【摘要】：目的篩選出口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的血清腫瘤標(biāo)志物,并在OSCC中對(duì)篩選出的lncRNA-AC007271.3進(jìn)行初步功能研究。材料與方法1.采用 lncRNA(long non-coding RNA,lncRNA)芯片,篩選出 OSCC 及癌旁對(duì)照口腔黏膜組織中差異性表達(dá)的lncRNAs,并行生物信息學(xué)分析。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR,qPCR)檢測驗(yàn)證芯片結(jié)果。2.檢測分析OSCC患者組織和對(duì)應(yīng)血樣,以及OSCC細(xì)胞中l(wèi)ncRNAs的表達(dá)情況,進(jìn)一步篩選出OSCC血清中特異性表達(dá)的lncRNA(AC007271.3)。3.分別以qPCR及酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)單獨(dú)及聯(lián)合檢測80例OSCC患者及70例健康成人血清中AC007271.3和鱗狀細(xì)胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)、惡性腫瘤特異性生長因子(tumor supplied group of factors,TSGF)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和程序性細(xì)胞死亡蛋白(programmed death-ligand 1,PD-L1)的表達(dá)水平,結(jié)合OSCC患者的臨床參數(shù),分析其臨床意義。同時(shí),應(yīng)用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve,ROC)和決策曲線分析(decision curve analysis,DCA)評(píng)估單獨(dú)或聯(lián)合檢測血清中各標(biāo)志物的診斷價(jià)值;采用Kaplan-Meier生存曲線評(píng)估OSCC患者總體生存情況。4.以熒光原位雜交技術(shù)明確AC007271.3在OSCC細(xì)胞中的定位,進(jìn)一步探討AC007271.3的功能;敲減及過表達(dá)AC007271.3后,采用CCK-8、細(xì)胞克隆形成、劃痕損傷修復(fù)、transwell基質(zhì)膠侵襲及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn),初步探討AC007271.3對(duì)OSCC細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。5.采用免疫印跡及免疫熒光檢測并探討AC007271.3通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路在OSCC發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用。結(jié)果1.基因芯片檢測篩選出691條差異性表達(dá)的lncRNAs和816條差異性表達(dá)的mRNAs(433 條 lncRNAs 表達(dá)上調(diào),258 條 lncRNAs 表達(dá)下調(diào);342 條 mRNAs表達(dá)上調(diào),474條mRNAs表達(dá)下調(diào))。通過GO和pathway等生物信息學(xué)分析及qPCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步篩選出在OSCC及癌旁對(duì)照口腔黏膜組織中存在顯著差異的 4 條 lncRNAs(AC007271.3,AC007182.6,LOC283481 和RP11-893F2.9)(n=30,P0.05)。2.AC007271.3在OSCC患者組織及對(duì)應(yīng)血清中的表達(dá)存在相關(guān)性(r=0.639,P0.001),在OSCC細(xì)胞系及對(duì)應(yīng)細(xì)胞外培養(yǎng)液中均上調(diào),且術(shù)后患者血清中AC007271.3水平明顯下降(P=0.002)。OSCC患者與健康成人血清中AC007271.3呈明顯差異性表達(dá)(n=80 andn=70,P0.0001),其表達(dá)水平與患者腫瘤臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。3.將AC007271.3和SCCA進(jìn)行聯(lián)合檢測,其診斷價(jià)值(AUC = 0.902,P0.001)明顯優(yōu)于二者單獨(dú)檢測,尤其在OSCC的早期階段;OSCC患者血清中AC007271.3及SCCA高表達(dá),提示其預(yù)后相對(duì)較差。