【摘要】：目的:鑒定乳腺癌細(xì)胞中EZH2與Mnc2蛋白質(zhì)相互作用,探討EZH2及Mnc2基因在乳腺癌細(xì)胞中的功能和機(jī)制。方法:1.通過免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)方法以及Western Blot實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證了EZH2與Mnc2的相互作用。2.分別利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及病毒感染的方法構(gòu)建了過表達(dá)及沉默Mnc2細(xì)胞系。3.在誘導(dǎo)型沉默細(xì)胞模型中,利用Western Blot檢測了Mnc2對組蛋白H3第二十七位賴氨酸三甲基化(H3K27me3)的調(diào)控作用。4.在過表達(dá)及沉默Mnc2細(xì)胞模型中,通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法研究Mnc2對乳腺癌細(xì)胞的增殖的影響。結(jié)果:免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明Mnc2與EZH2存在相互作用。成功構(gòu)建了過表達(dá)Mnc2細(xì)胞系MDA-MB231-Tenton-HAMnc2,利用抗HA抗體檢測到HAMnc2高效表達(dá),在過表達(dá)Mnc2細(xì)胞系中證明了Mnc2具有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖功能。構(gòu)建了沉默Mnc2的細(xì)胞系T47D-shMnc2,在此細(xì)胞系中進(jìn)一步驗(yàn)證了Mnc2促進(jìn)細(xì)胞增殖功能。構(gòu)建了強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)型沉默Mnc2細(xì)胞系T47D-Tenton-shMnc2,在此細(xì)胞模型中檢測到沉默Mnc2表達(dá)后可以升高細(xì)胞內(nèi)組蛋白H3K27me3水平。結(jié)論:1.本研究驗(yàn)證確定了Mnc2蛋白為EZH2的相互作用蛋白。2.過表達(dá)Mnc2基因可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖,并且沉默Mnc2基因可以抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,證明Mnc2有調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖的功能。3.Mnc2具有調(diào)控EZH2對H3K27三甲基化修飾的功能。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

EZH2 相互作用鑒定-Mnc2 質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定期通過免疫共沉淀與質(zhì)譜鑒定到 Mnc2（基因名稱為潛在相互作用蛋白，為了研究 Mnc2 與 EZH2 相互作們利用 PCR 克隆的方法構(gòu)建了 plv-HA-Mnc2 表達(dá)內(nèi)過表達(dá) Mnc2 與 HA 標(biāo)簽融合蛋白。經(jīng) PCR 驗(yàn)證、2、3、4 正確，單克隆菌落 5 為陰性，如圖 1。隨析，最后選取 2 號克隆質(zhì)粒，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖 2 . Western Blot 檢測 HA-MNc2 在 MB231 細(xì)胞中的過表達(dá)。1 未誘導(dǎo)的 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細(xì)胞；2 加 DOX 誘導(dǎo) 5 天的MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細(xì)胞。Figure 2 Over-expression of the plv-HA-MNc2 in MB231 cells.1 Anti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells without inducenti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells induced by Dox for 3 Mnc2 與 EZH2 相互作用的研究收集 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細(xì)胞，提取細(xì)胞核蛋白之后，A 抗體進(jìn)行免疫共沉淀純化 Mnc2 相互作用蛋白，同時(shí)設(shè) IgG 抗體

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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2 胡峗宏;林曉燕;崔嶸嶸;王錚元;許誠;;EZH2蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2013年07期

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本文編號：2722005