【摘要】：目的:研究表明乳腺癌組織中存在一群具有CD44+/CD24-表型和自我更新能力等干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞,將此細(xì)胞群稱為乳腺癌干細(xì)胞(Breast Cancer Stem Cells,BCSCs)。對于常規(guī)的化療藥物,腫瘤干細(xì)胞比其他腫瘤細(xì)胞更易產(chǎn)生耐藥性,但腫瘤干細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的分子機制尚不明確,因此靶向腫瘤干細(xì)胞是目前治療癌癥的重大挑戰(zhàn)。嗎啡是典型的阿片受體激動劑,外源性嗎啡通過模擬體內(nèi)內(nèi)源性腦啡肽的作用,激動中樞神經(jīng)阿片受體,產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果。目前臨床可被應(yīng)用于麻醉和緩解癌癥轉(zhuǎn)移患者的疼痛。然而,最新研究發(fā)現(xiàn)嗎啡和抗癌藥同時給予癌癥患者尤其是有癌癥轉(zhuǎn)移的患者時,嗎啡在止痛的同時也激動非典型阿片受體信號進而促進腫瘤發(fā)展。已有研究證明嗎啡可通過激活阿片受體而磷酸化表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Recptor,EGFR),促進腫瘤細(xì)胞增殖,增加腫瘤的侵襲性。嗎啡也可以通過紫杉醇敏感的G蛋白偶聯(lián)受體(G Protein Coupled Receptors,GPCRs)和一氧化氮(NO)激活MAPK/ERK通路,促進乳腺癌細(xì)胞的增殖。此外,嗎啡通過增加神經(jīng)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因1(Neuroepithelial Cell-transforming Gene 1,NET1)的表達量促進乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。故嗎啡臨床應(yīng)用過程中促進腫瘤發(fā)展的機制研究備受關(guān)注。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)嗎啡促進乳腺癌細(xì)胞的成球能力,上調(diào)干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Oct4,Sox2和Nanog的表達量。經(jīng)嗎啡處理的MCF-7細(xì)胞中側(cè)群細(xì)胞(Side Population,SP)增加,BT549細(xì)胞中的CD44+/CD24-比例增加。與此同時,嗎啡激活wnt/β-catenin信號通路,誘導(dǎo)上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,促進轉(zhuǎn)移。嗎啡降低乳腺癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性,但嗎啡拮抗劑納美芬可以逆轉(zhuǎn)嗎啡誘導(dǎo)的腫瘤干細(xì)胞和乳腺癌耐藥。另外,在nod/scid裸鼠模型中,納美芬逆轉(zhuǎn)嗎啡促進的腫瘤發(fā)生�？傊�,本研究闡述了嗎啡通過促進腫瘤生長和富集腫瘤干細(xì)胞而耐藥,因此揭示了嗎啡的一個全新的角色以及為嗎啡的臨床應(yīng)用提供了新的指導(dǎo)。方法:1.通過成球?qū)嶒灆z測嗎啡對乳腺癌細(xì)胞干性特性的影響;利用側(cè)群細(xì)胞法檢測mcf-7細(xì)胞泵出hoechst33342染料進而觀察嗎啡對腫瘤干細(xì)胞的作用;通過流式細(xì)胞儀檢測bt549乳腺癌干細(xì)胞表面分子標(biāo)記cd44+/cd24-進而檢測嗎啡對乳腺癌干細(xì)胞的影響。2.實時定量rt-pcr(quantitativereversetranscriptasepolymerasechainreaction,rt-pcr)從mrna水平反映嗎啡對干性因子oct4,sox2和nanog的mrna水平影響;westernblot法從蛋白水平檢測嗎啡對oct4,sox2和nanog的表達量的調(diào)節(jié)。3.mcf-7和bt549細(xì)胞分別經(jīng)0μm、1μm、10μm嗎啡處理4天后,通過實時定量rt-pcr檢測嗎啡對emt過程中相關(guān)分子cdh1,cdh2和ctnnb1的mrna水平的影響;利用westernblot法和免疫熒光實驗從蛋白水平檢測嗎啡對e-cadherin,n-cadherin和β-catenin的影響;通過transwell方法檢測嗎啡對mcf-7和bt549細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響;通過核/質(zhì)分離實驗檢測嗎啡對細(xì)胞核中β-catenin表達量變化的影響。4.bt549細(xì)胞經(jīng)0μm、1μm、10μm嗎啡處理4天后,再分別聯(lián)合使用0.5μm阿霉素或10nm紫杉醇各兩天,采用mtt法檢測不同濃度嗎啡對化療藥阿霉素和紫杉醇降低細(xì)胞生存能力的影響;westernblot法從蛋白水平檢測在化療藥存在時嗎啡對凋亡相關(guān)蛋白(cleavedparp,cleavedcaspase3)的影響;利用annexinv-fitc/pi雙染法檢測化療藥誘導(dǎo)的bt549細(xì)胞凋亡群體數(shù)量在加入嗎啡后的變化。5.采用mtt法檢測納美芬是否逆轉(zhuǎn)嗎啡對化療藥物阿霉素或紫杉醇降低細(xì)胞生存能力的影響。westernblot法從蛋白質(zhì)水平檢測納美芬對嗎啡引起的bt549細(xì)胞對阿霉素(或紫杉醇)凋亡蛋白水平降低的影響;利用annexinv-fitc/pi雙染法檢測納美芬對嗎啡引起的bt549細(xì)胞對阿霉素(或紫杉醇)化療抵抗的逆轉(zhuǎn)作用;利用成球?qū)嶒灆z測納美芬對嗎啡引起的bt549細(xì)胞抵抗化療藥的逆轉(zhuǎn)作用。6.利用異體種植實驗檢測嗎啡在裸鼠體內(nèi)對成瘤能力的影響,以及納美芬對嗎啡引起的成瘤能力增強的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果:1.成球?qū)嶒灲Y(jié)果顯示,與對照組相比,1μm、10μm濃度的嗎啡均促進mcf-7和bt549細(xì)胞中乳腺癌干細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記cd44+/cd24-的結(jié)果顯示cd44+/cd24-比例在嗎啡處理后明顯升高;側(cè)群細(xì)胞的比例從0.63%±0.3%增加到3.4%±0.15%。2.rt-pcr結(jié)果顯示在mcf-7和bt549細(xì)胞中oct4,sox2和nanog的相對表達量都明顯升高;同時westernblot結(jié)果也表明嗎啡上調(diào)oct4,sox2和nanog的表達量。3.與對照組相比,細(xì)胞經(jīng)1μm、10μm嗎啡處理后,rt-pcr結(jié)果顯示嗎啡下調(diào)cdh1,同時上調(diào)cdh2和ctnnb1的mrna水平;westernblot結(jié)果顯示,e-cadherin的表達量減少,而n-cadherin,β-catenin的表達量增加;免疫熒光實驗結(jié)果顯示,在0μm、1μm和10μm嗎啡組中,e-cadherin的表達量逐漸減少,而n-cadherin,β-catenin的表達量逐漸增加;核質(zhì)分離實驗結(jié)果顯示嗎啡上調(diào)β-catenin在細(xì)胞核中的表達量;transwell實驗結(jié)果表明,嗎啡可增加bt549細(xì)胞的遷移和侵襲的能力。4.mtt實驗結(jié)果顯示嗎啡并沒有改變bt549細(xì)胞的生存能力,但在阿霉素或紫杉醇誘導(dǎo)凋亡后,嗎啡明顯提高bt549細(xì)胞的生存能力;westernblot結(jié)果顯示經(jīng)1μm、10μm嗎啡處理后bt549細(xì)胞中的cleavedparp和cleavedcaspase-3的表達量均減少。凋亡實驗結(jié)果顯示bt549細(xì)胞被阿霉素或紫杉醇誘導(dǎo)的凋亡可以被嗎啡抑制。5.mtt,westernblot和凋亡實驗結(jié)果顯示納美芬對嗎啡引起的乳腺癌細(xì)胞對阿霉素或紫杉醇的凋亡減少;成球?qū)嶒灡砻骷{美芬逆轉(zhuǎn)嗎啡引起的乳腺癌干細(xì)胞數(shù)量增加。6.nod/scid裸鼠成瘤實驗結(jié)果顯示經(jīng)嗎啡處理后nod/scid裸鼠的成瘤能力增強,成瘤率提高,瘤體也有所增大,這些效果可以被嗎啡拮抗劑納美芬所逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:實驗結(jié)果表明嗎啡可以促進乳腺癌細(xì)胞的增殖、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲,促進腫瘤干細(xì)胞特性從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對化療藥物的抵抗,但是納美芬可以逆轉(zhuǎn)嗎啡引起的乳腺癌細(xì)胞對化療藥阿霉素和紫杉醇的耐藥性。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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3 潘文;腫瘤干細(xì)胞：為根治癌癥帶來新曙光[N];中國醫(yī)藥報;2007年

