【摘要】：第一部分5,7-DMF抗肝癌細胞系HepG2活性及機制的研究目的:探討5,7-二甲氧基黃酮抗肝癌細胞系HepG2活性的可能機制方法:肝癌細胞系HepG2接種于6孔板上,接種細胞密度為每孔2×l05個細胞,分為介質(zhì)處理組(培養(yǎng)基中1%DMSO),5,7-二甲氧基黃酮處理組1OμM組,5,7-二甲氧基黃酮處理組25μM組,5,7-二甲氧基黃酮處理組50μM組,各組分為0h,24h,48h和72h四個時間點亞組。將肝癌細胞系HepG2接種在相應濃度的5,7-二甲氧基黃酮的培養(yǎng)基進行培養(yǎng),光鏡下觀察HepG2細胞形態(tài),MTT比色皿法測定不同濃度5,7-二甲氧基黃酮處理的HepG2在相應時間的細胞活性水平;采用濃度分別為0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)24h,利用流式細胞儀測定HepG2細胞周期的分布;采用濃度為25μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)肝癌細胞系HepG2,分別在0、6、12、24、48和72h使用DCFH-DA方法測定細胞內(nèi)ROS的水平及使用DiOC6方法測定細胞中Δψm的水平;采用濃度分別為0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黃酮培養(yǎng)48h,tunnel法檢測細胞凋亡情況并且在光鏡下觀察細胞集落形成情況。結(jié)果:5,7-二甲氧基黃酮處理HepG2細胞后,細胞數(shù)量減少,細胞形態(tài)出現(xiàn)明顯的改變;隨著5,7-二甲氧基黃酮處理時間的延長及濃度的增加,HepG2的活力下降的更加明顯,IC50為25μM;G1期細胞群隨著5,7-二甲氧基黃酮的濃度增加而增加;細胞內(nèi)ROS的水平隨著時間的延長逐漸升高,水平隨著時間的延長而逐漸降低;細胞凋亡水平隨著5,7-二甲氧基黃酮的濃度升高而增加,細胞集落的水平隨著濃度的增加而相應的減少。結(jié)論:5,7-二甲氧基黃酮可以降低肝細胞癌系HepG2的活力,半抑制濃度IC50為25μM。5,7-DMF抗HepG2活力的作用可能是通過阻滯細胞周期;增加了細胞內(nèi)ROS的水平,降低Δψm的水平;減少細胞集落的形成,最終導致細胞凋亡的增加。第二部分5,7-DMF對裸鼠體內(nèi)肝癌細胞系HepG2成瘤影響的研究目的:探討5,7-二甲氧基黃酮抑制HepG2在裸鼠體內(nèi)成瘤的作用研究。方法:BALB/c裸鼠36只,接種肝癌細胞系HepG2術后第1天開始給藥,按給藥方法及劑量分為6組,(1)生理鹽水組(NS):NS10μ1/只,腹腔注射;(2)5,7-DMF(10μM)組(D1):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(3)5,7-DMF(25μM)組(D2):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(4)5,7-DMF(50μM)組(D3):腹腔注射5,7-DMF,10μ1/只;(5)5-FU 組(FU):腹腔注射 5-FU20mg/kg/只;(6)5,7-DMF(50μM)+5-FU組(D3+FU):腹腔注射5-FU20mg/kg+5,7-DMF10μ1/只。以上各組均每3天1次連續(xù)5次分別于接種前、接種后第2、5、8、11、14、17天觀察各組BALB/c裸鼠腫瘤生長情況及小鼠的一般狀況,電子天平測量小鼠的重量。皮下接種肝癌細胞系HepG2細胞后第5、8、11、14、17天觀察記錄腫瘤的生長情況,測量長短徑,用游標卡尺測量皮下接種腫瘤的長短徑,分析體積的變化,結(jié)果以均數(shù)加減標準差表示(x±s){腫瘤體積計算公式:V=(A×B2)/2,A為長徑,B為短徑}。接種腫瘤細胞17天后,引頸法處死全部BALB/c裸鼠,將裸鼠皮下腫瘤完整剝離,拍照、進行比較,行切片HE染色,顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。結(jié)果:在體重方面,NS、D1、D2及D3組裸鼠的體重無明顯差異;D3+FU組同F(xiàn)U組裸鼠的體重無明顯差異。各組荷瘤裸鼠皮下腫瘤體積在實驗結(jié)束較接種第5天比較均有增大,以NS組最明顯,D1組次之,D3+FU組增加最小。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn),說明5,7-DMF對裸鼠無明顯的不良反應,且5,7-DMF未增加5-FU的不良反應;5,7-DMF可抑制HepG2在裸鼠體內(nèi)成瘤的作用,且呈濃度相關性,濃度越高抑制成瘤的作用越明顯,5,7-DMF聯(lián)合5-FU可以增強抑制成瘤的能力。
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

圖１肝癌細胞系ＨｅｐＧ２細胞形態(tài)（Ｘ１００倍）逡逑圖：對照組ＨｅｐＧ２細胞形態(tài)；Ｂ圖：１邋ＯｐＭ組的ＨｅｐＧ２組的ＨｅｐＧ２細胞形態(tài)；Ｄ圖：５０ｐＭ組的ＨｅｐＧ２細胞形態(tài)逡逑活力的變化逡逑

隨著５，７－ＤＭＦ的濃度的增加，細胞活力的抑制越明顯；在相同濃度逡逑的５，７－ＤＭＦ作用下，隨著干預處理時間的延長，細胞活力的下降更加明顯，逡逑（見圖２）。逡逑１００逡逑ｇ邋７０逡逑＾邋６０邋■逡逑Ｉ邋５０－邋＿２４ｈ逡逑Ｉ邋４０－逡逑５邋２０邋：邋—７２邋ｈ逡逑１０邋－逡逑Ｏ邋邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐邐逡逑０邐１０邐２５邐５０逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（ｕＭ）逡逑圖２肝癌細胞系ＨｅｐＧ２細胞活力逡逑注：采用濃度分別為Ｋ＾Ｍ、２５＾ｉＭ和５０｜ＪＶ４的５，７－ＤＭＦ分別培養(yǎng)２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ，逡逑ＨｅｐＧ２細胞活性情況。逡逑３．３細胞周期化逡逑對比不同濃度的５，７－ＤＭＦ處理組細胞周期的情況，同ＯｐＭ的５，７－ＤＭＦ組逡逑９逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2729742