【摘要】：目的研究循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)及其上皮間質轉化(EMT)與結直腸癌臨床資料的相關性。方法收集2016.03.01-2017.3.31在廣東省人民醫(yī)院普外一區(qū)(胃腸專業(yè)組)行手術治療并接受CTCs檢測的結直腸癌患者的臨床資料,采用CanpatrolTM二代CTC檢測技術分別于術前2h、術后2周檢測患者的CTCs、并用EMT標記物進行CTC分型,分析CTC及其不同表型與患者臨床資料的相關性。結果共收集到68例合乎要求的結直腸癌患者,其中男性39例,女性29例;≥60歲33例,60歲35例;右半結腸癌14例,左半結腸癌23例,直腸癌31例;腫瘤直徑5cm 44例,≥5cm 24例;按TNM臨床分期:Ⅰ期7例、Ⅱ期14例、Ⅲ期35例、Ⅳ期12例;Ⅲ期患者中轉移淋巴結≤枚17例,3枚18例。CTCs可以分成上皮型、間質型及上皮間質轉化的過渡狀態(tài)三種類型;85.29%(58/68)的患者術前檢測出CTCs,其中EMT型及間質型CTCs比例明顯高于上皮型,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);患者年齡≥60歲組與60歲組之間、男女之間CTCs檢出率及各亞型的比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);右半結腸癌患者總CTCs、EMT型及間質型CTCs的平均檢測值均高于左半及直腸癌患者,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);但右半、左半及直腸癌三組患者之間上皮型CTCs的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);腫瘤最大直徑5cm及≥5cm二組患者之間CTC檢出率的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),腫瘤最大直徑≥5cm患者總CTCs、EMT型及間質型CTCs的平均檢測值均略高于5cm患者,≥5cm患者的上皮型CTCs略低于5cm患者,但以上二組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);Ⅳ期患者CTCs檢測率、總CTCs、EMT型及間質型CTCs平均值均高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),Ⅳ期患者的上皮型CTCs亦高于另外三組患者但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);對未出現淋巴結及遠處轉移的Ⅰ、Ⅱ期患者CTCs進行比較,分析T分期與CTCs的關系,Ⅰ期的CTC檢出率及CTC平均值均略低于Ⅱ期患者,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);對Ⅱ期高�；颊哌M行比較,高�；颊呓M總CTCs平均檢測值高于低危組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),高危組的EMT型CTCs及間質型CTCs的平均值均高于低危組、高危組的上皮型CTCs平均值低于低危組,但以上數值差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);Ⅲ期患者中,淋巴結轉移數3個患者組總平均CTCs值、上皮型、EMT型及間質型CTCs均高于淋巴結轉移數≤3個患者組,但只有間質型CTCs數值差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);術前術后比較,除ⅣV期患者術后CTC檢測率仍為100%外,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期結直腸癌患者行根治術后CTC檢測率及各型數值均明顯下降;相關分析顯示,CTC總數與間質型CTC均與TNM臨床分期相關(P值均0.05),腫瘤分期越晚,CTC總數及間質型CTC數目越多,而上皮型CTC與臨床分期未觀察到明顯相關性;CTCs總數、上皮型及間質型均與CEA值呈正相關(P值均0.05),均與Ca19-9及腫瘤最大徑無明顯相關,只有EMT型及間質型CTCs與淋巴結轉移數目呈正相關(P0.05)。結論循環(huán)腫瘤細胞(尤其是間質型CTC)與結直腸癌患者的臨床分期、腫瘤部位、高危因素、以及轉移密切相關;腫瘤細胞的上皮間質轉化在結直腸癌的轉移中具有重要作用。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.34
【圖文】：

３）棄去凍存液，加入含有１０％胎牛血清的ＲＰＭ１－１６４０培養(yǎng)液重懸細胞，逡逑并將其移入培養(yǎng)瓶中，在５％Ｃ０２、３７°Ｃ恒溫條件下培養(yǎng)，隔天換液。逡逑４）當細胞增殖并鋪滿培養(yǎng)瓶底約８０％－９０％時，棄去培養(yǎng)液，ＤＰＢＳ液清洗逡逑后加入０．２５％胰酶ｌｍｌ靜置ｌｍｉｎ左右，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，逡逑當細胞變圓縮小后加入含有１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培養(yǎng)液重懸細逡逑胞，將細胞按１：２或１：３進行分瓶培養(yǎng)（具體由細胞數量決定）。逡逑２．２對ＣＴＣ進行分離和分型逡逑采用Ｃａｎｐａｔｒｏｌ？二代ＣＴＣ檢測技術，首先裂解外周血中的紅細胞，采用國逡逑際公認卟ｍ孔徑的納米膜截留ＣＴＣｓ，實現對所有類型ＣＴＣｓ的分離，最大程度逡逑保留腫瘤細胞原始信息，然后結合多重ＲＮＡ原位雜交（ＲＮＡ－１ＳＨ）技術，排除逡逑表達ＣＤ邋４５＋白細胞，對富集ＣＴＣｓ進行特異性基因核酸定位，對ＣＴＣｓ進行精逡逑準分型，包括上皮型ＣＴＣｓ邋（表達ＥｐＣＡＭ，ＣＫ８／１８／１９）、間質型ＣＴＣｓ邋（表達逡逑Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ｔｗｉｓｔ）、ＥＭＴＣＴＣｓ以及腫瘤細胞團塊ＣＴＭ邋（如圖２）。逡逑

捐獻的血液中，依次進行紅細胞裂解、過濾、ＲＮＡ－ＩＳＨ后，用熒光顯微鏡計數逡逑細胞，并重復５次。結果表明，富集過程為線性（Ｒ２邋＝邋０．９９９），平均檢測率達逡逑８０％以上（８０％？８９％邋）（如圖５，表３邋）。逡逑２１逡逑

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 ;Effect and mechanism of the Twist gene on invasion and metastasis of gastric carcinoma cells[J];World Journal of Gastroenterology;2008年16期

2 梁春林,張國利,陳志奇,張奇兵,梁龍彥,白山,陳克林,黃海濤;乳腺癌、胃癌及大腸癌患者外周血CK20的檢測與其臨床病理分期相關性研究[J];中國臨床醫(yī)學;2004年04期

相關碩士學位論文 前1條

1 劉巧珍;循環(huán)腫瘤細胞(CTC)及循環(huán)腫瘤干細胞(CTSC)的檢測與結直腸癌臨床資料的相關性分析[D];福建醫(yī)科大學;2014年

本文編號：2714892