發(fā)布時間：2020-07-05 15:15

【摘要】：目的:探討骨唾液酸蛋白(Bone sialoprotein,BSP)及其糖基化修飾對乳腺癌細胞浸潤轉移的影響及可能的作用機制。方法:1.通過CCK-8和transwell實驗分別檢測BSP對乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231增殖和浸潤轉移的影響,在此基礎上用不同的糖苷酶獲得去N、O糖鏈或末端唾液酸的BSP,再用CCK-8和transwell實驗分別檢測不同糖基化修飾的BSP對MCF-7和MDA-MB-231細胞增殖和浸潤轉移的影響。2.用Western Blot檢測BSP及不同糖基化修飾的BSP對MCF-7和MDA-MB-231細胞浸潤轉移相關因子蛋白水平的表達。3.用CCK-8和transwell實驗分別檢測1α,25(OH)2D3(1α,25-Dihydroxyvitamin D3,1α,25(OH)2D3)對MCF-7和MDA-MB-231細胞增殖和浸潤轉移的影響,然后用免疫共沉淀檢測BSP是否與1α,25(OH)2D3競爭結合VDR從而影響乳腺癌細胞的浸潤轉移。結果:1.BSP促進MCF-7和MDA-MB-231細胞的增殖和浸潤轉移。不同糖基化修飾的BSP促進MCF-7細胞的增殖,但對MCF-7細胞的浸潤轉移影響不明顯;不同糖基化修飾的BSP對MDA-MB-231細胞增殖和浸潤轉移的影響不同,BSP的N-糖基化對其增殖的影響減弱,BSP的唾液酸化對其浸潤轉移的影響減弱。2.BSP促進MCF-7和MDA-MB-231細胞中TGF-β、Smad2/3、MMP2、VEGF蛋白水平的表達,而BSP的唾液酸化對兩種細胞中這些蛋白水平的表達影響都減弱。在MCF-7細胞中,MMP2蛋白水平的升高主要是由BSP的O-糖基化促進的,而在MDA-MB-231細胞中其變化主要是由BSP的N-糖基化促進的。3.在MCF-7和MDA-MB-231細胞中加入100 n M的1α,25(OH)2D3,兩株細胞的增殖和浸潤轉移均被抑制。免疫共沉淀檢測到BSP與VDR能相互結合,并且這種結合被1α,25(OH)2D3抑制。結論:BSP促進MCF-7和MDA-MB-231細胞的增殖和浸潤轉移,1α,25(OH)2D3抑制MCF-7和MDA-MB-231細胞的增殖和浸潤轉移。BSP可能是通過TGF-β信號通路或是與1α,25(OH)2D3競爭結合VDR來影響乳腺癌細胞的浸潤轉移。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

SP 的 3D 模型圖。蛋白質鏈呈黃色帶狀；連續(xù)的酸性殘基的區(qū)域被染成紅色；基位于小球表面的一個環(huán)上，以棒模式呈現(xiàn)，覆蓋其表面積的約 34％，N-聚別著色為深藍色和淺藍色；Ca2+離子呈現(xiàn)為綠色的球體，大多數(shù)位于表面上；鏈以洋紅色顯示，兩種硫酸化酪氨酸的側鏈顯示為橙色。

圖...…日.山勝

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本文編號：2742777