【摘要】：肝細(xì)胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一,其死亡率在各種惡性腫瘤中高居第二位。雖然目前肝細(xì)胞癌的治療水平正不斷提高,但肝癌患者預(yù)后差的狀況并未得到明顯改善。肝癌5年轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率仍然高達(dá)57.2%,是影響肝癌遠(yuǎn)期療效的瓶頸。因此,尋找新的高特異性和高靈敏度的肝細(xì)胞癌預(yù)后生物標(biāo)志物是目前進(jìn)一步提高肝癌治療效果、降低肝癌死亡率、提高肝癌遠(yuǎn)期生存率的關(guān)鍵。本課題運(yùn)用無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)(Label-free)聯(lián)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析 Hep3B、MHCC97L、MHCC97H 以及HCCLM3四組具有不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞系的蛋白質(zhì)組和泛素化蛋白質(zhì)組,篩選與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異表達(dá)蛋白及泛素化修飾位點,以期尋找可以預(yù)測肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛在的生物標(biāo)志物,并初步探討其參與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,以侵襲轉(zhuǎn)移潛能最低的Hep3B細(xì)胞系為對照,設(shè)定差異倍數(shù)2.0為上調(diào)蛋白,差異倍數(shù)0.5為下調(diào)蛋白。在四組肝癌細(xì)胞系中共篩選到218個差異表達(dá)蛋白,其中上調(diào)蛋白有43個,下調(diào)蛋白有175個。對差異表達(dá)蛋白進(jìn)行GO分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白主要參與細(xì)胞粘附生物過程,分子功能涉及與細(xì)胞粘附相關(guān)的鈣黏蛋白結(jié)合活性和Ran鳥苷三磷酸酶活性;KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白主要涉及碳代謝信號通路;差異表達(dá)蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)主要以HSPA9為中心。泛素化修飾定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析對四組細(xì)胞株進(jìn)行雙甘氨酸(di-Gly)抗體親和純化泛素化肽段,比較不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞系的泛素化修飾蛋白及修飾位點的差異。以侵襲轉(zhuǎn)移潛能最低的Hep3B細(xì)胞系為對照,設(shè)定差異倍數(shù)2.0為上調(diào),差異倍數(shù)0.5為下調(diào),挑選泛素化差異表達(dá)蛋白及位點。在四組肝癌細(xì)胞系中共篩選到235個差異表達(dá)的泛素化蛋白和1919個泛素化修飾位點。其中上調(diào)泛素化蛋白有70個,下調(diào)泛素化蛋白有165個。GO分析發(fā)現(xiàn)差異的泛素化蛋白主要參與細(xì)胞粘附和乳酸代謝生物過程,主要涉及與細(xì)胞粘附相關(guān)的鈣黏蛋白結(jié)合活性分子功能;KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)泛素化差異表達(dá)蛋白主要涉及糖酵解和糖質(zhì)新生信號通路;蛋白互作網(wǎng)絡(luò)主要以CTNND1為中心。另外,在表達(dá)差異的泛素化肽段中推測到最可能的基序(motif)是:IALAEEAKAAGAPKE。主要的泛素化位點為:DESTK19;FLNBK1955。本文定量分析了不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株的蛋白質(zhì)組以及泛素化修飾組,深入探討了肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移在蛋白質(zhì)組和泛素化修飾組層面的主要特征,并篩選了 DEST和FLNB2個潛在的可能作為肝癌預(yù)后的生物標(biāo)志物,為后續(xù)肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的研究提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

對ＭａｘＱｕａｎｔ邋（ｖｅｒｓｉｏｎ邋４．２）軟件在四組肝癌細(xì)胞中定量到的２９５３個蛋白質(zhì)所逡逑包含的肽段數(shù)目進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和蛋白質(zhì)分子量分布統(tǒng)計。結(jié)果表明，在定量到的逡逑２９５３個蛋白質(zhì)中，全部蛋白質(zhì)擁有高度特異性唯一的肽段（圖１－４）。這些蛋白質(zhì)逡逑的分子量范圍是０－４０００邋ｋＤａ，說明這些蛋白質(zhì)分子量分布十分廣泛且呈不均勻分逡逑布（圖１－５）。逡逑６００－．逡逑１｜逡逑４００邋Ｊｇ邋１逡逑Ｅ邋■邋■逡逑0逡逑ｕ邋１邋＾邋■逡逑．Ｅ逡逑■邋■邋■邋＿逡逑２逡逑Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋畫？逡逑■邋■邋Ｉ邋ＩＩ邋■■■＿逡逑＿＿丨丨霧ＩＩ邐Ｈ逡逑ｑ邐＾邋＾邋■邋ｒ邐：邋ｊ：邋－邋＾邋＾邐ｔＳＩ邋ｒｉ邋ｒｉ邋ｎｒｉ邋ｆＴｌ邋＼邋Ａ邋ｍｍｎ邋ｒｒ＊邋ｒｊ％邐Ｉ邋ｌ逡逑Ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｐｅｐｔｉｄｅ逡逑圖１－４邋ＭａｘＱｕａｎｔ定量蛋白質(zhì)肽段數(shù)目統(tǒng)計圖逡逑１６逡逑

差異蛋白列表見附表一。逡逑用ＨｅｍＩ軟件對這２１８個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行樹狀圖層次聚類并繪制熱圖。逡逑２１８個差異表達(dá)蛋白聚類結(jié)果見圖１－６。定量蛋白質(zhì)組學(xué)在四組肝癌細(xì)胞系中共逡逑篩選到２１８個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中上調(diào)蛋白質(zhì)有４３個，下調(diào)蛋白質(zhì)有１７５逡逑個。逡逑１７逡逑

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