【摘要】：目的:在常見的婦科惡性腫瘤性疾病中,宮頸癌是最常見的,而且近幾年發(fā)病年齡有所提前。形成宮頸癌的分子機(jī)制仍然不是特別明確。腫瘤細(xì)胞的無限增殖和侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤細(xì)胞的最主要生物學(xué)行為特點(diǎn),也是惡性腫瘤患者死亡的最主要原因。宮頸癌的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜、聯(lián)系、多階段的過程,表現(xiàn)為高度的組織特異性,最常見的轉(zhuǎn)移途徑是直接侵犯轉(zhuǎn)移到宮旁及附近的組織器官及淋巴轉(zhuǎn)移,而血行轉(zhuǎn)移少,不同階段宮頸癌癌細(xì)胞的侵襲能力是有差異的。腫瘤細(xì)胞之所以具有能轉(zhuǎn)移到指定的靶器官的能力,是因?yàn)闄C(jī)體內(nèi)有多種機(jī)制促進(jìn)其定向遷移到靶器官,在靶器官附近刺激新生血管及淋巴管的形成,產(chǎn)生各種細(xì)胞因子改變其生長(zhǎng)微環(huán)境,為腫瘤細(xì)胞在此定居創(chuàng)造條件。最近幾年發(fā)現(xiàn),有關(guān)于“信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)“的研究中,趨化因子CXCL12及其受體CXCR4組成的CXCL12-CXCR4生物軸對(duì)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都起到相當(dāng)重要的作用。在宮頸癌組織中也發(fā)現(xiàn)了受體CXCR4蛋白的表達(dá)。本研究中,通過體外培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞,觀察其生長(zhǎng)特點(diǎn),HE染色了解細(xì)胞結(jié)構(gòu),并運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)宮頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),隨后行MTT法進(jìn)行增殖實(shí)驗(yàn),研究在低濃度血清培養(yǎng)基的條件下,不同濃度CXCL12對(duì)Hela細(xì)胞增殖能力的影響,以及CXCR4拮抗劑AMD3100的對(duì)Hela細(xì)胞增殖能力的抑制。再以Transwell小室為模型,模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞穿透血管內(nèi)皮細(xì)胞過程,研究CXCL12對(duì)Hela細(xì)胞的遷移、侵襲能力,觀察加入CXCR4的特異性拮抗劑AMD3100后對(duì)Hela細(xì)胞的遷移、侵襲能力的影響。本實(shí)驗(yàn)為探討CXCL12-CXCR4生物軸在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后提供理論基礎(chǔ),并證明AMD3100對(duì)CXCR4的特異性阻斷作用,提示阻斷CXCR4與CXCL12相互作用可能為宮頸癌患者提供了新的療法,CXCL12-CXCR4生物學(xué)軸有望成為治療腫瘤、阻止腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn)。方法：1體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%時(shí)光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并進(jìn)行HE染色進(jìn)一步了解細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法研究CXCR4在Hela細(xì)胞上的表達(dá)情況。3采用MTT法進(jìn)行Hela細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn),研究CXCL12在不同濃度下對(duì)處于無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的條件下Hela細(xì)胞的增殖能力的影響,以及AMD3100的對(duì)Hela細(xì)胞增殖能力是否產(chǎn)生抑制。4以Transwell小室為模型,應(yīng)用Matrigel膠,探究在無血清培養(yǎng)液的生長(zhǎng)條件下,不同濃度CXCL12及CXCR4拮抗劑AMD3100對(duì)Hela細(xì)胞的遷移、侵襲能力的影響。結(jié)果:1 Hela細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)呈不規(guī)則多邊形,與鱗狀上皮細(xì)胞形態(tài)相似;HE染色顯示,Hela細(xì)胞細(xì)胞核大小不一,但幾乎都有一個(gè)主要的較大的細(xì)胞核,被蘇木素深染,有些細(xì)胞可以見到多個(gè)細(xì)胞核同時(shí)存在;細(xì)胞質(zhì)豐富。2免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果證明,Hela細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中充滿棕黃色顆粒,說明CXCR4在Hela細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。3 MTT結(jié)果顯示,10 mg/ml CXCL12組(0.52±0.06)中Hela細(xì)胞的增殖能力均較空白對(duì)照組(0.41±0.02)增強(qiáng);100mg/ml CXCL12組(0.66±0.07)中Hela細(xì)胞的增殖能力較10 mg/ml CXCL12組中Hela細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在100mg/ml CXCL12加入1μg/ml CXCR4拮抗劑AMD3100后,Hela細(xì)胞增殖能力受到明顯抑制(0.43±0.04),與100mg/ml CXCL12組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4(1)在無血清培養(yǎng)條件下,與空白組相比,10mg/ml的CXCL12可使Hela細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)目增多((166.80±4.84)vs(136.87±5.28)),而100mg/ml的CXCL12使遷移的細(xì)胞數(shù)目明顯增多(223.20±8.51),說明CXCL12能夠增加Hela細(xì)胞的遷移數(shù)目,且隨著CXCL12濃度的增高數(shù)目增多(P0.05);加入1μg/ml CXCR4拮抗劑AMD3100后,Hela細(xì)胞遷移數(shù)目減少(82.87±4.36,P0.05),證明CXCL12-CXCR4生物軸可以提高Hela細(xì)胞遷移能力,且AMD3100能夠阻斷CXCL12-CXCR4生物軸發(fā)揮作用。(2)以Matrigel膠模擬人血管內(nèi)皮細(xì)胞,當(dāng)下室為無血清培養(yǎng)基時(shí),穿過Matrigel膠的細(xì)胞很少(32.93±1.94);當(dāng)下室加入10mg/ml的CXCL12時(shí),穿過Matrigel膠的細(xì)胞數(shù)目增多(37.00±2.14,P方法:0.05),下室加入100mg/ml的CXCL12后,穿過Matrigel膠的細(xì)胞數(shù)目明顯增多(57.40±1.64,P0.05),其中空白組與10mg/ml的CXCL12相比、10mg/ml的CXCL12與100mg/ml的CXCL12相比、加入1μg/ml CXCR4拮抗劑AMD3100與100mg/ml的CXCL12相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明CXCL12-CXCR4生物軸能夠增強(qiáng)Hela細(xì)胞的侵襲能力,并隨著CXCL12濃度的增高而增強(qiáng);當(dāng)加入1μg/ml CXCR4拮抗劑AMD3100后,穿過Matrigel膠的細(xì)胞明顯減少(24.67±2.19,P0.05),證明AMD3100能夠抑制該過程。結(jié)論:1 Hela細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好,細(xì)胞膜折光度良好,呈現(xiàn)典型的鱗狀上皮細(xì)胞樣形態(tài),為扁平梭形或多角形。2免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,Hela細(xì)胞的細(xì)胞膜上及細(xì)胞質(zhì)中均有CXCR4的高表達(dá)。3 CXCL12-CXCR4生物軸能夠增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的能力;AMD3100能夠阻斷CXCL12-CXCR4生物軸發(fā)揮作用。4抑制CXCR4功能可以阻止腫瘤細(xì)胞的增殖及侵襲能力,所以聯(lián)合CXCR4拮抗劑的治療可為宮頸癌治療又一靶點(diǎn),具有潛在的臨床意義。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【圖文】：

Hela細(xì)胞形態(tài)(20x)

Hela細(xì)胞形態(tài)（100x）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2730755