發(fā)布時(shí)間：2020-06-23 04:44

【摘要】：目的:肝細(xì)胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原發(fā)性肝癌中最常見(jiàn)的類型,是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,該腫瘤的發(fā)病機(jī)制仍是該研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。DNA聚合酶δ3(DNA polymerase delta3,POLD3)是DNA聚合酶δ(DNA polymerase delta,POLD)的第三個(gè)亞基,在POLD參與的各項(xiàng)生命活動(dòng)中處于重要的地位。目前研究提示POLD3表達(dá)紊亂與多種腫瘤的形成有著直接關(guān)系,能夠確定的是POLD3突變體能夠增加結(jié)直腸癌、胃腺癌和卵巢癌等腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。然而,有關(guān)POLD3與肝癌之間的關(guān)系如何,至今為止國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道甚少。本課題擬通過(guò)蛋白印跡(western blotting,WB)、免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)、實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chainreaction,RT-qPCR)檢測(cè)肝癌腫瘤組織及肝癌細(xì)胞中POLD3的表達(dá)情況,分析POLD3基因的表達(dá)對(duì)HCC分化、增殖的影響。方法:(1)收集2012年1月至2017年6月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院且符合要求的HCC病例;在收集的石蠟標(biāo)本及新鮮肝癌組織及癌旁組織中進(jìn)行POLD3表達(dá)水平的分析;同時(shí)收集患者的有關(guān)臨床病理資料。常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMCC-7721及人肝細(xì)胞QSG-7701。(2)通過(guò)IHC檢測(cè)POLD3蛋白在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況,分析肝癌組織中POLD3的表達(dá)與HCC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。(3)通過(guò)WB、RT-qPCR分別檢測(cè)2種細(xì)胞株中POLD3蛋白和mRNA的表達(dá)水平,使用t檢驗(yàn)分析POLD3蛋白和mRNA在2種細(xì)胞株中的表達(dá)差異。(4)通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)POLD3mRNA在12例新鮮肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)情況,使用t檢驗(yàn)分析POLD3mRNA在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)差異。結(jié)果:(1)當(dāng)前研究共收集到134例符合要求的HCC患者,男性和女性分別為115例(85.82%)和19例(14.18%)。按Edmondson分級(jí)法進(jìn)行分級(jí):I-II級(jí)為高分化肝細(xì)胞肝癌98例(73.13%),III-IV級(jí)為中低分化肝細(xì)胞肝癌36例(26.87%)。(2)與癌旁組織相比較,POLD3蛋白在肝癌腫瘤組織中的表達(dá)下降,二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023);體外細(xì)胞學(xué)結(jié)果與之相一致。(3)與癌旁組織相比較,POLD3mRNA在肝癌腫瘤組織中的表達(dá)下降,二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);體外細(xì)胞學(xué)結(jié)果與之相一致(P=0.003)。(4)POLD3的表達(dá)受肝癌腫瘤大小的影響,腫瘤直徑越大其表達(dá)水平越低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017)。(5)POLD3的表達(dá)受肝癌腫瘤組織學(xué)分化程度的影響,腫瘤分化程度越低其表達(dá)水平越低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論:POLD3在肝癌腫瘤組織中表達(dá)下調(diào),這種表達(dá)下調(diào)與肝癌的組織學(xué)分化程度及腫瘤的大小相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

HE 染色結(jié)果分析前述的研究對(duì)象標(biāo)本均經(jīng) HE 染色后進(jìn)行分析和通過(guò)病理學(xué)確診為Edmondson 標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)法：I-II 級(jí)為高分化肝細(xì)胞性肝癌共 98 例，鏡型性，胞漿中顆粒顯著，胞核增大，核染色深淺不一，核漿比例增梁狀、假腺樣結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)少許細(xì)胞病理性核分裂象；III-IV 級(jí)為中共 36 例，鏡下觀：癌細(xì)胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)的異型性很大，胞則，核分裂像多、排列成梁狀、實(shí)性巢狀。肝硬化：彌漫性肝小葉結(jié)的纖維結(jié)締組織將肝組織分為大小不等的圓形或橢圓形的肝細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)癌旁組織伴隨著慢性肝炎改變及門脈內(nèi)出現(xiàn)癌栓，鏡下觀如圖所

21圖 2 各組肝組織免疫組化的表達(dá)情況（X100）LD3 在癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)；B：POLD3 在癌旁組織陰性表達(dá)；C：POLD3 在肝陽(yáng)性表達(dá)；D：POLD3 在肝癌組織中陰性表達(dá)。）Figure 2 Immunohistochemical expression of liver tissue in each group.（X10OLD3 is positive expression in paracancerous tissues; B: POLD3 is negative in paraca; C: POLD3 is positive expression in hepatocellular carcinoma; D：POLD3 is negativetissues.）34 例臨床病例中 POLD3 在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為 14.93%、在癌旁達(dá)率為 26.12%。與癌旁組織相比較，POLD3 在肝癌組織中的表達(dá)降低統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 2=5.147，P=0.023）（見(jiàn)表 2-1、圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張磊;陳慧卿;周亞竟;;人源DNA聚合酶δ研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2013年04期

2 阮細(xì)玲;吳瓊;黃怡;李永繼;徐恒;;DNA聚合酶δ與腫瘤的關(guān)系[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2012年12期

3 歐賢紅;廖柳鳳;劉華鋼;徐恒;;POLD1基因在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其意義[J];世界華人消化雜志;2011年02期

4 石磊;徐恒;朱曉宇;孫建華;宋楠萌;李莉;桑建利;;p21對(duì)DNA聚合酶δ表達(dá)的抑制及其對(duì)MCF7細(xì)胞增殖和惡性表型的影響[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2006年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王鳳燕;熊去氧膽酸對(duì)肝細(xì)胞肝癌阻抑作用的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2726813