【摘要】：背景和目的:有研究指出非小細(xì)胞肺癌PD-L1的表達(dá)和肺癌驅(qū)動(dòng)基因EGFR有關(guān),并受EGFR調(diào)控。EML4-ALK作為EGFR之外的最重要的NSCLC致癌驅(qū)動(dòng)基因,其和NSCLC中PD-L1的表達(dá)之間的相關(guān)性和分子作用機(jī)制尚不明確。本研究旨在探討非小細(xì)胞肺癌PD-L1表達(dá)與EML4-ALK之間的相關(guān)性,明確PD-L1在NSCLC中的表達(dá)特點(diǎn)和臨床意義,進(jìn)一步研究EML4-ALK對(duì)PD-L1表達(dá)的調(diào)控作用和潛在機(jī)制。材料和方法:1.收集2011年2月-2014年12月在天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院接受根治性手術(shù)切除病理分期Ⅰ-Ⅲ期的EGFR野生型肺腺癌組織141例(所有組織均在天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院病理科接受ALK D5F3 Ventana IHC檢測(cè)),采用免疫組化的方法檢測(cè)癌組織PD-L1表達(dá)情況,分析其與ALK表達(dá)之間的關(guān)系,并進(jìn)一步探討PD-L1表達(dá)與肺腺癌患者的臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。2.應(yīng)用Western Blot、RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)正常人肺支氣管上皮細(xì)胞系Beas-2B、人ALK陰性非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、GLC-82,人ALK陽(yáng)性肺腺癌細(xì)胞系H2228、H3122的PD-L1表達(dá)情況,選取細(xì)胞系Beas-2B、H3122進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.選擇ALK抑制劑TAE684及3種不同的ALK siRNA處理H3122細(xì)胞系,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組;選擇EML4-ALK(V1)重組質(zhì)粒過表達(dá)Beas-2B細(xì)胞系中的ALK蛋白,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照;應(yīng)用Western Blot、RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染及加藥后PD-L1的表達(dá)情況,同時(shí)應(yīng)用Western Blot檢測(cè)JAK3、STAT3、AKT、ERK1/2等的表達(dá)情況,探討EML4-ALK調(diào)控PD-L1表達(dá)的潛在分子機(jī)制。結(jié)果:1.應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)141例肺腺癌組織中PD-L1的表達(dá)情況,PD-L1陽(yáng)性率按照50%cut-off值,5%cut-off值,1%cut-off值分別為22.0%(31/141),42.6%(60/141),58.9%(83/141)。PD-L1陽(yáng)性多見于腫瘤大于等于3.0cm(52.1%vs 32.4%,P=0.018,5%cut-off值;67.1%vs 50.0%,P=0.039,1%cut-off值)、病理類型為浸潤(rùn)性腺癌(45.3%vs 18.2%,P=0.038,5%cut-off值)及ALK重排(38.1%vs 15.2%,P=0.003,50%cut-off值;69.0%vs 31.3%,P0.001,5%cut-off值;73.8%vs 52.5%,P=0.019,1%cut-off值)的患者。以50%cut-off值判定PD-L1陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析顯示:PD-L1陽(yáng)性患者的無(wú)病生存期(disease-free survival,DFS)和總生存期(overall survival,OS)明顯短于PD-L1陰性患者(log-rank?~2=7.087,P=0.008,DFS;log-rank?~2=4.705,P=0.030,OS)。單因素分析顯示:影響DFS的因素包括病理分期(HR,5.31;95%CI 2.81-10.03;P0.001)、PD-L1過表達(dá)(HR,2.07;95%CI 1.16-3.70;P=0.014);影響OS的因素包括病理分期(HR,9.99;95%CI 3.36-29.70;P0.001)、病理亞型(HR,3.76;95%CI 1.39-10.14;P=0.009)、輔助治療(HR,0.18;95%CI 0.07-0.49;P0.001)和PD-L1過表達(dá)(HR,2.63;95%CI 1.05-6.60;P=0.039)。Cox多因素分析顯示:獨(dú)立影響DFS的因素包括病理分期(HR,3.95;95%CI 2.26-6.93;P0.001)、PD-L1過表達(dá)(HR,1.95;95%CI 1.14-3.33;P=0.015);獨(dú)立影響OS的因素包括病理分期(HR,8.15;95%CI 3.01-22.07;P0.001)、病理亞型(HR,3.75;95%CI 1.44-9.79;P=0.007)、輔助治療(HR,0.23;95%CI 0.09-0.57;P=0.002)。PD-L1過表達(dá)是影響患者DFS的獨(dú)立預(yù)后因素,PD-L1陽(yáng)性患者DFS更短;PD-L1過表達(dá)是患者OS的預(yù)后不良因素,但PD-L1過表達(dá)并非非小細(xì)胞肺癌患者OS的獨(dú)立預(yù)后因素。2.Western Blot結(jié)果顯示:PD-L1蛋白在ALK陽(yáng)性肺腺癌細(xì)胞系H2228、H3122中的表達(dá)要高于ALK陰性細(xì)胞系A(chǔ)549、GLC-82及正常肺支氣管上皮細(xì)胞系Beas-2B;RT-PCR結(jié)果顯示:PD-L1mRNA在ALK陽(yáng)性細(xì)胞系的表達(dá)同樣顯著高于陰性及正常細(xì)胞系;細(xì)胞免疫熒光顯示:PD-L1蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞膜上,且H3122細(xì)胞PD-L1熒光強(qiáng)度顯著高于A549細(xì)胞。3.Western Blot、RT-PCR結(jié)果顯示:ALK抑制劑TAE684、ALK siRNA-1及ALK siRNA-2成功使H3122細(xì)胞中的ALK蛋白低表達(dá),同時(shí)也下調(diào)了PD-L1蛋白的表達(dá);轉(zhuǎn)染了EML4-ALK(V1)重組質(zhì)粒的Beas-2B細(xì)胞成功表達(dá)了ALK蛋白,同時(shí)也上調(diào)了PD-L1的表達(dá);應(yīng)用ALK抑制劑TAE684處理H3122細(xì)胞時(shí),JAK-STAT3通路、PI3K-AKT通路及EKR1/2通路蛋白的活性受到抑制;而當(dāng)Beas-2B細(xì)胞過表達(dá)外源性EML4-ALK基因后,JAK-STAT3通路、PI3K-AKT通路及EKR1/2通路蛋白表達(dá)升高,說明上述通路可能參與ALK對(duì)非小細(xì)胞肺癌PD-L1表達(dá)的調(diào)控。結(jié)論:PD-L1在ALK陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌患者組織和ALK陽(yáng)性非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中高表達(dá),同時(shí)PD-L1高表達(dá)可作為肺腺癌患者預(yù)后不良的標(biāo)記物。抑制ALK蛋白表達(dá)可下調(diào)PD-L1的表達(dá);過表達(dá)外源性EML4-ALK基因可上調(diào)PD-L1的表達(dá)。JAK-STAT3通路、PI3K-AKT通路及EKR1/2通路可能參與ALK對(duì)非小細(xì)胞肺癌PD-L1表達(dá)的調(diào)控。上述發(fā)現(xiàn)為肺癌的分子靶向治療聯(lián)合免疫治療提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2
【圖文】：

