【摘要】：結(jié)腸癌在世界惡性腫瘤中居于第三位。由于人們生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變以及體力活動(dòng)的減少,結(jié)腸癌的發(fā)病率不斷上升。盡管最近幾年現(xiàn)代醫(yī)療水平在不斷提高,但是結(jié)腸癌的死亡率依舊呈現(xiàn)上升趨勢(shì),僅次于世界兩大癌癥(肝癌和肺癌),對(duì)人類的健康造成了嚴(yán)重的危害。早期預(yù)防和檢測(cè)是降低人類癌癥發(fā)病率和死亡率的主要方法。目前,臨床上采用的傳統(tǒng)手術(shù)治療療效低,具有一定的副作用,并且易轉(zhuǎn)移。因此,構(gòu)建一種可以操作簡(jiǎn)便、成本低廉的檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞的方法至關(guān)重要。磷脂酶是一類通過(guò)水解磷脂控制游離脂肪酸水平的酶,其在細(xì)胞膜系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。其中磷脂酶C(PLC)可以催化水解磷酸二酯鍵,生成信使二酰甘油(DAG),以調(diào)節(jié)生物多樣性。磷脂酶C降解磷脂的產(chǎn)物與一些生物過(guò)程有關(guān),如消化、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo),這些水解反應(yīng)涉及某些腫瘤細(xì)胞的異常膽堿代謝。因此,構(gòu)建一種用于檢測(cè)PLC活性的操作簡(jiǎn)便、成本低廉的方法對(duì)于生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的臨床檢測(cè)和藥物篩選提供了一個(gè)新的方向。本論文開展了兩個(gè)方面的研究,其一是基于印刷銅電極電化學(xué)檢測(cè)Pb2+和結(jié)腸癌細(xì)胞的研究;其二是利用血糖儀作為檢測(cè)器和包封葡萄糖的脂質(zhì)體作為探針,構(gòu)建一種操作簡(jiǎn)便、成本低廉的檢測(cè)PLC活性的新方法。本論文由三部分組成。第1章緒論包括了四部分,第一部分是對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞和磷脂酶及其檢測(cè)方法進(jìn)行概述。第二部分介紹了量子點(diǎn)的性質(zhì)和兩親有序分子組合體(膠束和脂質(zhì)體)的用途。第三部分綜述了電化學(xué)生物傳感器的發(fā)展。第四部分闡明了本論文的選題背景、研究目的和研究?jī)?nèi)容。第2章基于印刷銅電極電化學(xué)檢測(cè)Pb2+和人類結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116細(xì)胞。首先,利用透析法制備葉酸修飾的包封PbS QDs的聚合物膠束,通過(guò)葉酸受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用使其被HCT116細(xì)胞靶向攝取,再依次通過(guò)離心、硝酸溶解。然后,通過(guò)方波溶出伏安法測(cè)定Pb2+實(shí)現(xiàn)對(duì)HCT116細(xì)胞的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:銅基傳感器的響應(yīng)電流與HCT116細(xì)胞的濃度在102～104cells/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為40cells/mL。這表明該傳感器用于檢測(cè)HCT116細(xì)胞具有較好的靈敏度。第3章利用血糖儀作為檢測(cè)器和包封葡萄糖的脂質(zhì)體作為探針,構(gòu)筑了一種操作簡(jiǎn)便、成本低廉的檢測(cè)PLC的方法。首先,通過(guò)反相蒸發(fā)法合成了包封有葡萄糖的脂質(zhì)體納米載體。然后,將PLC加入到脂質(zhì)體中后,PLC會(huì)立即水解脂質(zhì)體,釋放出包封的葡萄糖,所釋放的葡萄糖可以通過(guò)使用低成本的市售個(gè)人血糖儀(PGM)進(jìn)行定量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:血糖儀讀出信號(hào)與PLC濃度在10～100 U/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為2.3 U/L。該方法的檢出限比以前報(bào)道的檢測(cè)PLC活性方法的檢出限低,并且此方法用于檢測(cè)PLC的活性具有較好的靈敏度。
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：O657.1;R735.35
【圖文】：