4 記者 葉芳 通訊員 黃金娟;化療可刺激普通腫瘤細(xì)胞變腫瘤干細(xì)胞[N];廣東科技報;2009年

5 記者 藍建中;滅腫瘤干細(xì)胞有望根治癌癥[N];新華每日電訊;2013年

6 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司供稿;腫瘤干細(xì)胞將成治癌新靶點[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

7 記者 楊帆　實習(xí)生 楊周;“腫瘤干細(xì)胞研究”在渝實施[N];重慶日報;2009年

8 何雷;“973”計劃腫瘤干細(xì)胞項目啟動[N];健康報;2009年

9 記者 陳楓　通訊員 黃金娟 陳捚;廣東院士研究成果將影響癌癥治療策略[N];南方日報;2009年

10 高凡;化療或是癌癥復(fù)發(fā)根源[N];科學(xué)導(dǎo)報;2009年

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2 林鋮;人miR-489靶向p38α誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬[D];浙江大學(xué);2015年

3 孫翠翠;雙聯(lián)芐類化合物Riccardin D的抗腫瘤作用及機制研究[D];山東大學(xué);2015年

4 孫蓉;納米載體同步輸送藥物用于腫瘤干細(xì)胞治療的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 趙志舉;miR-221對正常乳腺和乳腺腫瘤干細(xì)胞調(diào)控的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

6 蔡啟亮;CD44+腫瘤干/祖細(xì)胞在前列腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用和機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

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9 李鋒;腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物檢測對Ⅰ期肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價值及機制學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2011年

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1 邱暢;CD44聯(lián)合Prpc作為胃癌干細(xì)胞的初步研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

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3 毛驍麗;穿膜肽聯(lián)合鹽霉素磷脂膠束靶向腫瘤干細(xì)胞的實驗研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 王喜隆;~1H-MVS參數(shù)Cho/Cr與腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物關(guān)系研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：2748502