【摘要】：肝細胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一,其死亡率在各種惡性腫瘤中高居第二位。雖然目前肝細胞癌的治療水平正不斷提高,但肝癌患者預后差的狀況并未得到明顯改善。肝癌5年轉(zhuǎn)移復發(fā)率仍然高達57.2%,是影響肝癌遠期療效的瓶頸。因此,尋找新的高特異性和高靈敏度的肝細胞癌預后生物標志物是目前進一步提高肝癌治療效果、降低肝癌死亡率、提高肝癌遠期生存率的關(guān)鍵。本課題運用無標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)(Label-free)聯(lián)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析 Hep3B、MHCC97L、MHCC97H 以及HCCLM3四組具有不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細胞系的蛋白質(zhì)組和泛素化蛋白質(zhì)組,篩選與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異表達蛋白及泛素化修飾位點,以期尋找可以預測肝細胞癌復發(fā)轉(zhuǎn)移潛在的生物標志物,并初步探討其參與肝細胞癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機制。定量蛋白質(zhì)組學研究中,以侵襲轉(zhuǎn)移潛能最低的Hep3B細胞系為對照,設定差異倍數(shù)2.0為上調(diào)蛋白,差異倍數(shù)0.5為下調(diào)蛋白。在四組肝癌細胞系中共篩選到218個差異表達蛋白,其中上調(diào)蛋白有43個,下調(diào)蛋白有175個。對差異表達蛋白進行GO分析發(fā)現(xiàn)差異表達蛋白主要參與細胞粘附生物過程,分子功能涉及與細胞粘附相關(guān)的鈣黏蛋白結(jié)合活性和Ran鳥苷三磷酸酶活性;KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)差異表達蛋白主要涉及碳代謝信號通路;差異表達蛋白的互作網(wǎng)絡主要以HSPA9為中心。泛素化修飾定量蛋白質(zhì)組學分析對四組細胞株進行雙甘氨酸(di-Gly)抗體親和純化泛素化肽段,比較不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細胞系的泛素化修飾蛋白及修飾位點的差異。以侵襲轉(zhuǎn)移潛能最低的Hep3B細胞系為對照,設定差異倍數(shù)2.0為上調(diào),差異倍數(shù)0.5為下調(diào),挑選泛素化差異表達蛋白及位點。在四組肝癌細胞系中共篩選到235個差異表達的泛素化蛋白和1919個泛素化修飾位點。其中上調(diào)泛素化蛋白有70個,下調(diào)泛素化蛋白有165個。GO分析發(fā)現(xiàn)差異的泛素化蛋白主要參與細胞粘附和乳酸代謝生物過程,主要涉及與細胞粘附相關(guān)的鈣黏蛋白結(jié)合活性分子功能;KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)泛素化差異表達蛋白主要涉及糖酵解和糖質(zhì)新生信號通路;蛋白互作網(wǎng)絡主要以CTNND1為中心。另外,在表達差異的泛素化肽段中推測到最可能的基序(motif)是:IALAEEAKAAGAPKE。主要的泛素化位點為:DESTK19;FLNBK1955。本文定量分析了不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株的蛋白質(zhì)組以及泛素化修飾組,深入探討了肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移在蛋白質(zhì)組和泛素化修飾組層面的主要特征,并篩選了 DEST和FLNB2個潛在的可能作為肝癌預后的生物標志物,為后續(xù)肝癌轉(zhuǎn)移復發(fā)的研究提供了理論基礎。
【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

對ＭａｘＱｕａｎｔ邋（ｖｅｒｓｉｏｎ邋４．２）軟件在四組肝癌細胞中定量到的２９５３個蛋白質(zhì)所逡逑包含的肽段數(shù)目進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和蛋白質(zhì)分子量分布統(tǒng)計。結(jié)果表明，在定量到的逡逑２９５３個蛋白質(zhì)中，全部蛋白質(zhì)擁有高度特異性唯一的肽段（圖１－４）。這些蛋白質(zhì)逡逑的分子量范圍是０－４０００邋ｋＤａ，說明這些蛋白質(zhì)分子量分布十分廣泛且呈不均勻分逡逑布（圖１－５）。逡逑６００－．逡逑１｜逡逑４００邋Ｊｇ邋１逡逑Ｅ邋■邋■逡逑0逡逑ｕ邋１邋＾邋■逡逑．Ｅ逡逑■邋■邋■邋＿逡逑２逡逑Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋畫？逡逑■邋■邋Ｉ邋ＩＩ邋■■■＿逡逑＿＿丨丨霧ＩＩ邐Ｈ逡逑ｑ邐＾邋＾邋■邋ｒ邐：邋ｊ：邋－邋＾邋＾邐ｔＳＩ邋ｒｉ邋ｒｉ邋ｎｒｉ邋ｆＴｌ邋＼邋Ａ邋ｍｍｎ邋ｒｒ＊邋ｒｊ％邐Ｉ邋ｌ逡逑Ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｐｅｐｔｉｄｅ逡逑圖１－４邋ＭａｘＱｕａｎｔ定量蛋白質(zhì)肽段數(shù)目統(tǒng)計圖逡逑１６逡逑

差異蛋白列表見附表一。逡逑用ＨｅｍＩ軟件對這２１８個差異表達的蛋白質(zhì)進行樹狀圖層次聚類并繪制熱圖。逡逑２１８個差異表達蛋白聚類結(jié)果見圖１－６。定量蛋白質(zhì)組學在四組肝癌細胞系中共逡逑篩選到２１８個差異表達的蛋白質(zhì)，其中上調(diào)蛋白質(zhì)有４３個，下調(diào)蛋白質(zhì)有１７５逡逑個。逡逑１７逡逑

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本文編號：2733342