使用在ＧＯ邋／邋ＣＮＴ表面上的圓形區(qū)域獲得的ＬＤＩ－ＴＯＦ質(zhì)譜可以得到脂質(zhì)水解速率，逡逑將磷脂水解前后的物質(zhì)分別滴在ＧＯ邋／邋ＣＮＴ膜表面上，通過(guò)比較反應(yīng)物和產(chǎn)物的質(zhì)逡逑譜峰強(qiáng)度來(lái)檢測(cè)磷脂酶的活性（如圖１－４）。逡逑＾ＭＳ邋ａｎａｌｙｓｉｓ逡逑，＾＼一廣邐匕Ｉ逡逑＇邋ｍ邋—￣ｕ邋ｉ逡逑Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ邋Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ邋ＧＯ／ＣＮＴ邋ｃｈｉｐ邐｜邋＼逡逑ｍ／ｚ逡逑圖１－４基于ＬＤＩ邋ＭＳ的磷脂酶活性檢測(cè)方法逡逑Ｆｉｇ．邋１－４邋Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ邋Ａｃｔｉｖｉｔｙ邋Ａｓｓａｙｓ邋Ｂａｓｅｄ邋ｏｎ邋ＬＤＩ邋ＭＳ逡逑0量子點(diǎn)概述逡逑量子點(diǎn)（ＱＤｓ）也被稱為半導(dǎo)體納米晶體，目前被廣泛應(yīng)用于生物和醫(yī)學(xué)研究，逡逑是一種新型熒光標(biāo)記物［６２＿６５］。與常規(guī)染料相比，量子點(diǎn)具有更好的光物理性質(zhì)。逡逑量子點(diǎn)可以通過(guò)適當(dāng)?shù)谋砻嫘揎検蛊涑蔀樗苄粤孔狱c(diǎn)而與生物系統(tǒng)相容［６６］。量逡逑子點(diǎn)的表面修飾有兩種方法，一種是通過(guò)應(yīng)用表面官能團(tuán)化將量子點(diǎn)與ＤＮＡ、抗逡逑體或蛋白質(zhì)連接，以實(shí)現(xiàn)選擇性結(jié)合或靶向結(jié)合。另一種是將ＱＤ包埋在與水相逡逑容的脂質(zhì)顆粒中。Ｌｉ等人利用一種優(yōu)良的制劑將ＰｄＳ邋ＱＤｓ包封到膠束中，然后將逡逑包封ＰｄＳ邋ＱＤｓ的膠束注射到小鼠體內(nèi)，用于追蹤小鼠的胚胎細(xì)胞分裂情況［６７，６８］。逡逑在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中

硅烷（ＭＰＴＳ）混合。巰基能夠與ＱＤ的ＺｎＳ層結(jié)合，從而取代ＴＯＰＯ層，隨后加逡逑熱溶液以促進(jìn)硅烷醇基團(tuán)的交聯(lián)。用不同的官能團(tuán)，如硫醇、胺或羧基等修飾二逡逑氧化硅殼以確保其與生物分子的共價(jià)連接［８１］，如圖１－７所示。逡逑ＺｎＳ邋ｓｈｅｌｌ邐＾逡逑＾邐ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ逡逑ｓｉｌｏｘａｎｅ邋ｓｈｅｌｌ邐ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ逡逑—ｆ邐Ｍｏｌｅｃｕｌｅ逡逑＼邐ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ邋ｇｒｏｕｐ逡逑ｒｂｅＳＴｅＳ邐ｆｕＬｏｎａ，邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑ｏｕｔｅｒ邋ｓｉｌｏｘａｎｅ邋ｓｈｅｌｌ：邐ｒ邐ｅｍｂｅｄｄｅｄ邋ｉｎ邋ｔｈｅ逡逑ｏｕｔｅｒ邋ｓｉｌｏｘａｎｅ邋ｓｈｅｌｌ：逡逑圖１－７二氧化硅包覆量子點(diǎn)的模塊化設(shè)計(jì)，逡逑Ｆｉｇ．邋１－７邋Ｍｏｄｕｌａｒ邋ｄｅｓｉｇｎ邋ｏｆ邋ｓｉｌｉｃａ－ｃｏａｔｅｄ邋ＱＤｓ邋ｗｉｔｈ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑Ｙｕ等人［８２］通過(guò)ＰＭＡＯ與伯胺封端的ＰＥＧ甲基醚之間的反應(yīng)制備了兩親性聚逡逑合物聚（馬來(lái)酸酐－交替－１－十八碳烯）（ＰＭＡＯ）邋－ＰＥＧ。然后將非極性ＱＤ與氯逡逑仿中的ＰＭＡＯ－ＰＥＧ混合并攪拌過(guò)夜。如圖１－８所示，顯示了這些兩親性聚合物涂逡逑覆的量子點(diǎn)的模塊化設(shè)計(jì)。這些被ＰＭＡＯ－ＰＥＧ包被的ＱＤ具有與量子點(diǎn)相同的光逡逑學(xué)性質(zhì)，例如，量子產(chǎn)率，并可以成功識(shí)別具有Ｈｅｒ２受體的癌細(xì)胞。在這種情況逡逑下，ＱＤ和聚合物配體之間的結(jié)合完全依賴于疏水性吸引力，然而聚合物的長(zhǎng)度會(huì)逡逑８逡逑

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