8-L1 在非小細(xì)胞肺癌組織中的染色情況。注：A：50% cut-off 值% cut-off 值陽(yáng)性染色；C：1% cut-off 值陽(yáng)性染色；D：陰性染同 cut-off 值下 PD-L1 在 ALK 陽(yáng)性及 ALK 陰性 NSCLC 患者中的注：A：50% cut-off 值；B：5% cut-off 值；C：1% cut-off 值究分析PD-L1過表達(dá)和非小細(xì)胞肺癌其它臨床病理特征之間的關(guān) 陽(yáng)性多見于腫瘤大于等于 3.0cm（52.1% vs 32.4%，P = 0.018，5%

8圖 2：不同 cut-off 值下 PD-L1 在 ALK 陽(yáng)性及 ALK 陰性 NSCLC 患者中的陽(yáng)性率對(duì)比。注：A：50% cut-off 值；B：5% cut-off 值；C：1% cut-off 值本研究分析PD-L1過表達(dá)和非小細(xì)胞肺癌其它臨床病理特征之間的關(guān)系（表1）。PD-L1 陽(yáng)性多見于腫瘤大于等于 3.0cm（52.1% vs 32.4%，P = 0.018，5% cut-off

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 金貽鐸;陸江陽(yáng);吳昊;;兩種免疫組化法在肺腺癌EML4-ALK檢測(cè)中的比較[J];診斷病理學(xué)雜志;2015年12期

2 張夢(mèng)雪;裴斐;王田力;韓翔;由江峰;鄒鵬程;王月琪;李緒文;劉鑫;鐘鎬鎬;劉巖;王玉湘;王華;張波;;95例非小細(xì)胞肺癌患者的間變性淋巴瘤激酶融合基因表達(dá)情況、臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年04期

本文編號(hào)：2720352