【摘要】：目的:沉默人前列腺癌PC3細(xì)胞Mig-7基因,分析Mig-7基因?qū)C3細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成及體外遷移、侵襲能力的影響。方法:培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3,采用siRNA沉默前列腺癌PC3細(xì)胞中Mig-7基因,通過熒光實(shí)時定量PCR檢測Mig-7 mRNA的表達(dá)變化,蛋白質(zhì)印跡法檢測Mig-7蛋白的變化,選擇干擾效果最好的一組進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分PC3組、PC3+NC-siRNA組PC3+Mig-7siRNA組,轉(zhuǎn)染48h后將三組細(xì)胞進(jìn)行體外三維培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察血管生成擬態(tài)數(shù)目,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell法觀察三組細(xì)胞遷移、侵襲能力。結(jié)果:實(shí)時熒光定量PCR及Western-blot結(jié)果示:siRNA沉默人前列腺癌PC3細(xì)胞中Mig-7基因后,PC3細(xì)胞mRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平均明顯下降,Mig-7基因沉默效率達(dá)60%以上;體外三維培養(yǎng)結(jié)果示:沉默Mig-7基因,前列腺癌PC3細(xì)胞血管生成擬態(tài)數(shù)目明顯減少;劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:沉默Mig-7基因,PC3細(xì)胞遷移及侵襲能力減弱。結(jié)論:沉默Mig-7基因的表達(dá)可抑制人前列腺癌PC3細(xì)胞的體外血管生成擬態(tài)形成及遷移、侵襲能力。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25
【圖文】：

第四章 結(jié)果檢測轉(zhuǎn)染效率采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染 FAM-siRNA 后，在倒置熒光顯微鏡下可觀察 標(biāo)簽的綠色熒光（如下圖所示），隨機(jī)取五個 視野并計(jì)算細(xì)胞數(shù)目，顯示成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù) 60%以上，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。

組樣品瓊脂糖電泳總RNA

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2719937