此外,血清AC007271.3,SCCA和TSGF聯(lián)合檢測時(shí)的敏感度(77.6%,55%,63.3%)和特異性(84.5%,93.3%,66.7%)均具有優(yōu)勢。4.AC007271.3在OSCC細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中均有表達(dá),體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,敲減AC007271.3,可以抑制OSCC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡;而過表達(dá)AC007271.3,可以促進(jìn)OSCC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力。5.AC007271.3 可以通過上調(diào) β-catenin及其下游分子 CyclinD1、c-myc 及 Bcl-2,激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。結(jié)論AC007271.3是OSCC早期診斷的腫瘤標(biāo)志物,可作為OSCC獨(dú)立的預(yù)后因子。AC007271.3,SCCA和TSGF聯(lián)合檢測可用于OSCC的診斷。AC007271.3能促進(jìn)OSCC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,影響細(xì)胞凋亡,并且可通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程中起作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

口腔黏膜組織（圖中以Ｎ表示）中差異性表達(dá)的基因，以平均表達(dá)水平為界，逡逑分別以紅色和綠色模塊表示上調(diào)及下調(diào)的基因。結(jié)果顯示，ＯＳＣＣ與癌旁對(duì)照口逡逑腔黏膜組織中ｌｎｃＲＮＡｓ及ｍＲＮＡｓ的表達(dá)譜均存在明顯差異（圖２－１）。散點(diǎn)圖逡逑和火山圖進(jìn)一步呈現(xiàn)出上調(diào)及下調(diào)基因中ＦＣ大于２的ｌｎｃＲＮＡｓ邋（圖２－２）。逡逑Ａ邐Ｒ逡逑Ｃｏｌｏｒ邋Ｋｅｙ邐邐邐邋ｗ邐Ｃｏｌｏｒ邋Ｋｅｙ邐邐１逡逑５邋６邋７邋８邋＆邐邐邐１邐ｊ邐６邐６邐１０邐￣邋…＂邐］邐ｆ邐N邐＇：逡逑ＶａＪｙｅ邐Ｊ邐：邐ｊ邐＇邐１邐ＶａＫｉｅ邐［邐Ｌ；邐｜邐｜邐＇邐ｊ逡逑二，二二ｎ：二ＬＴＪ！邐ＳＩＨＩＭＨＩＩＭＨＨＩＨＨＢ逡逑、…邐邐邋邐＾邐“邐洲邐￣逡逑ＴＭｉｉｒ；Ｍｉｉ．ｉｉｒｕ＇ｉ�。椋停停停欤В椋欤椋迹郑В椋瓦姡憾娺娺娺婂义隙叨常。。撸海海憾裕海海玻樱樱樱樱樱樱樱龋渝义希义献郑海海樱纭辏樱牛樱樱蓿蓿蓿蓿祝祝祝祝祝祝停祝祝妫妫欤祝�？ｗ邋栜嘛邐�。海觯蹋�，；ｌ！＾�。海海海牛颍。蓿椋牛椋颍铮纾蓿樱纾纾龋�；＾ｇ逡逑邐？邋—－－－■邋■■，．．．邐邐：Ｈ上逡逑邐￣邋？邋－－ｙ．＞ＫｇＫ：ｉ；邐邐一．一—－一邐＇邋：．邋ｖ＾＇．逡逑供、ｇｇ－抑屖■…””叫．１－＊＊＊…＾々－々，“－－．一如＇＾邋“、二—一邋—邋．．：，．．：．．．：．■邋＾：：ｓ邋．邋＇．－邋－．；：邐一一邋－．＇Ｗ逡逑八？邐ｖ－？－ｓ—＾邋邐邐邐邐邋邐邋１

根據(jù)Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ邋Ｅｘａｃｔ邋Ｔｅｓｔ中Ｐ值的大小，判斷１沉咖八３對(duì)應(yīng)的靶基因功能逡逑的顯著性，從而推斷ＩｎｃＲＮＡｓ可能具有的功能。結(jié)果顯示，這些差異性表達(dá)的逡逑ＩｎｃＲＮＡｓ在細(xì)胞核及胞外區(qū)域中均有分布，主要位于胞外區(qū)域（圖２－３）。逡逑Ａ邐ＧＯ邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋Ｃｏｍｐｏｍｅｎｔ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ逡逑；Ｃ邋３0邋ｊ邋ｃｒｔ0（ｒＫｆＳＱｔｔ＾＼邋——ｒ邋邋邋逡逑ｄ邋ｒ邐｜邋＜ｒ－＾ＯＣ＞Ｃ－？Ｘ－邐．VZ邋ｊ各：Ｖ�。瓪W馨逡逑４邐：逡逑邐邋邋＿邐漢邋８０邐．ｘｏａｒｈ＾ｋｊｒｒ＾ｎｊ逡逑｛邋”邋ｊｗｖｆｒ＾ｉｉＮ＾Ｔ＾ＸｊｒｘＳｖＵ邋＜[緲В危骸邋邋澹А保擼摺嘵嘵保�？＊＊＂＾辶x希洛危牽襄澹茫澹歟歟酰歟幔蟈澹茫錚恚穡錚睿澹睿翦澹茫歟幔螅螅椋媯椋悖幔簦椋錚鑠義�；}叔�，邋．邋，１逦Ｓz誨五五邋五澹螅五蜸
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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2723404