【摘要】：谷氨酰胺代謝在癌癥發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。作為谷氨酰胺代謝的第一個酶,谷氨酰胺酶被認為是一個重要的癌癥治療靶點,對于谷氨酰胺酶表達調控的研究也成為當前研究的熱點。然而,目前對于谷氨酰胺酶翻譯后修飾的研究相對較少。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)磷酸化修飾是調控谷氨酰胺酶功能至關重要的翻譯后修飾,并且是癌細胞表現(xiàn)出谷氨酰胺酶高活性的主要原因。通過質譜技術與定點突變技術我們發(fā)現(xiàn)并鑒定出第314位絲氨酸的磷酸化是癌細胞中調控谷氨酰胺酶活性的關鍵磷酸化位點。進一步研究發(fā)現(xiàn),在非小細胞肺癌中NF-κB-PKCε信號軸負責調控谷氨酰胺酶第314位絲氨酸的磷酸化。在非小細胞肺癌細胞中,我們通過CRISPR/Cas9技術將谷氨酰胺酶第314位絲氨酸突變?yōu)楸彼?然后研究該位點磷酸化對癌細胞功能的影響。突變的癌細胞在增殖能力、克隆集落形成能力及動物體內成瘤能力上都受到了顯著的抑制。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn),在突變的癌細胞中,谷氨酰胺代謝受到了明顯的抑制且基因的表達模式與細胞的代謝模式都發(fā)生了重排。此外,我們還發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺酶第314位絲氨酸磷酸化水平與非小細胞肺癌病人的生存率呈負相關。綜上所述,該研究解釋了非小細胞肺癌細胞中谷氨酰胺酶呈現(xiàn)高活性的分子機制,為以谷氨酰胺酶為靶點開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供了堅實的理論基礎。
【圖文】：

圖 2.1 非小細胞肺癌細胞的增殖依賴于谷氨酰胺A、非小細胞肺癌細胞（H1299, H292, SPC-A1,A549, H23）與正常人支氣管上皮細胞（HBE）分別在正常培養(yǎng)基與谷氨酰胺缺失的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 6 天。然后將細胞消化下來計數(shù)。＊＊＊P<0.001, ns: P>0.05。B、提取細胞中的總 RNA 逆轉錄為 cDNA，然后用特異性的 Q-PCR 引物檢測谷氨酰胺酶各個亞型在細胞中的表達情況。＊＊＊P<0.001。2.4.2 抑制谷氨酰胺酶的功能影響非小細胞肺癌細胞的增殖

抑制谷氨酰胺酶功能影響非小細胞肺癌細胞的增殖A-F、在非小細胞肺癌細胞（H1299,H292,SPC-A1,A549,H23）與正常支氣管上皮細胞（HBE）
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

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本文編號：2710488