【摘要】：研究目的:探討微小 RNA-125b(miR-125b)在食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)增殖及細(xì)胞凋亡中的作用。明確miR-125b與候選靶點(diǎn)bcl-2修飾因子(bcl-2 modification factor,BMF)之間的調(diào)控關(guān)系。探討miR-125b/BMF途徑對食管癌診斷的意義。材料與方法:1.根據(jù)研究要求選擇66例ESCC癌組織和對應(yīng)癌旁組織,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-125b在組織中的表達(dá)水平,同時(shí)結(jié)合臨床病理資料及預(yù)后行相關(guān)性分析。2.檢測miR-125b在人食管癌細(xì)胞109(EC109)和人食管癌細(xì)胞9706(EC9706)2種食管癌細(xì)胞系及正常食管上皮細(xì)胞中的本底表達(dá)。3.將合成miR-125b陰性對照(NC)或miR-125b模擬物或相應(yīng)抑制物轉(zhuǎn)染進(jìn)入EC109和EC9706食管癌細(xì)胞系,用細(xì)胞計(jì)數(shù)Kit-8(CCK8)檢測miR-125b模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染ESCC細(xì)胞系后發(fā)生的變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期和凋亡的變化。4.體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-125b在ESCC中的作用,將EC 109細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-125b模擬物及NC并注射到裸鼠中,注意觀察它們的變化,定期稱重,注意瘤塊變化,了解生長狀況。根據(jù)結(jié)果繪制瘤體體積增長曲線和體質(zhì)量曲線。采用組織學(xué)和免疫組織化學(xué)法檢測裸鼠瘤塊體積、重量以及腫瘤組織Ki-67表達(dá)等情況。5.通過生物信息學(xué)軟件Target Scan尋找miR-125b的潛在靶基因。鑒定BMF為候選靶基因。6.使用沉默BMF(si-BMF)轉(zhuǎn)染EC109和EC9706細(xì)胞,采用qRT-PCR和western blot檢測轉(zhuǎn)染后BMF表達(dá),并用CCK-8檢測細(xì)胞增殖情況,Western blot分析BMF沉默與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。評估ESCC患者組織和ESCC細(xì)胞系中BMF的表達(dá)情況,分析miR-125b與BMF水平之間的關(guān)系。結(jié)果:1.在ESCC癌組織和細(xì)胞系中,miR-125b表達(dá)顯著降低,并且miR-125b的降低與患者淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。2.MiR-125b過表達(dá)顯著抑制細(xì)胞生長,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,增加人食管癌細(xì)胞109和人食管癌細(xì)胞9706細(xì)胞周期的G1期。3.過表達(dá)miR-125b顯著抑制體內(nèi)腫瘤生長。4.BMF是miR-125b調(diào)控人食管癌細(xì)胞109和人食管癌細(xì)胞9706細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的功能靶點(diǎn)。結(jié)論:1.MiR-125b在ESCC中顯著下調(diào),具備成為ESCC具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷潛能。2.MiR-125b通過靶向BMF顯著抑制食管鱗癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.1
【圖文】：

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本文編號：2724218