發(fā)布時間：2020-07-01 03:47

【摘要】：目的:通過檢測腦轉(zhuǎn)移瘤中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Musashi1(Msi1)及Numb的表達(dá)情況,探討二者在腦轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,進(jìn)一步明確腫瘤干細(xì)胞在腦轉(zhuǎn)移瘤形成中的作用,以期為腦轉(zhuǎn)移瘤發(fā)病的分子生物學(xué)機制提供新的思路與方向。方法:1選取51例經(jīng)手術(shù)切除的腦轉(zhuǎn)移瘤標(biāo)本,29例原發(fā)腫瘤標(biāo)本,15例正常人腦組織標(biāo)本。一部分置于10%福爾馬林溶液中固定,常規(guī)制作蠟塊保存;另一部分在新鮮狀態(tài)下放入-80℃低溫冰箱中保存。2設(shè)定腦轉(zhuǎn)移瘤組與原發(fā)腫瘤組為實驗組,正常腦組織組為對照組。采用免疫組織化學(xué)SP法及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法分別對Msi1與Numb蛋白及mRNA在各組織中進(jìn)行檢測。每張切片隨機取10個高倍視野,在高倍鏡(×400)下依據(jù)染色強度分?jǐn)?shù)進(jìn)行半定量分析;對電泳圖像中的目的基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行半定量分析,測定目的基因灰度值,以內(nèi)參GAPDH的OD值標(biāo)化目的基因的OD值,作為相對表達(dá)量,進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。3收集所有患者的詳細(xì)資料,應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS21.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料用t檢驗,計數(shù)資料用χ2檢驗,等級資料用Spearman相關(guān)分析進(jìn)行檢驗,連續(xù)變量資料用Pearson相關(guān)分析進(jìn)行檢驗,以上均為雙側(cè)檢驗,以P0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1 Msi1蛋白及mRNA在不同組織中表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示:Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的陽性表達(dá)率分別為60.8%(31/51)、65.5%(19/29)及13.3%(2/15)。其中Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Msi1蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Msi1蛋白在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。Rt-pcr結(jié)果顯示:msi1mrna在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的相對表達(dá)量分別為0.78±0.50、0.60±0.36及0.38±0.29。其中msi1mrna在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);msi1mrna在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);msi1mrna在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著高于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2 Numb蛋白及mrna在不同組織中表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示:numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的陽性表達(dá)率分別為33.3%(17/51)、31.0%(9/29)及73.3%(11/15)。其中numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);numb蛋白在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);numb蛋白在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。Rt-pcr結(jié)果顯示:numbmrna在腦轉(zhuǎn)移瘤、原發(fā)腫瘤及正常腦組織中的相對表達(dá)量分別為0.34±0.21、0.47±0.31及2.42±1.82。其中numbmrna在腦轉(zhuǎn)移瘤與原發(fā)腫瘤間的表達(dá)差異不明顯,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);numbmrna在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);numbmrna在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)顯著低于在正常腦組織中的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3 Msi1與numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中表達(dá)相關(guān)性分析在腦轉(zhuǎn)移瘤組織中,蛋白表達(dá)經(jīng)spearman相關(guān)性分析,msi1蛋白與numb蛋白的表達(dá)呈負(fù)線性相關(guān)(r=-0.258,p0.05);基因表達(dá)經(jīng)pearson相關(guān)性分析,msi1基因與numb基因mrna相對表達(dá)呈負(fù)線性相關(guān)(r=-0.345,p0.05)。4 Msi1與numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)與患者臨床病理資料間的分析Msi1與numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)情況與患者的性別、年齡及組織來源均無關(guān)(均p0.05)。結(jié)論:1Msi1蛋白及mrna在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中高表達(dá);numb蛋白及mrna在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中低表達(dá),說明二者表達(dá)異�？赡茉谀X轉(zhuǎn)移瘤形成過程中發(fā)揮重要作用。2Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中呈負(fù)線性相關(guān),推測Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生中可能存在調(diào)控機制。3腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物Msi1在腦轉(zhuǎn)移瘤及原發(fā)腫瘤中高表達(dá),推測腫瘤干細(xì)胞可能在腦轉(zhuǎn)移瘤中存在。4Msi1與Numb在腦轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)與患者的性別、年齡及組織來源無關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2736253