【摘要】：酪氨酸激酶抑制劑(TKI)能使晚期腎癌患者不同程度臨床獲益,但目前尚缺乏能夠準(zhǔn)確評估患者療效及預(yù)后的臨床和分子生物學(xué)指標(biāo)。而且毒副反應(yīng)引起的停藥、減藥也可能增加患者治療失敗的風(fēng)險(xiǎn)。此外,臨床上缺乏更加精確有效的病情評估及監(jiān)測手段。故本研究對我中心TKI治療的晚期腎癌患者進(jìn)行相關(guān)臨床和實(shí)驗(yàn)研究,分析患者的臨床結(jié)果及影響預(yù)后的因素,探討CAIX、HIF-2α、VEGFR-2和VEGFR-3這4種缺氧相關(guān)蛋白作為患者療效與預(yù)后標(biāo)志物的臨床價(jià)值；通過分析血藥濃度與毒副反應(yīng)的相關(guān)性,初步探討血藥濃度監(jiān)測對TKI治療晚期腎癌的臨床意義；并對SET-iFISH技術(shù)檢測腎癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)的可行性進(jìn)行初步研究,為CTC檢測在腎癌的診斷及分子靶向藥物治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。第一部分：TKI治療晚期腎癌的臨床結(jié)果與相關(guān)分子標(biāo)志物的檢測目的：回顧性研究我中心TKI治療晚期腎癌患者的臨床結(jié)果,分析影響預(yù)后的因素,并探討CAIX、HIF-2α、VEGFR-2和VEGFR-3作為患者療效與預(yù)后標(biāo)志物的臨床價(jià)值。材料和方法：對242例接受TKI治療的晚期腎癌患者的臨床資料進(jìn)行回顧性研究,采用Kaplan-Meier法計(jì)算患者的無進(jìn)展生存期(PFS)和總生存期(OS)。應(yīng)用單因素和多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析患者PFS和OS的影響因素,并對其中57例腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)的組織標(biāo)本進(jìn)行CAIX、HIF-2α、VEGFR-2和VEGFR-3免疫組化檢測,分析這4種缺氧相關(guān)蛋白的表達(dá)情況與患者療效和預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果：本組患者中位PFS為11.4個(gè)月,中位OS為24.2個(gè)月,客觀緩解率為14.8%,疾病控制率為82.6%。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型評估顯示高ECOG評分、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移是患者TKI治療后影響PFS和OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。CAIX、HIF-2α、VEGFR-2和VEGFR-3 在 ccRCC中均有不同程度表達(dá),VEGFR-3表達(dá)陽性的患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.0433)。4種蛋白在ccRCC中的表達(dá)情況與患者的PFS及最佳RECIST療效反應(yīng)無顯著性相關(guān)。ccRCC的病理Furman分級是影響患者疾病進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(HR:2.141,95% CI:1.222-3.752, p=0.0078)。結(jié)論：TKI治療能使晚期腎癌患者不同程度臨床獲益。腎癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能與ccRCC中VEGFR-3的表達(dá)情況相關(guān),但是通過檢測ccRCC組織中CAIX、HIF-2α、 VEGFR-2和VEGFR-3的表達(dá)情況尚不能作為晚期腎癌患者TKI治療療效和預(yù)后的指標(biāo)�；颊叩念A(yù)后與體能狀態(tài)、是否發(fā)生淋巴結(jié)和骨轉(zhuǎn)移以及腫瘤的分化程度相關(guān)。第二部分：TKI血藥濃度與毒副反應(yīng)的相關(guān)性目的：分析索拉非尼和舒尼替尼相關(guān)的毒副反應(yīng)對治療及預(yù)后的影響。進(jìn)一步研究血藥濃度與治療時(shí)藥物毒副反應(yīng)的相關(guān)性,初步探討血藥濃度監(jiān)測的臨床意義。材料和方法：分別分析164例索拉非尼和78例舒尼替尼治療的晚期腎癌患者的毒副反應(yīng)對藥物治療劑量的影響,以及與PFS、OS的相關(guān)性。進(jìn)一步用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)檢測門診32例索拉非尼(69份血樣)和23例舒尼替尼(41份血樣)治療患者的血漿藥物穩(wěn)態(tài)谷值濃度(Ctrough,ss),分析索拉非尼、舒尼替尼及活性代謝產(chǎn)物(SU12662)的Ctrough.ss與患者毒副反應(yīng)的相關(guān)性。結(jié)果：分別有14.6%和62.8%服用索拉非尼和舒尼替尼治療的患者因毒副反應(yīng)而劑量減量,但均未影響患者的總體PFS和OS。服用索拉非尼出現(xiàn)高血壓的患者發(fā)生死亡的風(fēng)險(xiǎn)相對降低(HR:0.37,95% CI:0.16-0.84, p=0.0177)。門診服用索拉非尼和舒尼替尼患者的Ctrough.ss存在較大的個(gè)體差異(CV=56.0%, CV=56.4%)。服用索拉非尼患者發(fā)生2級以上HFS的Ctrough, ss高于2級以下的患者；發(fā)生脫發(fā)患者Ctrough,ss高于無脫發(fā)患者；受試者工作特征曲線(ROC)顯示索拉非尼的最佳臨界濃度預(yù)測HFS2級和發(fā)生脫發(fā)的Ctrough,ss分別為2669 ng/ml和4589 ng/ml。服用舒尼替尼發(fā)生高血壓的患者舒尼替尼和總藥物Ctrough, ss均高于未發(fā)生高血壓患者；ROC顯示舒尼替尼和總藥物最佳臨界濃度預(yù)測高血壓發(fā)生的Ctrough, ss為54.8 ng/ml和73.7ng/ml。結(jié)論：因TKI毒副反應(yīng)引起的劑量減量未影響患者的總體預(yù)后。脫發(fā)和HFS的發(fā)生與索拉非尼的血藥濃度相關(guān),高血壓的發(fā)生與舒尼替尼的血藥濃度相關(guān)。服用TKI治療的門診患者血藥濃度存在較大的個(gè)體差異,TKI血藥濃度監(jiān)測對患者的個(gè)體化治療具有潛在的臨床價(jià)值,但還需要更多的藥代動(dòng)力學(xué)研究支持。第三部分：SET-iFISH技術(shù)檢測腎癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究結(jié)果目的：初步探索SET-iFISH技術(shù)檢測腎癌患者外周血CTC的可行性,并為CTC檢測在腎癌診斷及分子靶向藥物治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。材料和方法：選取9例各期腎癌患者(2例T4N1M0,1例T3cNOM0,1例T2aNOM0,1例T1bNOM0,3例T1aNOM0,1例TxNOM1)和1例腎結(jié)石患者作為陰性對照,采取外周血7.5m1。用磁珠偶聯(lián)的抗白細(xì)胞表面標(biāo)記物CD45的單克隆抗體標(biāo)記白細(xì)胞,并在磁場架中吸附去除白細(xì)胞達(dá)到富集作用。選用抗細(xì)胞角蛋白(panCK:CK4、5、6、8、10、13和18)的熒光抗體作為CTC的標(biāo)記物進(jìn)行瘤標(biāo)免疫熒光染色,同時(shí)對8號染色體進(jìn)行染色體熒光原位雜交(FISH)檢測,對患者外周血的CTC進(jìn)行定量分析。結(jié)果：6例腎細(xì)胞癌患者外周血CTC定量檢測結(jié)果為陽性(2例T4N1M0、1例T3cNOM0、2例T1aNOM0、1例T1bNOM0),3例腎癌患者為陰性(TxN0M1、T1aN0M0、T2aN0M0各1例),1例對照者為陰性。3例腎癌患者外周血中發(fā)現(xiàn)循環(huán)腫瘤微栓子(T1bNOM0、T4N1M0、T1aN0M0各1例)。6例CTC陽性患者均通過8號染色體的熒光原位雜交定性,panCK熒光抗體染色均陰性。結(jié)論：SET-iFISH技術(shù)可以檢測出各期腎癌患者的CTC,暫無假陽性,但仍可能存在假陰性,故還需增加樣本量及重復(fù)檢測以驗(yàn)證方法可靠性。CTC檢測在腎癌的診斷及分子靶向藥物治療中有較為廣泛的應(yīng)用前景,但是前提需要更為準(zhǔn)確的檢測技術(shù)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【圖文】：

