【摘要】：第一部分:POU5F1B通過激活AKT促進肝細胞癌的增殖目的:檢測POU5F1B在肝細胞癌(HCC)中的表達,并探究其在促進肝細胞癌增殖過程中的調(diào)控機制。方法:使用TCGA數(shù)據(jù)庫來分析POU5F1B與肝細胞癌的發(fā)展的相關(guān)性。通過MTT實驗、軟瓊脂生長實驗、Brd U摻入法實驗和細胞周期實驗,檢測POU5F1B的過表達對肝癌細胞的增殖影響及其對AKT的的調(diào)控。收集貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院的肝細胞癌患者及正常的肝組織,通過蛋白質(zhì)印跡法及實時熒光PCR實驗檢測組織中POU5F1B的表達水平與Cyclin D1、p21和p27的表達水平,及AKT磷酸化水平的相關(guān)性。結(jié)果:TCGA數(shù)據(jù)庫分析顯示POU5F1B在肝癌細胞和組織中表達明顯的上調(diào),高表達POU5F1B的肝癌患者的總生存時間明顯低于低表達POU5F1B的肝癌患者。MTT實驗、軟瓊脂生長實驗、Brd U摻入法實驗和細胞周期實驗的結(jié)果顯示POU5F1B的過表達可促進肝癌細胞的增殖,而敲低POU5F1B會抑制肝癌細胞的增殖。且POU5F1B可以激活AKT,在肝癌細胞中過表達POU5F1B的情況下抑制AKT,相比于單純過表達POU5F1B的細胞,可以明顯抑制肝癌細胞的增殖,說明POU5F1B是通過激活AKT促進肝癌細胞增殖。在獲取的肝癌組織樣本中檢測發(fā)現(xiàn),POU5F1B的表達水平與Cyclin D1的表達水平呈正相關(guān),而與p21和p27的表達水平及AKT磷酸化水平呈負相關(guān)。結(jié)論POU5F1B通過激活AKT促進肝癌細胞增殖,可以為肝細胞癌的治療提供新的靶點。第二部分:miR-660通過抑制PPP2R2A促進肝細胞癌的增殖目的:檢測miR-660在肝細胞癌(HCC)中的表達,并探究其在促進肝細胞癌增殖過程中的調(diào)控機制。方法:使用TCGA數(shù)據(jù)庫來分析miR-660與肝細胞癌的發(fā)展的相關(guān)性。通過實時熒光PCR實驗檢測了miR-660在多種肝癌細胞及組織中的表達。通過MTT實驗、軟瓊脂生長實驗、Brd U摻入法實驗和細胞周期實驗,檢測miR-660的過表達對肝癌細胞增殖的影響及對PPP2A2R的調(diào)控。通過螢光素酶報告基因測定,實時熒光PCR實驗和蛋白質(zhì)印跡法檢測miR-660對PPP2A2R的調(diào)控。通過實時熒光PCR實驗檢測miR-660與CCND1和p21表達的關(guān)系。結(jié)果:TCGA數(shù)據(jù)庫分析顯示miR-660在肝癌細胞和組織中表達明顯上調(diào)。實時熒光PCR實驗發(fā)現(xiàn)miR-660在多株肝癌細胞中表達上調(diào)。MTT實驗、軟瓊脂生長實驗、Brd U摻入法實驗和細胞周期實驗的結(jié)果顯示miR-660的過表達可促進肝癌細胞的增殖,而敲低miR-660敲低會抑制肝癌細胞的增殖,且miR-660可以抑制PPP2R2A的水平,熒光素酶實驗檢測到miR-660與PPP2R2A的3’-UTR直接結(jié)合。實時熒光PCR實驗的結(jié)果顯示miR-660抑制p21表達并促進CCND1表達。通過軟瓊脂生長實驗和Brd U摻入法實驗證明敲低miR-660后同時敲低PPP2R2A可以促進Hep G2增殖。結(jié)論:miR-660可通過靶向PPP2R2A促進肝癌的增殖,可能成為肝癌治療的新靶點。
【圖文】：

圖 1.人類 OCT4 基因的結(jié)構(gòu)圖[87]Oct4 在早期胚胎中的表達母鼠體內(nèi)，保存在卵母細胞中的 Oct-4 mRNA 和蛋白質(zhì)（352a.a.）是由合子遺并且是發(fā)育至 4 細胞期所必需的。蛋白質(zhì)在小鼠胚胎發(fā)生的這些早期階段以低水平在。合子 Pou5f1 基因的轉(zhuǎn)錄在 4 至 8 個細胞階段被激活。因此，在桑椹胚期前，有卵裂球中都可以檢測到高水平表達的 Oct-4 蛋白。在胚泡形成后，，Oct4 的表達在細胞團（Inner Cell Mass，ICM）中保持高水平，并且不在滋養(yǎng)外胚層（ TrophectodermTE）中表達。在植入小鼠胚胎后，在一組 ICM 細胞中瞬時上調(diào) Oct4 觸發(fā)它們分化原始內(nèi)胚層（hypoblast）細胞。隨后，Oct4 表達在這些細胞中下調(diào)[23-25]。在原腸胚成期間，Oct4 被下調(diào)，在懷孕第 8 天后，它被限制在原始生殖細胞中[24,26,27]。在體外Oct4 在未分化的胚胎干細胞（Embryonic Stem Cell，ECS）、胚胎癌細胞（ EmbryoCarcinoma，EC）和胚胎生殖細胞中高度表達。在白血病抑制因子（LIF）戒斷或視

miR-660 通過抑制 PPP2R2A 促進肝細胞癌的增值 第二章 實驗結(jié)果U5F1B 的高表達意味著肝癌患者的不良預后示 POU5F1B 在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展過程所扮演的角色，我來分析 POU5F1B 在肝癌組織中和正常肝組織中的表達水354 例腫瘤組織進行對比，結(jié)果提示 POU5F1B 在肝細胞癌圖 2)。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Miriam J Alter;;Epidemiology of hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年17期

2 ;Stem cell pluripotency and transcription factor Oct4[J];Cell Research;2002年Z2期

本文編號：2710047