【摘要】：目的近些年來肺癌發(fā)生率日益嚴重,并且以非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)最為嚴重,已經(jīng)有研究報道m(xù)iR-433(微小RNA 433)與胃癌,口腔鱗狀細胞癌有關。尚未發(fā)現(xiàn)miR-433對人非小細胞肺癌A549(人肺腺癌A549細胞株)的影響。因此,本研究著重探討miR-433對人非小細胞肺癌A549細胞增殖及遷移的作用,從而為非小細胞肺癌提供診斷的科學依據(jù)。方法首先Real-time PCR(實時熒光定量PCR)法檢測miR-433在A549、NCI-H1299(人非小細胞肺癌細胞株)、NCI-H358(人非小細胞肺癌細胞株)以及人肺成纖維細胞系HFL1中的表達。不同濃度miR-433 mimic(miR-433模擬物)轉(zhuǎn)染A549細胞,選取最佳濃度進行后續(xù)分析;通過MTT法檢測細胞增殖情況;采用Transwell小室檢測細胞遷移情況;采用雙熒光素酶報告基因法檢測miR-433與PAK4(兔抗人P21活化激酶4)的靶向關系;利用Western blot法檢測P21活化激酶4(PAK4)、LIMK1(絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1)、p-LIMK1(磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1)、Cofilin(肌動蛋白結(jié)合蛋白)和p-Cofilin(磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白)的表達。結(jié)果1.miR-433在三種NSCLC細胞中的表達顯著下降,在A549組平均表達量為(0.42±0.047)其差異經(jīng)過單因素方差分析有統(tǒng)計學意義(F=20.36,P0.003)。2.miR-433 mimic(80 nM)濃度組miR-433相對表達量142.02±10.25明顯高于其他三組,經(jīng)過單因素方差分析發(fā)現(xiàn)四組之間有統(tǒng)計學差異(F=26.32,P=0.004)提示過表達miR-433可顯著抑制細胞增殖。3.為了了解過表達miR-433對A549細胞遷移的影響,隨之進行Transwell試驗,與空白對照組相比較,miR-433 mimic的一組圖中顯示A549細胞明顯降低。miR-433 mimic可顯著抑制A549細胞遷移(P=0.011)。4.在WT組中mimic對照組與miR-433 mimic組的熒光素酶活性分別為1.00±0.120、0.42±0.024,這提示miR-433 mimic可顯著抑制熒光素酶活性(P=0.015)為了觀察PAK4基因和蛋白表達與NSCLC細胞系的三種細胞之間關系,PAK4 protein在A549、NCI-H1299、NCI-H358三者中分別為3.25±0.21、3.35±0.39、3.38±0.15。從條帶中也可看出A549、NCI-H1299、NCI-H358明顯增粗,這都提示了PAK4基因可能是NSCLC細胞的靶基因。5.對于空白對照組、mimic control和mi R-433 mimic PAK4、p-LIMK1、LIMK1、p-coflilin、coflilin、GAPDH信號通路的影響分析以后發(fā)現(xiàn),miR-433mimic轉(zhuǎn)染可顯著抑制PAK4、p-LIMK1以及p-coflilin的表達,條帶明顯稀疏、變細。結(jié)論1、miR-433在非小細胞肺癌細胞株中表達下調(diào)。2、過表達mi R-433可抑制A549細胞的增殖和遷移。3、miR-433通過靶向下調(diào)PAK4的表達,抑制LIMK1/cofilin信號通路,抑制A549細胞的增殖及遷移。4、miR-433作用機制的進一步研究對非小細胞肺癌的合理預防,科學診斷,判斷預后提供新的研究方向。
【圖文】：

Real-timePCR法檢測miR-433的表達（*與HFL1相比，，P<0.05）

10圖2 miR-433mimic 轉(zhuǎn)染對A549 細胞增殖的影響*與相應時間點 mimic control 相比，P<0.05表達 miR-433 抑制 A549 細胞遷移了解過表達 miR-433 對 A549 細胞遷移的影響，隨之進行 Tra白對照組、mimic control 和 miR-433 mimic 三組中觀察 miR-43表達量，分別為（89±5.71）、（84±4.32）和（31±2.16）（P
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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1 李冬霞;王永玲;蔡松旺;;PAK4-LIMK1-Cofilin信號通路對非小細胞肺癌遷移及侵襲能力的影響[J];中國病理生理雜志;2015年12期

2 王香琛;呂曉紅;馬W

本文編號：2709954