【摘要】：【背景】膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一。在全球范圍內,膀胱癌發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第九位,在我國,其發(fā)病率在男性惡性腫瘤中占第六位,在所有泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中占第一位。根據(jù)病理分期,膀胱癌可分非肌層浸潤性膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)和肌層浸潤性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)。目前,NMIBC的治療以經尿道膀胱腫瘤電切術(transurethral resection of bladder tumor,TURBT)和術后膀胱灌注為主。然而,NMIBC在TURBT術后容易發(fā)生進展、復發(fā),患者1年復發(fā)率為10%-67%,5年復發(fā)率則為24%-84%�？鼓[瘤藥物治療是除手術外治療和預防膀胱癌的重要手段。膀胱灌注治療可降低NMBIC患者TURBT術后復發(fā)率,化療可提高晚期膀胱癌患者生存率。然而大量臨床證據(jù)表明,當前常應用于臨床的膀胱灌注藥物和化療藥物依然存在藥物副作用大、敏感性不佳、耐藥等問題,需要對新型膀胱癌抗腫瘤藥物開展探索和研究。無機納米藥物是目前抗腫瘤納米藥物的前沿研究對象之一,氧化亞銅納米粒(cuprous oxide nanoparticles,CONPs)作為一新型無機納米材料,在抗腫瘤領域具有廣闊的臨床應用前景�！灸康摹勘菊n題中將主要研究驗證氧化亞銅納米粒CONPs對膀胱尿路上皮癌細胞的抗腫瘤作用,并初步探索其作用的機制�！痉椒ā客ㄟ^低劑量的氧化亞銅納米粒CONPs在體外處理各類膀胱尿路上皮癌細胞系;CCK8實驗檢測該藥物對膀胱尿路上皮癌細胞、人正常尿路上皮細胞、人成纖維細胞抑制率。通過流式細胞術檢測CONPs對膀胱癌細胞周期的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法檢測CONPs對膀胱癌細胞凋亡的影響;Transwell實驗驗證CONPs對膀胱癌細胞遷移和侵襲能力的影響。小鼠皮下種植成瘤建立小鼠膀胱癌模型,瘤內注射CONPs觀察其在體外對膀膀胱癌細胞的影響。蛋白印記法檢測CONPs對膀胱癌凋亡、自噬相關蛋白標志物表達的影響�！窘Y果】在體外,較低劑量氧化亞銅納米粒CONPs可有效殺傷各不同膀胱尿路上皮癌細胞系,且對人正常尿路上皮細胞系和成纖維細胞系的殺傷作用小于腫瘤細胞系。通過細胞周期、凋亡檢測發(fā)現(xiàn)經氧化亞銅納米粒CONPs可明顯誘導膀胱癌腫瘤凋亡,影響細胞有絲分裂,導致細胞周期阻滯。小鼠體外荷瘤實驗結果表明,與對照組相比,CONPs治療組皮下腫瘤體積明顯減少,抑制腫瘤增長效果顯著,且CONPs治療組小鼠體重相比對照組未出現(xiàn)明顯改變,小鼠肝、腎、肺、脾、心臟均未見明顯改變,提示CONPs在有效抑制腫瘤的同時具有較高的安全性。通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn),低劑量CONPs處理膀胱腫瘤細胞引起ATG5、ATG7、LC3B等蛋白表達上調,提示CONPs處理與膀胱癌細胞自噬現(xiàn)象有著密切關系�！窘Y論】綜上所述,本研究證明,低劑量的CONPs可通過誘導膀胱癌細胞產生自噬和凋亡,抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲,CONPs在體內及體外實驗中均體現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用,本研究為CONPs作為一種新型無機納米藥物應用于膀胱癌治療領域提供了實驗理論支持。
【學位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.14
【圖文】：

圖 1.CCK-8 檢測氧化亞銅納米粒對 T24、SW780、J82、5637、人胃成纖維細胞、人正常尿路上皮細胞的抑制率A：納米氧化氧化亞銅納米粒處理 48 小時，尿路上皮癌細胞受抑制率隨 CONPs 濃度上升而上升B：納米氧化氧化亞銅納米粒處理 72 小時，尿路上皮癌細胞受抑制率隨 CONPs 濃度上升而上升C-D：低濃度氧化亞銅納米粒（0.625—2.5μg/mL）對尿路上皮癌細胞抑制率高于成纖維細胞和正常尿路上皮細胞二、氧化亞銅納米粒對膀胱癌細胞遷移能力的影響通過體外 Transwell 實驗檢測在不同濃度氧化亞銅納米粒作用下，膀胱癌細胞T24、J82 遷移能力變化。實驗結果顯示在氧化亞銅處理 24 小時后，對照組、1.25μg/mL處理組、2.5μg/mL 處理組穿過纖維膜小孔的細胞數(shù)量依次減少。各組 200 倍視野下隨機選取 5 個視野進行數(shù)量統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn) T24 細胞對照組（不加氧化亞銅處理的）單

圖 2.Transwell 實驗檢測氧化亞銅納米粒對膀胱腫瘤遷移能力影響A:J82 細胞 Transwell 實驗檢測氧化亞銅納米粒抑制其遷移能力B:T24 細胞 Transwell 實驗檢測氧化亞銅納米粒抑制其遷移能力三、氧化亞銅納米粒對膀胱癌細胞侵襲能力的影響Transwll 侵襲實驗與腫瘤體內侵襲轉移能力有良好的相關性，膀胱癌細胞需要分泌水解酶，并且通過變形運方可穿過鋪有 Martrigel 基質膠的濾膜。實驗發(fā)現(xiàn)，J82 細胞經 1.25μg/mL、2.5μg/mL 濃度的氧化亞銅亞銅處理后，分解基質膠并穿過濾孔的細胞數(shù)目較對照組顯著減少，且 2.5μg/mL 處理組穿過濾膜細胞數(shù)目少于 1.25μg/mL 組每組均在 200 倍視野下隨機選取 5 個視野進行數(shù)量統(tǒng)計，并計算平均值，對照組、1.25μg/mL 組、2.5μg/mL 各視野穿過基質膠濾膜的細胞數(shù)目分別為 26 個、12 個、4個。實驗組細胞侵襲數(shù)量顯著小于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05，圖 3）。該結果提示，氧化亞銅納米�？娠@著減弱膀胱癌細胞的侵襲能力，且具有濃度依耐性

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 韓勝利;云志中;;肌層浸潤性膀胱癌新輔助化療的臨床應用現(xiàn)狀及進展[J];臨床泌尿外科雜志;2015年02期

2 楊軒;袁棟棟;姜學軍;席志軍;;順鉑通過誘導膀胱癌細胞自噬促進細胞凋亡[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2013年02期

本文編號：2726100