發(fā)布時(shí)間：2020-07-03 08:53

【摘要】：[研究背景]非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)是目前世界上癌癥死亡率較高的腫瘤之一,約占所有肺癌死亡率的85%。最常見(jiàn)的NSCLC類(lèi)型主要包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和大細(xì)胞癌,但也有其它幾種少見(jiàn)的類(lèi)型。其中,原癌基因和抑癌基因的異常表達(dá)參與了NSCLC的致癌和發(fā)展,從而導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。與小細(xì)胞肺癌相比,NSCLC病人往往對(duì)化療不敏感,因此,NSCLC在臨床上治療比較棘手。但是,目前臨床上化療依然被用于治療非小細(xì)胞肺癌,包括術(shù)前(新輔助化療)和術(shù)后(輔助化療),手術(shù)切除仍是主要的治療方法,但病人治療后的5年總生存率僅為16%�？紤]到NSCLC的復(fù)雜性以及有效治療藥物的缺乏,發(fā)現(xiàn)參與NSCLC起始和進(jìn)展的相關(guān)分子機(jī)制,對(duì)于研發(fā)抗NSCLC有效藥物以及發(fā)現(xiàn)新的治療方法具有重要的理論指導(dǎo)意義。其中,四跨膜蛋白12(TSPAN12)屬于四跨膜蛋白家族一員,最初發(fā)現(xiàn),TSPAN12與家族滲出性玻璃體視網(wǎng)膜病變的眼血運(yùn)受損有關(guān),而近期研究發(fā)現(xiàn),TSPAN12與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而,TSPAN12在肺癌中的功能及其作用目前尚不清楚。本研究通過(guò)相關(guān)試驗(yàn)研究TSPAN12在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制,希望對(duì)NSCLC的診斷及治療提供新的靶標(biāo)和治療策略。[材料與方法]選取南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安一院16例NSCLC患者手術(shù)后癌組織和相應(yīng)的癌旁組織,使用免疫組織化學(xué)法比較NSCLC組織和正常鄰近組織中TSPAN12的表達(dá)水平,并通過(guò)q RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)組織中TSPAN12的m RNA以及蛋白表達(dá)水平。接著,我們通過(guò)慢病毒感染建立了TSPAN12表達(dá)下調(diào)的A549和H1299穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,然后采用Western blot和q RT-PCR檢測(cè)TSPAN12在這些細(xì)胞中的表達(dá)水平。MTT試驗(yàn)用來(lái)觀察TSPAN12對(duì)NSCLC細(xì)胞生存和增殖能力的影響。同時(shí),利用流式細(xì)胞分析術(shù)檢測(cè)沉默TSPAN1后NSCLC的細(xì)胞周期和凋亡的變化。然后,利用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)沉默TSPAN12后,A549和H1299細(xì)胞中p53的表達(dá)水平。同時(shí),采用Western blot方法檢測(cè)沉默了TSPAN12后A549和野生型P53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的H1299細(xì)胞中p21、p27和p53的表達(dá)水平。最后,建立裸鼠異種移植腫瘤模型,分析TSPAN12下調(diào)對(duì)異種生物體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響。[結(jié)果]TSPAN12在體外和體內(nèi)均能調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞的生長(zhǎng)。與相應(yīng)的癌旁正常組織相比,人NSCLC標(biāo)本中TSPAN12的m RNA水平顯著升高。此外,在NSCLC中上調(diào)的TSPAN12表達(dá)與p53表達(dá)呈反比關(guān)系。同時(shí),與人類(lèi)支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)相比,TSPAN12在其它三種人NSCLC細(xì)胞系中也呈現(xiàn)高表達(dá)。然后,我們研究了sh RNA沉默TSPAN12對(duì)NSCLC細(xì)胞體外生長(zhǎng)和體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響,以及體外對(duì)p53表達(dá)的影響。在NSCLC細(xì)胞中敲低TSPAN12可抑制細(xì)胞增殖和克隆形成。此外,敲低TSPAN12會(huì)增加NSCLC細(xì)胞的凋亡。從機(jī)理上講,TSPAN12可以調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞中p53、p21和p27的表達(dá)。在腫瘤異種移植模型中,沉默TSPAN12可抑制H1299細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)。[結(jié)論]本文研究表明,TSPAN12在NSCLC中起著重要的作用,是一種潛在的生物標(biāo)志物,在NSCLC的治療中可能是一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【圖文】：

2.1 TSPAN12在人NSCLC腫瘤組織中高表達(dá)為了檢測(cè)TSPAN12在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達(dá)，我們用免疫組化法檢測(cè)了TSPAN12在癌旁組織和肺癌組織中的表達(dá)。如圖1A所示，從免疫組化染色看，TSPAN12在NSCLC組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織。接著，根據(jù)免疫組織化學(xué)評(píng)分公式，評(píng)分范圍0-300，對(duì)TSPAN12的表達(dá)進(jìn)行定量分析，如圖1B所示，大多數(shù)NSCLC組織（68.8%

圖3A和3B所示，沉默TSPAN12可顯著促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)合圖2我們可以得出結(jié)論，TSPAN12可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡來(lái)影響NSCLC細(xì)胞的增殖。圖3. 沉默TSPAN12促進(jìn)NSCLC細(xì)胞凋亡。(A) 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)沉默TSPAN12后，A549和H1299細(xì)胞的凋亡情況。(B) Q2加Q4象限的值代表細(xì)胞凋亡率。數(shù)據(jù)以平均±SD表示。*p<0.05。 (C) 用免疫熒光染色法檢測(cè)A549和H1299細(xì)胞中沉默TSPAN12基因后p53的表達(dá)水平。(D) 進(jìn)行Western blot分析，以評(píng)估A549和H1299細(xì)胞中敲低TSPAN12后細(xì)胞中p21、p27和p53的表達(dá)水平。

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本文編號(hào)：2739452