【摘要】：在全球排名前十的惡性腫瘤中,肺癌的發(fā)病率和死亡率都是最高的。而在我國(guó)肺癌的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)都高居全球第一位。已有的研究表明,LARP7在胃癌、乳腺癌、心肌肥大等疾病中有重要的功能。LARP7通過(guò)調(diào)控細(xì)胞中正性轉(zhuǎn)錄延伸因子P-TEFb和端粒酶等分子的活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞中基因的轉(zhuǎn)錄等過(guò)程,從而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡化過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。本課題主要以肺癌細(xì)胞A549及在此基礎(chǔ)上建立的穩(wěn)定敲除LARP7的細(xì)胞株為研究平臺(tái),采用了多種生物學(xué)常用的技術(shù)手段研究LARP7在肺癌的發(fā)生發(fā)展及惡化過(guò)程中的功能與機(jī)制,如Western blot,PCR,過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,基因編輯,質(zhì)譜等。主要內(nèi)容包括:(1)在肺癌細(xì)胞A549中過(guò)表達(dá)LARP7,結(jié)果顯示LARP7過(guò)表達(dá)以后,降低了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖速度;劃痕試驗(yàn)表明,細(xì)胞的的遷移能力被抑制,侵襲實(shí)驗(yàn)表明,細(xì)胞的侵襲能力被抑制,EMT的很多標(biāo)志物也分別被上調(diào)和下調(diào)。(2)利用基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9對(duì)細(xì)胞A549中的基因LARP7進(jìn)行了敲除,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變得狹長(zhǎng)且突觸狀明顯,這些變化也符合細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)的特征;同時(shí)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖速度增強(qiáng),同時(shí)遷移能力和侵襲能力也明顯增強(qiáng),EMT的很多標(biāo)志物也分別被上調(diào)和下調(diào)。(3)另外研究了敲除LARP7以后細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平的變化,發(fā)現(xiàn)RNA聚合酶ⅡCTD的磷酸化水平增加,促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄延伸過(guò)程。另外蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果表明,LARP7敲除后促進(jìn)P-TEFb由復(fù)合物7SK snRNP中解離,被募集到超級(jí)轉(zhuǎn)錄延伸復(fù)合物SEC中,從而調(diào)控基因的表達(dá)。另外,結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)的NF-κB減少、Akt的磷酸化增加、p53異常高表達(dá)等細(xì)胞因子變化明顯,表明可能是通過(guò)NF-κB和Akt等信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性等特性的。綜上所述,本課題的研究結(jié)果表明了 LARP7在肺癌細(xì)胞中是一個(gè)重要的抑癌因子,它通過(guò)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄延伸過(guò)程和某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的相關(guān)因子,導(dǎo)致肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【圖文】：

高于全球癌癥死亡率平均水平１７％，而且我國(guó)是世界上人口數(shù)量最多的國(guó)家，導(dǎo)逡逑致我國(guó)的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)位居全球第一。在惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的排名逡逑前十的榜單中，如圖１．１所示，肺癌的發(fā)病率和死亡率都高舉首位，其中在肺癌逡逑患者中男性的發(fā)病狀況更為嚴(yán)重，而且隨著年齡的增長(zhǎng)，中國(guó)男女的發(fā)病率和死逡逑亡率皆呈現(xiàn)逐漸升高的態(tài)勢(shì)［１］。肺癌分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，后者又包逡逑括肺淲癌、肺腺癌、肺腺鱗癌等［１］。肺癌ｌｂ期患者的治愈率在４０％左右，ｌａ逡逑期患者的治愈率則有６０％左右，ＩＩ期的治愈率小于３０％，ＩＩＩ期或ＩＶ期患者基本逡逑不能治愈，平均生存期一般為幾個(gè)月。肺癌成為惡性腫瘤之首，宄其原因，主要逡逑有以下幾點(diǎn)：一、個(gè)人生活習(xí)慣和飲食方式的不合理化和不健康化，食品的健康逡逑１逡逑

通常組成ＲＮＡ聚合酶的亞基也更大更多。ＲＮＡ聚合酶Ｉ主要位于細(xì)胞核逡逑的核仁，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄ｒＲＮＡ；邋ＲＮＡ聚合酶ＩＩ是由１２個(gè)大小不同的亞基蛋白質(zhì)組成，逡逑如圖１．２所示，它的分子量約為５５０邋ｋＤａ，主要存在于細(xì)胞核的核質(zhì)中，被研究逡逑得最多，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄所有的ｍＲＮＡ和大部分的核內(nèi)�。遥危粒诲澹遥危辆酆厦福桑桑芍饕诲义嫌诩�(xì)胞核的核質(zhì)內(nèi)，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄ｔＲＮＡ、少部分的ｒＲＮＡ和以及其它的微小ＲＮＡ。逡逑近些年來(lái)，人們發(fā)明和創(chuàng)造出了很多種研究可溶性非細(xì)胞體系的方法，來(lái)進(jìn)一步逡逑研究ＲＮＡ聚合酶（包括ＲＮＡ聚合酶Ｉ、ＩＩ和ＩＩＩ）調(diào)控的更準(zhǔn)確的基因轉(zhuǎn)錄過(guò)逡逑程。這些體系提供了更加重要的在ＤＮＡ水平和蛋白質(zhì)水平上研宄真核生物基因逡逑轉(zhuǎn)錄機(jī)理的方法，這些方法用不同鹽離子濃度的緩沖液抽提了細(xì)胞核內(nèi)的不同組逡逑分，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌�，分離得到了許多和基因的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子［２］。逡逑４逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳曉敏;郭俊明;樂(lè)東海;夏天;李克強(qiáng);;上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化:腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

2 李炳蔚;苑曉晨;王冰;秦偉偉;李宏偉;劉淑英;修瑞娟;;優(yōu)化明膠酶譜法檢測(cè)自發(fā)性高血壓大鼠血漿MMP-2和MMP-9活性[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年07期

本文編號(hào)：2741750