【摘要】：目的:肝細胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原發(fā)性肝癌中最常見的類型,是全球最常見的惡性腫瘤之一,該腫瘤的發(fā)病機制仍是該研究領(lǐng)域的熱點問題。DNA聚合酶δ3(DNA polymerase delta3,POLD3)是DNA聚合酶δ(DNA polymerase delta,POLD)的第三個亞基,在POLD參與的各項生命活動中處于重要的地位。目前研究提示POLD3表達紊亂與多種腫瘤的形成有著直接關(guān)系,能夠確定的是POLD3突變體能夠增加結(jié)直腸癌、胃腺癌和卵巢癌等腫瘤的發(fā)病風險。然而,有關(guān)POLD3與肝癌之間的關(guān)系如何,至今為止國內(nèi)外文獻報道甚少。本課題擬通過蛋白印跡(western blotting,WB)、免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)、實時定量多聚酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chainreaction,RT-qPCR)檢測肝癌腫瘤組織及肝癌細胞中POLD3的表達情況,分析POLD3基因的表達對HCC分化、增殖的影響。方法:(1)收集2012年1月至2017年6月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院且符合要求的HCC病例;在收集的石蠟標本及新鮮肝癌組織及癌旁組織中進行POLD3表達水平的分析;同時收集患者的有關(guān)臨床病理資料。常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細胞SMCC-7721及人肝細胞QSG-7701。(2)通過IHC檢測POLD3蛋白在肝癌組織與癌旁組織中的表達情況,分析肝癌組織中POLD3的表達與HCC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。(3)通過WB、RT-qPCR分別檢測2種細胞株中POLD3蛋白和mRNA的表達水平,使用t檢驗分析POLD3蛋白和mRNA在2種細胞株中的表達差異。(4)通過RT-qPCR檢測POLD3mRNA在12例新鮮肝癌組織與癌旁組織中的表達情況,使用t檢驗分析POLD3mRNA在肝癌組織與癌旁組織中的表達差異。結(jié)果:(1)當前研究共收集到134例符合要求的HCC患者,男性和女性分別為115例(85.82%)和19例(14.18%)。按Edmondson分級法進行分級:I-II級為高分化肝細胞肝癌98例(73.13%),III-IV級為中低分化肝細胞肝癌36例(26.87%)。(2)與癌旁組織相比較,POLD3蛋白在肝癌腫瘤組織中的表達下降,二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.023);體外細胞學(xué)結(jié)果與之相一致。(3)與癌旁組織相比較,POLD3mRNA在肝癌腫瘤組織中的表達下降,二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);體外細胞學(xué)結(jié)果與之相一致(P=0.003)。(4)POLD3的表達受肝癌腫瘤大小的影響,腫瘤直徑越大其表達水平越低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.017)。(5)POLD3的表達受肝癌腫瘤組織學(xué)分化程度的影響,腫瘤分化程度越低其表達水平越低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論:POLD3在肝癌腫瘤組織中表達下調(diào),這種表達下調(diào)與肝癌的組織學(xué)分化程度及腫瘤的大小相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7
【圖文】：

HE 染色結(jié)果分析前述的研究對象標本均經(jīng) HE 染色后進行分析和通過病理學(xué)確診為Edmondson 標準分級法：I-II 級為高分化肝細胞性肝癌共 98 例，鏡型性，胞漿中顆粒顯著，胞核增大，核染色深淺不一，核漿比例增梁狀、假腺樣結(jié)構(gòu)，可見少許細胞病理性核分裂象；III-IV 級為中共 36 例，鏡下觀：癌細胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)的異型性很大，胞則，核分裂像多、排列成梁狀、實性巢狀。肝硬化：彌漫性肝小葉結(jié)的纖維結(jié)締組織將肝組織分為大小不等的圓形或橢圓形的肝細胞團塊時癌旁組織伴隨著慢性肝炎改變及門脈內(nèi)出現(xiàn)癌栓，鏡下觀如圖所

21圖 2 各組肝組織免疫組化的表達情況（X100）LD3 在癌旁組織中陽性表達；B：POLD3 在癌旁組織陰性表達；C：POLD3 在肝陽性表達；D：POLD3 在肝癌組織中陰性表達。）Figure 2 Immunohistochemical expression of liver tissue in each group.（X10OLD3 is positive expression in paracancerous tissues; B: POLD3 is negative in paraca; C: POLD3 is positive expression in hepatocellular carcinoma; D：POLD3 is negativetissues.）34 例臨床病例中 POLD3 在肝癌組織中的陽性表達率為 14.93%、在癌旁達率為 26.12%。與癌旁組織相比較，POLD3 在肝癌組織中的表達降低統(tǒng)計學(xué)意義（ 2=5.147，P=0.023）（見表 2-1、圖 3）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王鳳燕;熊去氧膽酸對肝細胞肝癌阻抑作用的機制研究[D];山東大學(xué);2017年

本文編號：2726813