【摘要】：目的:本文旨在探究巴弗洛霉素A1(BafilomycinAl,簡(jiǎn)稱Baf-Al)是否可以特異性殺傷人急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-cell acute lymphocytic leukemia,B-ALL)干細(xì)胞。方法:(1)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓(NBM)樣本,用Baf-Al處理原代B-ALL單個(gè)核細(xì)胞及正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)分析B-ALL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞與正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞中CD34+以及CD34+CD19+細(xì)胞比例的變化。(2)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓樣本,通過(guò)流式細(xì)胞分選儀(Fluorescence-activated cell sorter,FACS)分選出 B-ALL CD34+CD19+細(xì)胞以及NBM CD34+細(xì)胞,在不同濃度Baf-Al處理以及不同Baf-Al處理時(shí)間的條件下,研究Baf-Al對(duì)B-ALL干細(xì)胞增殖的影響。(3)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓樣本,通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出B-ALLCD34+CD19+細(xì)胞以及 NBMCD34+細(xì)胞。采用 Annexin V-FITC/PI 雙染色法分析B-ALL干細(xì)胞以及正常造血干細(xì)胞在不同濃度Baf-Al處理以及不同Baf-Al處理時(shí)間條件下細(xì)胞凋亡情況。(4)收集B-ALL患者骨髓樣本,通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出B-ALLCD34+CD19+細(xì)胞,Baf-Al處理后,利用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)Baf-Al是否誘導(dǎo)B-ALLL干細(xì)胞向終末分化細(xì)胞分化。(5)利用流式細(xì)胞分選術(shù)分選出B-ALLCD34+CD19+細(xì)胞以及NBM CD34+細(xì)胞,Baf-Al處理后,運(yùn)用流式細(xì)胞分析儀分析細(xì)胞周期的變化。(6)將B-ALLCD34+CD19+細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射入NSG小鼠體內(nèi),建立急性B淋巴細(xì)胞白血病小鼠模型。實(shí)驗(yàn)分為以下3組:對(duì)照組、模型組、治療組。對(duì)照組小鼠注射PBS;模型組小鼠注射B-ALL。干細(xì)胞;治療組小鼠于注射白血病干細(xì)胞7天后,腹腔注射Baf-Al治療。統(tǒng)計(jì)小鼠的生存曲線,分析小鼠骨髓、外周血表達(dá)外源性白血病抗原標(biāo)志(hCD45、hCD34和hCD19)的情況,檢測(cè)反映小鼠生理狀況和發(fā)病程度的各項(xiàng)指標(biāo),包括:血常規(guī)、肝脾系數(shù)、肝脾病理變化等。結(jié)果:(1)Baf-Al能顯著降低原代B-ALL單個(gè)核細(xì)胞中白血病干細(xì)胞的比例,而相同劑量的Baf-Al對(duì)正常造血干細(xì)沒(méi)有顯著影響。(2)Baf-Al能顯著抑制原代B-ALL干細(xì)胞生長(zhǎng),而相同劑量的Baf-Al對(duì)正常造血干細(xì)胞沒(méi)有明顯抑制作用。(3)Baf-Al特異性誘導(dǎo)原代B-ALL干細(xì)胞凋亡。(4)Baf-Al使部分原代B-ALL干細(xì)胞分化為成熟B細(xì)胞。(5)Baf-Al使部分原代B-ALL干細(xì)胞離開(kāi)GO期,進(jìn)入細(xì)胞周期。(6)在急性B淋巴細(xì)胞白血病小鼠模型中,生存曲線統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:對(duì)照組小鼠始終存活,模型組小鼠存活時(shí)間約為55天,治療組小鼠存活時(shí)間約為110天。小鼠外觀觀察結(jié)果顯示:模型組小鼠呈現(xiàn)弓背蜷縮、活動(dòng)減少、精神萎靡的狀態(tài);而B(niǎo)af-Al治療組小鼠的狀態(tài)比模型組小鼠有明顯的改善。流式結(jié)果顯示:模型組小鼠骨髓細(xì)胞中人CD45+、CD34+CD19+細(xì)胞比例與對(duì)照組相比明顯增加;而治療組小鼠骨髓中對(duì)應(yīng)細(xì)胞的比例與模型組相比明顯下降。血常規(guī)結(jié)果顯示:模型組小鼠外周血中白細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組小鼠相比明顯增加,紅細(xì)胞、血小板、血紅蛋白數(shù)目明顯下降;而在治療組小鼠外周血中,Baf-Al治療可以恢復(fù)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的正常數(shù)目。肝脾病理檢查結(jié)果顯示:模型組小鼠的肝脾腫大明顯,肝臟中有大量白血病細(xì)胞浸潤(rùn);而治療組小鼠的肝脾腫大情況有所恢復(fù),肝臟白細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象明顯減輕。結(jié)論:(1)Baf-Al能夠特異地抑制B-ALL干細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,而不影響正常造血干細(xì)胞。(2)體外Baf-Al處理B-ALL干細(xì)胞,能夠減弱其起始白血病的能力。(3)腹腔注射Baf-Al治療,能夠有效地延長(zhǎng)患病小鼠的存活時(shí)間,并改善患病小鼠的生存狀況。
【圖文】：

Ｂａｆ－Ａｌ是一種常用的自噬抑制劑，它可以抑制自噬溶酶體的形成。當(dāng)我們使逡逑用Ｂａｆ－Ａｌ處理Ｂ－ＡＬＬ細(xì)胞時(shí)，意外發(fā)現(xiàn)：Ｂａｆ－Ａｌ可使Ｂ－ＡＬＬ患者骨髓單個(gè)核細(xì)逡逑胞中具有ＣＤ３４＋表型的細(xì)胞比例顯著降低（圖１）。ＣＤ３４是一個(gè)經(jīng)典的干細(xì)胞標(biāo)逡逑志物。因此，這個(gè)現(xiàn)象提示Ｂａｆ－Ａｌ可能靶向殺傷Ｂ－ＡＬＬ干細(xì)胞。那么，Ｂａｆ－Ａｌ逡逑對(duì)正常造血干細(xì)胞是否會(huì)有毒副作用呢？隨后，我們又收集了邋１０例健康人骨髓樣逡逑本，，分離出單個(gè)核細(xì)胞，用Ｂａｆ－Ａｌ處理后發(fā)現(xiàn)：健康人骨髓單個(gè)核細(xì)胞中具有逡逑ＣＤ３４＋表型的細(xì)胞比例未受影響（圖１）。以上結(jié)果表明，Ｂａｆ－Ａｌ可能靶向殺傷逡逑Ｂ－ＡＬＬ干細(xì)胞，而對(duì)正常造血干細(xì)胞無(wú)毒副作用或毒副作用較小。逡逑Ｃｔｒｌ邐ＤＭＳＯ邐Ｂａｆ－Ａ１邐ＣＤ３４逡逑0邋＊＊逡逑１０００邐１０００邐１０００邐委邐＾邐ｒ￣＾ｉ邐＇逡逑２邋５０邋ｎ邋ｉ邐？逡逑８００：邐Ｉ邐８００邐８００邐－Ｊ邋＾邐？逡逑ｗ邋６００邐６００邐６００邐５邐0ｎ＇邐＼邐－１逡逑４００邐４００邐４００邐２０－邋＊：邐？？全．逡逑２００邐、邐２００邐S緬危玻埃板尉緬危殄危

本文編號(hào)：2706791