２．邋２邋４種蛋白在ｃｃＲＣＣ中的表達(dá)情況及對預(yù)后的影響逡逑２．２．邋１邋ＣＡＫ、ＨＩＦ－２邋ａ、ＶＥＧＦＲ－２邋和邋ＶＥＧＦＲ－３邋在邋ｃｃＲＣＣ邋中的表達(dá)情況逡逑４種蛋白在腎透明細(xì)胞癌組織中均有不同程度表達(dá)，其中ＣＡＩＸ主要Ｗ細(xì)胞膜著逡逑色（圖５），陽性率達(dá)到１００％，Ｗ強(qiáng)陽性（＋＋＋）表達(dá)為主（７５．邋４％）；邋ＶＥＧＦＲ－２和逡逑

種蛋白的表達(dá)情況繪制ＰＦＳ生存曲線（圖９），并計(jì)算中位ＰＦＳ邋（表１１）。逡逑Ｐｒｏｄｕｃｔ－Ｌｉｍｉｔ邋Ｓｕｒｖｉｖａｌ邋Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ邐Ｐｒｏｄｕｃｔ－Ｌｉｍｉｔ邋Ｓｕｒｖｉｖａｌ邋Ｅａｔｉｍａｔｅａ逡逑１邋■邋０邋－邐１１邋，１邐ｊ邐１．０－邐１１｜邋＂■邋＋邋＜邐１邐Ｉ邐ｊ逡逑心邐Ｌ邐Ｃ？ｎ＆ｏｒ？ｄ邐＇邐ｉ．邐＊邋Ｃｅｎｓｏｒｅｄ逡逑二邐Ｌ，邐邐二邐＾邐邐逡逑二邋Ｃ＇８－邋Ｉ、Ｉ邋Ｉ邐二邋０．８－邐［邋Ｕ邐１邐１邐ｆ逡逑３邋０．６－邐考邋０．６－；（逡逑１邐ｔ＿，邐＾邐－０．４－逡逑＞１邐＞１、邐！—邋—邋Ｗｆ－ｔ邐Ｈ逡逑Ｓ邋０．２－邋ｉ邐；邋０．２－邐Ｉ邐逡逑０．０－邋０．０－逡逑￣Ｉ邐１邐Ｉ邐Ｉ邐ｒ邐￣￣Ｉ邐Ｉ邐１邐１邐ｒ逡逑０邐２０邐４０邐６０邐ＳＯ邐０邐２０邐４０邐６０邐８０逡逑

圖１索拉非尼電噴霧離子化質(zhì)譜掃描圖邐圖２巧羅替尼電噴霧離子化質(zhì)譜掃描圖逡逑１．邋２．邋５儲備溶液和工作液制備逡逑索拉非尼逡逑儲備液名稱（Ａ１）：精密稱取甲苯橫酸索拉非尼７．邋６邋ｍｇ邋（相當(dāng)于索拉非尼５．邋５４

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2748284