發(fā)布時(shí)間：2020-06-13 17:52

【摘要】：目的:探討姜黃素與5-FU聯(lián)合使用對(duì)粘液表皮樣癌MEC-1細(xì)胞的凋亡效應(yīng)及NF-κB、caspase-3蛋白表達(dá)的影響。為姜黃素與5-FU聯(lián)合使用對(duì)粘液表皮樣癌的治療上提供一定的理論依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)組分為姜黃素組、5-FU組、聯(lián)合組,對(duì)照組為含有0.1%DMSO的PBS組。將MEC-1細(xì)胞置于含10%胎牛血清及1%雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)液,37℃、5%CO_2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并進(jìn)行傳代,待腫瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)備用。(1)不同濃度姜黃素(0、20、40、60、80、120μmol//L)孵育MEC-1細(xì)胞不同時(shí)間(24、48、72h)后,用CCΚ-8檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率。(2)同樣,不同濃度5-FU(0、20、40、60、80、120μmol/L)孵育MEC-1細(xì)胞24h后,用CCΚ-8檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算出姜黃素、5-FU 24h的IC_(50)值用于后續(xù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。(3)姜黃素和5-FU單獨(dú)及聯(lián)合作用于粘液表皮樣癌MEC-1細(xì)胞24h,CCΚ-8法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞體外增殖抑制情況。(4)加入不同濃度(20、40、60μmol/L)的姜黃素、5-FU、姜黃素+5-FU孵育MEC-1細(xì)胞,培養(yǎng)12、24h后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡的檢測(cè)。(5)加入34.79μmol/L濃度的姜黃素和104.6μmol/L濃度的5-FU單獨(dú)及聯(lián)合作用于MEC-1細(xì)胞24h后,Western bolt測(cè)定NF-κB、caspase-3蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果:(1)不同的濃度作用下,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組對(duì)MEC-1細(xì)胞增殖作用的比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(組間)=719.378,P_(組間)0.01)。隨著作用時(shí)間增加,姜黃素對(duì)MEC-1的細(xì)胞增殖抑制作用增強(qiáng)(F_(時(shí)間)=203.286,P_(時(shí)間)0.01);姜黃素不同濃度組與時(shí)間存在交互效應(yīng)(F_(交互)=12.650,P_(交互)0.01),即在不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度的姜黃素均對(duì)MEC-1細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用。(2)隨著5-FU濃度升高,對(duì)MEC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)。(3)聯(lián)合用藥組與34.79μmol/L姜黃素、聯(lián)合用藥組與104.6μmol/L 5-FU之間對(duì)MEC-1細(xì)胞增殖抑制作用的比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥對(duì)MEC-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用更強(qiáng)。(4)各實(shí)驗(yàn)組藥物均能誘導(dǎo)MEC-1細(xì)胞凋亡。隨著濃度升高,各藥物組誘導(dǎo)MEC-1細(xì)胞凋亡作用增強(qiáng)。聯(lián)合用藥組與姜黃素組之間、聯(lián)合用藥組與5-FU組之間對(duì)MEC-1細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)MEC-1細(xì)胞凋亡作用更強(qiáng)。(5)姜黃素與5-FU均能下調(diào)NF-κB及上調(diào)caspase-3蛋白表達(dá)水平,聯(lián)合用藥組下調(diào)NF-κB,上調(diào)Caspase-3蛋白能力高于單獨(dú)用藥組(P0.05)。結(jié)論:(1)不同濃度的姜黃素、5-FU均能有效抑制MEC-1細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)MEC-1細(xì)胞的凋亡,聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥對(duì)MEC-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及誘導(dǎo)凋亡作用更強(qiáng)。(2)姜黃素與5-FU聯(lián)合使用能夠有效的抑制MEC-1細(xì)胞的增殖,促進(jìn)MEC-1細(xì)胞凋亡,其作用機(jī)制可能通過抑制NF-κB活性,上調(diào)caspase-3表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 不同濃度姜黃素作用于 MEC-1 細(xì)胞不同時(shí)間后的吸光度值（n=5）表 1 CCK-8 法測(cè)定各濃度組姜黃素作用 MEC-1 細(xì)胞不同時(shí)間后生長(zhǎng)抑制率（ ±S,n=5,%姜黃素濃度（μmol/L）細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率24h 48h 72h0 2.85±0.650 3.15±0.671▲2.68±0.391C 20 25.553±7.887★39.770±4.081★▲43.79±4.13★C 40 58.978±1.494★ 82.965±1.852★ ▲88.48±3.08★ C 60 66.575±4.803★◆86.363±3.445★◆▲93.08±2.40★◆C 80 70.580±0.718★ 92.406±2.507★ ▲94.30±4.01★ C 120 84.392±1.868★ 93.729±2.451★ ▲95.52±2.70★ C 注：與同時(shí)刻的對(duì)照組比較，★p<0.01;與同時(shí)刻的 20μmol/L 濃度組對(duì)比， p<0.05；與同時(shí)刻的 40μmol/L 對(duì)比，◆p<0.05；與同時(shí)刻的 60μmol/L 濃度組對(duì)比， p>0.05；與同時(shí)刻的 80μmol/L 濃度組對(duì)比， p<0.05濃度的 24h 實(shí)驗(yàn)組對(duì)比，▲p<0.01；與同濃度的 24h 實(shí)驗(yàn)組對(duì)比，Cp<0.01；與同濃度的 48h 實(shí)驗(yàn)組對(duì)比， P

組存在顯著差異（P<0.01），72h與48h組存在差異(P<0.05)，姜黃素在同 濃度下對(duì)MEC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。其中48h后, 各濃度組姜黃素對(duì)MEC-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用速率減緩（見表1、圖2）。姜黃素濃度與時(shí)間存在顯著交互效應(yīng)，，即在不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度的姜黃素均對(duì)MEC-1細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用（F姜黃素濃度*時(shí)間=12.650，P<0.01）。（3）通過LSD-t檢驗(yàn)得出，同 時(shí)間不同的藥物濃度（0、20、40、60、80、120μmol/L）作用下，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組對(duì)MEC-1細(xì)胞增殖抑制作用存在顯著差異（P<0.01）。相同時(shí)間組內(nèi)濃度兩兩比較，60μmol/L濃度組與80μmol/L濃度組對(duì)MEC-1細(xì)胞增殖抑制作用無差異（P<0.05），其余各組之間都存在差異（P<0.05）。在同 作用時(shí)間內(nèi)藥物濃度低于60μmol/L時(shí)，隨著濃度升高，姜黃素對(duì)MEC-1細(xì)胞增殖抑制作用顯著增強(qiáng)
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2711529