【摘要】：miRNAs是長度為22nt的內(nèi)源性非編碼RNA,在體內(nèi)作為信號分子參與調(diào)節(jié)多種細胞活動。miRNAs的異常表達常與疾病發(fā)生相關,并且在癌癥的診斷、治療和預后方面具有臨床應用潛力。本文對mi R-342-5p在非小細胞肺癌(non-small-cell carcinoma,NSCLC)細胞A549和H460中的作用及其調(diào)節(jié)機制進行了研究。1.miR-342-5p在NSCLC A549和H460中的表達及作用為探究miR-342-5p在A549和H460中的作用,本研究首先利用實時定量PCR(qPCR)檢測miR-342-5p在肺癌細胞A549和H460中的表達,結果顯示miR-342-5p在A549和H460中的表達低于正常的肺上皮細胞HBE。其后,將miR-342-5p mimics分別轉(zhuǎn)染A549和H460細胞,通過提高miR-342-5p在細胞中的表達檢測其對肺癌細胞惡性表型的影響。結果顯示,miR-342-5p的表達升高后顯著抑制了A549和H460的增殖、遷移、侵襲和克隆形成能力。為進一步驗證這一結果,將構建的過表達miR-342-5p的慢病毒載體感染A549和H460細胞,并利用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定過表達細胞。細胞惡性表型檢測結果表明,穩(wěn)定過表達miR-342-5p同樣顯著抑制了A549和H460細胞的增殖、遷移和克隆形成能力。最后,將穩(wěn)定過表達miR-342-5p的H460細胞皮下注射到裸鼠體內(nèi),結果顯示,與對照組相比mi R-342-5p抑制了H460的體內(nèi)成瘤率,腫瘤的體積和重量也減少。上述結果表明miR-342-5p在肺癌細胞中具有抑癌基因的作用。2.miR-342-5p靶基因檢測及其相互作用關系并驗證為了探討miR-342-5p影響A549和H460細胞惡性表型的作用機制,首先利用TargetScan7等軟件預測了miR-342-5p的靶基因,并用qPCR檢測了各候選靶基因在A549和H460中的表達,在檢測的候選靶基因中,ELP3、FURIN和PPARGC1A等基因在兩種肺癌細胞中的表達都顯著高于HBE細胞,而在過表達miR-342-5p的兩種肺癌細胞中這3個基因的表達量都顯著降低。之后用熒光素酶報告實驗(Luciferase assay)證明PPARGC1A是miR-342-5p的一個靶基因。為進一步驗證miR-342-5p和靶基因PPARGC1A之間的相互作用,本研究合成了PPARGC1A基因的干擾片段,轉(zhuǎn)染細胞后降低了PPARGC1A基因的表達量。細胞惡性表型檢測表明,A549和H460細胞的增殖、遷移、侵襲和克隆形成能力都受到了顯著的抑制。綜上所述,miR-342-5p在肺癌細胞A549和H460中低表達,miR-342-5p過表達后,可降低A549和H460細胞的增殖、遷移、侵襲及克隆形成的能力,并抑制體內(nèi)成瘤。熒光素酶報告實驗證明PPARGC1A是mi R-342-5p的一個靶基因,降低PPARGC1A的表達量能顯著抑制細胞惡性表型。因此,miR-342-5p抑癌的作用可能是通過直接靶向PPARGC1A基因起作用。
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

內(nèi)蒙古大學 碩士學位論文挑選 3 個樣本作石蠟切片 HE 染色試驗，剩余樣數(shù)±標準差表示，組間比較用 t 檢驗。P<0.05 有顯實驗結果肺上皮細胞和非小細胞肺癌細胞系中的表達R檢測非小細胞肺癌A549和H460中miR-342-5p H460 細胞中的表達量顯著低于正常的肺上皮細

-342-5p mimics 后 HBE 細胞中 miR-342-5p 的表達（***ression of miR-342-5p in HBE Cells with miR-342-5p mimp mimics 對肺上皮細胞 HBE 表型的影響5p mimics 后對肺上皮細胞 HBE 的增殖能力沒有2-5p對正常的肺上皮細胞HBE的影響，用CCK-8 HBE 增殖能力的變化。結果表明，過表達 miR-342化。

【參考文獻】

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1 胡寬;陶一明;黃云;李新營;王志明;;miR-342-5p調(diào)控靶基因Merlin表達促進肝細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的實驗研究[J];中國普通外科雜志;2014年09期

本文編號：2730595