【摘要】：谷氨酰胺代謝在癌癥發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。作為谷氨酰胺代謝的第一個酶,谷氨酰胺酶被認(rèn)為是一個重要的癌癥治療靶點,對于谷氨酰胺酶表達(dá)調(diào)控的研究也成為當(dāng)前研究的熱點。然而,目前對于谷氨酰胺酶翻譯后修飾的研究相對較少。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)磷酸化修飾是調(diào)控谷氨酰胺酶功能至關(guān)重要的翻譯后修飾,并且是癌細(xì)胞表現(xiàn)出谷氨酰胺酶高活性的主要原因。通過質(zhì)譜技術(shù)與定點突變技術(shù)我們發(fā)現(xiàn)并鑒定出第314位絲氨酸的磷酸化是癌細(xì)胞中調(diào)控谷氨酰胺酶活性的關(guān)鍵磷酸化位點。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在非小細(xì)胞肺癌中NF-κB-PKCε信號軸負(fù)責(zé)調(diào)控谷氨酰胺酶第314位絲氨酸的磷酸化。在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中,我們通過CRISPR/Cas9技術(shù)將谷氨酰胺酶第314位絲氨酸突變?yōu)楸彼?然后研究該位點磷酸化對癌細(xì)胞功能的影響。突變的癌細(xì)胞在增殖能力、克隆集落形成能力及動物體內(nèi)成瘤能力上都受到了顯著的抑制。進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),在突變的癌細(xì)胞中,谷氨酰胺代謝受到了明顯的抑制且基因的表達(dá)模式與細(xì)胞的代謝模式都發(fā)生了重排。此外,我們還發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺酶第314位絲氨酸磷酸化水平與非小細(xì)胞肺癌病人的生存率呈負(fù)相關(guān)。綜上所述,該研究解釋了非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中谷氨酰胺酶呈現(xiàn)高活性的分子機(jī)制,為以谷氨酰胺酶為靶點開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供了堅實的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 2.1 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖依賴于谷氨酰胺A、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞（H1299, H292, SPC-A1,A549, H23）與正常人支氣管上皮細(xì)胞（HBE）分別在正常培養(yǎng)基與谷氨酰胺缺失的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 6 天。然后將細(xì)胞消化下來計數(shù)。＊＊＊P<0.001, ns: P>0.05。B、提取細(xì)胞中的總 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，然后用特異性的 Q-PCR 引物檢測谷氨酰胺酶各個亞型在細(xì)胞中的表達(dá)情況。＊＊＊P<0.001。2.4.2 抑制谷氨酰胺酶的功能影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖

抑制谷氨酰胺酶功能影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖A-F、在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞（H1299,H292,SPC-A1,A549,H23）與正常支氣管上皮細(xì)胞（HBE）
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

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本文編號：2710488