【摘要】：【背景】膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一。在全球范圍內(nèi),膀胱癌發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第九位,在我國,其發(fā)病率在男性惡性腫瘤中占第六位,在所有泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中占第一位。根據(jù)病理分期,膀胱癌可分非肌層浸潤性膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)和肌層浸潤性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)。目前,NMIBC的治療以經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)(transurethral resection of bladder tumor,TURBT)和術(shù)后膀胱灌注為主。然而,NMIBC在TURBT術(shù)后容易發(fā)生進(jìn)展、復(fù)發(fā),患者1年復(fù)發(fā)率為10%-67%,5年復(fù)發(fā)率則為24%-84%�？鼓[瘤藥物治療是除手術(shù)外治療和預(yù)防膀胱癌的重要手段。膀胱灌注治療可降低NMBIC患者TURBT術(shù)后復(fù)發(fā)率,化療可提高晚期膀胱癌患者生存率。然而大量臨床證據(jù)表明,當(dāng)前常應(yīng)用于臨床的膀胱灌注藥物和化療藥物依然存在藥物副作用大、敏感性不佳、耐藥等問題,需要對(duì)新型膀胱癌抗腫瘤藥物開展探索和研究。無機(jī)納米藥物是目前抗腫瘤納米藥物的前沿研究對(duì)象之一,氧化亞銅納米粒(cuprous oxide nanoparticles,CONPs)作為一新型無機(jī)納米材料,在抗腫瘤領(lǐng)域具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。【目的】本課題中將主要研究驗(yàn)證氧化亞銅納米粒CONPs對(duì)膀胱尿路上皮癌細(xì)胞的抗腫瘤作用,并初步探索其作用的機(jī)制�！痉椒ā客ㄟ^低劑量的氧化亞銅納米粒CONPs在體外處理各類膀胱尿路上皮癌細(xì)胞系;CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該藥物對(duì)膀胱尿路上皮癌細(xì)胞、人正常尿路上皮細(xì)胞、人成纖維細(xì)胞抑制率。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CONPs對(duì)膀胱癌細(xì)胞周期的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)CONPs對(duì)膀胱癌細(xì)胞凋亡的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CONPs對(duì)膀胱癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。小鼠皮下種植成瘤建立小鼠膀胱癌模型,瘤內(nèi)注射CONPs觀察其在體外對(duì)膀膀胱癌細(xì)胞的影響。蛋白印記法檢測(cè)CONPs對(duì)膀胱癌凋亡、自噬相關(guān)蛋白標(biāo)志物表達(dá)的影響。【結(jié)果】在體外,較低劑量氧化亞銅納米粒CONPs可有效殺傷各不同膀胱尿路上皮癌細(xì)胞系,且對(duì)人正常尿路上皮細(xì)胞系和成纖維細(xì)胞系的殺傷作用小于腫瘤細(xì)胞系。通過細(xì)胞周期、凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)經(jīng)氧化亞銅納米粒CONPs可明顯誘導(dǎo)膀胱癌腫瘤凋亡,影響細(xì)胞有絲分裂,導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯。小鼠體外荷瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,CONPs治療組皮下腫瘤體積明顯減少,抑制腫瘤增長效果顯著,且CONPs治療組小鼠體重相比對(duì)照組未出現(xiàn)明顯改變,小鼠肝、腎、肺、脾、心臟均未見明顯改變,提示CONPs在有效抑制腫瘤的同時(shí)具有較高的安全性。通過Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),低劑量CONPs處理膀胱腫瘤細(xì)胞引起ATG5、ATG7、LC3B等蛋白表達(dá)上調(diào),提示CONPs處理與膀胱癌細(xì)胞自噬現(xiàn)象有著密切關(guān)系。【結(jié)論】綜上所述,本研究證明,低劑量的CONPs可通過誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞產(chǎn)生自噬和凋亡,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,CONPs在體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中均體現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用,本研究為CONPs作為一種新型無機(jī)納米藥物應(yīng)用于膀胱癌治療領(lǐng)域提供了實(shí)驗(yàn)理論支持。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.14
【圖文】：

圖 1.CCK-8 檢測(cè)氧化亞銅納米粒對(duì) T24、SW780、J82、5637、人胃成纖維細(xì)胞、人正常尿路上皮細(xì)胞的抑制率A：納米氧化氧化亞銅納米粒處理 48 小時(shí)，尿路上皮癌細(xì)胞受抑制率隨 CONPs 濃度上升而上升B：納米氧化氧化亞銅納米粒處理 72 小時(shí)，尿路上皮癌細(xì)胞受抑制率隨 CONPs 濃度上升而上升C-D：低濃度氧化亞銅納米粒（0.625—2.5μg/mL）對(duì)尿路上皮癌細(xì)胞抑制率高于成纖維細(xì)胞和正常尿路上皮細(xì)胞二、氧化亞銅納米粒對(duì)膀胱癌細(xì)胞遷移能力的影響通過體外 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在不同濃度氧化亞銅納米粒作用下，膀胱癌細(xì)胞T24、J82 遷移能力變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在氧化亞銅處理 24 小時(shí)后，對(duì)照組、1.25μg/mL處理組、2.5μg/mL 處理組穿過纖維膜小孔的細(xì)胞數(shù)量依次減少。各組 200 倍視野下隨機(jī)選取 5 個(gè)視野進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn) T24 細(xì)胞對(duì)照組（不加氧化亞銅處理的）單

圖 2.Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化亞銅納米粒對(duì)膀胱腫瘤遷移能力影響A:J82 細(xì)胞 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化亞銅納米粒抑制其遷移能力B:T24 細(xì)胞 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化亞銅納米粒抑制其遷移能力三、氧化亞銅納米粒對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲能力的影響Transwll 侵襲實(shí)驗(yàn)與腫瘤體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力有良好的相關(guān)性，膀胱癌細(xì)胞需要分泌水解酶，并且通過變形運(yùn)方可穿過鋪有 Martrigel 基質(zhì)膠的濾膜。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，J82 細(xì)胞經(jīng) 1.25μg/mL、2.5μg/mL 濃度的氧化亞銅亞銅處理后，分解基質(zhì)膠并穿過濾孔的細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組顯著減少，且 2.5μg/mL 處理組穿過濾膜細(xì)胞數(shù)目少于 1.25μg/mL 組每組均在 200 倍視野下隨機(jī)選取 5 個(gè)視野進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)，并計(jì)算平均值，對(duì)照組、1.25μg/mL 組、2.5μg/mL 各視野穿過基質(zhì)膠濾膜的細(xì)胞數(shù)目分別為 26 個(gè)、12 個(gè)、4個(gè)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲數(shù)量顯著小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，圖 3）。該結(jié)果提示，氧化亞銅納米粒可顯著減弱膀胱癌細(xì)胞的侵襲能力，且具有濃度依耐性

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 韓勝利;云志中;;肌層浸潤性膀胱癌新輔助化療的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];臨床泌尿外科雜志;2015年02期

2 楊軒;袁棟棟;姜學(xué)軍;席志軍;;順鉑通過誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞自噬促進(jìn)細(xì)胞凋亡[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

本文編號(hào)：2726100