【摘要】：目的:本文旨在探究巴弗洛霉素A1(BafilomycinAl,簡稱Baf-Al)是否可以特異性殺傷人急性B淋巴細胞白血病(B-cell acute lymphocytic leukemia,B-ALL)干細胞。方法:(1)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓(NBM)樣本,用Baf-Al處理原代B-ALL單個核細胞及正常骨髓單個核細胞,利用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)分析B-ALL患者骨髓單個核細胞與正常骨髓單個核細胞中CD34+以及CD34+CD19+細胞比例的變化。(2)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓樣本,通過流式細胞分選儀(Fluorescence-activated cell sorter,FACS)分選出 B-ALL CD34+CD19+細胞以及NBM CD34+細胞,在不同濃度Baf-Al處理以及不同Baf-Al處理時間的條件下,研究Baf-Al對B-ALL干細胞增殖的影響。(3)收集B-ALL患者骨髓樣本及健康人骨髓樣本,通過流式細胞儀分選出B-ALLCD34+CD19+細胞以及 NBMCD34+細胞。采用 Annexin V-FITC/PI 雙染色法分析B-ALL干細胞以及正常造血干細胞在不同濃度Baf-Al處理以及不同Baf-Al處理時間條件下細胞凋亡情況。(4)收集B-ALL患者骨髓樣本,通過流式細胞儀分選出B-ALLCD34+CD19+細胞,Baf-Al處理后,利用流式細胞分析儀檢測Baf-Al是否誘導B-ALLL干細胞向終末分化細胞分化。(5)利用流式細胞分選術(shù)分選出B-ALLCD34+CD19+細胞以及NBM CD34+細胞,Baf-Al處理后,運用流式細胞分析儀分析細胞周期的變化。(6)將B-ALLCD34+CD19+細胞經(jīng)尾靜脈注射入NSG小鼠體內(nèi),建立急性B淋巴細胞白血病小鼠模型。實驗分為以下3組:對照組、模型組、治療組。對照組小鼠注射PBS;模型組小鼠注射B-ALL。干細胞;治療組小鼠于注射白血病干細胞7天后,腹腔注射Baf-Al治療。統(tǒng)計小鼠的生存曲線,分析小鼠骨髓、外周血表達外源性白血病抗原標志(hCD45、hCD34和hCD19)的情況,檢測反映小鼠生理狀況和發(fā)病程度的各項指標,包括:血常規(guī)、肝脾系數(shù)、肝脾病理變化等。結(jié)果:(1)Baf-Al能顯著降低原代B-ALL單個核細胞中白血病干細胞的比例,而相同劑量的Baf-Al對正常造血干細沒有顯著影響。(2)Baf-Al能顯著抑制原代B-ALL干細胞生長,而相同劑量的Baf-Al對正常造血干細胞沒有明顯抑制作用。(3)Baf-Al特異性誘導原代B-ALL干細胞凋亡。(4)Baf-Al使部分原代B-ALL干細胞分化為成熟B細胞。(5)Baf-Al使部分原代B-ALL干細胞離開GO期,進入細胞周期。(6)在急性B淋巴細胞白血病小鼠模型中,生存曲線統(tǒng)計結(jié)果顯示:對照組小鼠始終存活,模型組小鼠存活時間約為55天,治療組小鼠存活時間約為110天。小鼠外觀觀察結(jié)果顯示:模型組小鼠呈現(xiàn)弓背蜷縮、活動減少、精神萎靡的狀態(tài);而Baf-Al治療組小鼠的狀態(tài)比模型組小鼠有明顯的改善。流式結(jié)果顯示:模型組小鼠骨髓細胞中人CD45+、CD34+CD19+細胞比例與對照組相比明顯增加;而治療組小鼠骨髓中對應細胞的比例與模型組相比明顯下降。血常規(guī)結(jié)果顯示:模型組小鼠外周血中白細胞數(shù)目與對照組小鼠相比明顯增加,紅細胞、血小板、血紅蛋白數(shù)目明顯下降;而在治療組小鼠外周血中,Baf-Al治療可以恢復白細胞、紅細胞、血紅蛋白和血小板的正常數(shù)目。肝脾病理檢查結(jié)果顯示:模型組小鼠的肝脾腫大明顯,肝臟中有大量白血病細胞浸潤;而治療組小鼠的肝脾腫大情況有所恢復,肝臟白細胞浸潤現(xiàn)象明顯減輕。結(jié)論:(1)Baf-Al能夠特異地抑制B-ALL干細胞增殖并誘導其凋亡,而不影響正常造血干細胞。(2)體外Baf-Al處理B-ALL干細胞,能夠減弱其起始白血病的能力。(3)腹腔注射Baf-Al治療,能夠有效地延長患病小鼠的存活時間,并改善患病小鼠的生存狀況。
【圖文】：

Ｂａｆ－Ａｌ是一種常用的自噬抑制劑，它可以抑制自噬溶酶體的形成。當我們使逡逑用Ｂａｆ－Ａｌ處理Ｂ－ＡＬＬ細胞時，意外發(fā)現(xiàn)：Ｂａｆ－Ａｌ可使Ｂ－ＡＬＬ患者骨髓單個核細逡逑胞中具有ＣＤ３４＋表型的細胞比例顯著降低（圖１）。ＣＤ３４是一個經(jīng)典的干細胞標逡逑志物。因此，這個現(xiàn)象提示Ｂａｆ－Ａｌ可能靶向殺傷Ｂ－ＡＬＬ干細胞。那么，Ｂａｆ－Ａｌ逡逑對正常造血干細胞是否會有毒副作用呢？隨后，我們又收集了邋１０例健康人骨髓樣逡逑本，，分離出單個核細胞，用Ｂａｆ－Ａｌ處理后發(fā)現(xiàn)：健康人骨髓單個核細胞中具有逡逑ＣＤ３４＋表型的細胞比例未受影響（圖１）。以上結(jié)果表明，Ｂａｆ－Ａｌ可能靶向殺傷逡逑Ｂ－ＡＬＬ干細胞，而對正常造血干細胞無毒副作用或毒副作用較小。逡逑Ｃｔｒｌ邐ＤＭＳＯ邐Ｂａｆ－Ａ１邐ＣＤ３４逡逑0邋＊＊逡逑１０００邐１０００邐１０００邐委邐＾邐ｒ￣＾ｉ邐＇逡逑２邋５０邋ｎ邋ｉ邐？逡逑８００：邐Ｉ邐８００邐８００邐－Ｊ邋＾邐？逡逑ｗ邋６００邐６００邐６００邐５邐0ｎ＇邐＼邐－１逡逑４００邐４００邐４００邐２０－邋＊：邐？？全．逡逑２００邐、邐２００邐S緬危玻埃板尉緬危殄危

本文編號：2706791