huán)氧合酶啟動(dòng)子活性的變化。用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)或敲低CPSF4后細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路上重要指標(biāo)蛋白核內(nèi)核外蛋白水平表達(dá)量的變化。用激光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)或敲低CPSF4后細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路上重要指標(biāo)蛋白核內(nèi)核外蛋白水平表達(dá)量的變化。用CHIP和Pulldown實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)CPSF4后細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化蛋白及CPSF4本身與環(huán)氧合酶2啟動(dòng)子區(qū)域DNA結(jié)合量的變化。用IP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺腫瘤細(xì)胞中CPSF4與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化蛋白是否存在結(jié)合。用激光共聚焦實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核中CPSF4與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化蛋白是否存在結(jié)合。購(gòu)買臨床患者組織芯片標(biāo)本,用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法檢測(cè)CPSF4與環(huán)氧合酶2在臨床患者中表達(dá)是否具有相關(guān)性。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法檢測(cè)CPSF4與環(huán)氧合酶2在臨床患者中表達(dá)與若干臨床指標(biāo)是否具有相關(guān)性。用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CPSF4與環(huán)氧合酶2在臨床患者組織標(biāo)本中蛋白水平表達(dá)是否具有相關(guān)性。用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)或敲低CPSF4后腫瘤體積、重量的變化。結(jié)果在肺癌細(xì)胞系H1299和H460中,1.CPSF4與環(huán)氧合酶2在細(xì)胞蛋白水平的表達(dá)存在正相關(guān)性。2.CPSF4與環(huán)氧合酶2在細(xì)胞RNA水平的表達(dá)存在正相關(guān)性。3.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞的遷移能力存在正相關(guān)性。4.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞的侵襲能力存在正相關(guān)性。5.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞的增殖能力存在正相關(guān)性。6.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞環(huán)氧合酶2啟動(dòng)子活性存在正相關(guān)性。7.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路的活性具有正相關(guān)性。8.CPSF4的表達(dá)與細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化蛋白及CPSF4本身與環(huán)氧合酶2啟動(dòng)子區(qū)域DNA結(jié)合量具有正相關(guān)性。9.在肺腫瘤細(xì)胞中存在CPSF4與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路活化蛋白結(jié)合。在臨床患者組織芯片標(biāo)本中10.CPSF4與環(huán)氧合酶2的表達(dá)具有相關(guān)性。11.CPSF4與環(huán)氧合酶2的共同表達(dá)與臨床分期具有正相關(guān)性12.CPSF4與環(huán)氧合酶2的共同表達(dá)與患者存活率具有負(fù)相關(guān)性。在裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)中13.CPSF4和環(huán)氧合酶2的表達(dá)同時(shí)與腫瘤體積及重量存在正相關(guān)性。結(jié)論在肺癌細(xì)胞中,1.過表達(dá)(敲低)CPSF4的表達(dá)使環(huán)氧合酶2的表達(dá)增加(降低)。2.CPSF4通過兩條完全不同的途徑正向調(diào)控環(huán)氧合酶2的表達(dá),其一為間接途徑通過影響細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子κB通路的活性從而影響環(huán)氧合酶2的表達(dá)。3.其二為直接結(jié)合環(huán)氧合酶2啟動(dòng)子從而影響環(huán)氧合酶2的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

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2 鄧平;環(huán)氧合酶-2與肺癌[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(呼吸系統(tǒng)分冊(cè));2003年03期

3 劉軍;環(huán)氧合酶-2在腫瘤預(yù)防與治療中的應(yīng)用進(jìn)展[J];實(shí)用癌癥雜志;2004年02期

4 張金洲;王文;陳文生;朱海龍;劉金成;劉維永;易定華;;創(chuàng)傷性急性呼吸窘迫綜合征時(shí)環(huán)氧合酶2的表達(dá)及意義[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年12期

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7 陳美s

本文編號(hào)：2759421