【摘要】：環(huán)境中的多環(huán)芳烴(PAHs),尤其是苯并[a]芘(B[a]P)是肺癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素,促進(jìn)肺癌的發(fā)生和發(fā)展。然而,B[a]P誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期分子機(jī)制尚不清楚。本研究首先建立了 B[a]P活性代謝產(chǎn)物BPDE誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型,結(jié)合RNA-Sequencing發(fā)現(xiàn)早期調(diào)控因子EGR1表達(dá)下調(diào);qRT-PCR及免疫印跡等實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明EGR1基因在BPDE誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)生持續(xù)的表達(dá)下調(diào);此外,B[a]P誘導(dǎo)的小鼠肺原位腫瘤組織和臨床人肺癌組織中均發(fā)現(xiàn)EGR1的顯著低表達(dá),提示其抑癌作用。外源過表達(dá)EGR1抑制BPDE誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的惡性表型。進(jìn)一步研究結(jié)果表明,miR-377-3p在惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞及B[a]P誘導(dǎo)的小鼠肺原位腫瘤組織中顯著上調(diào),且miR-377-3p特異性靶向EGR1基因的3'UTR介導(dǎo)其表達(dá)下調(diào),進(jìn)而調(diào)控BPDE誘導(dǎo)的細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。EGR1表達(dá)水平與臨床肺癌組織病理指標(biāo)分析顯示人肺癌組織中的EGR1低表達(dá)與人肺癌的侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、惡性分化程度相關(guān),提示EGR1在人肺癌發(fā)展過程中的重要調(diào)控作用。本研究表明了 EGR1在B[a]P誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,乃至肺癌形成過程中的重要作用,揭示其表達(dá)持續(xù)下調(diào)的分子機(jī)制。本研究對(duì)進(jìn)一步探索環(huán)境化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化乃至腫瘤形成的作用機(jī)理具有重要意義,并為提出新的干預(yù)切入點(diǎn)和手段提供科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）。根據(jù)ｐ值＜０．０５，倍數(shù)變化＞２的篩選標(biāo)準(zhǔn)，選�。遥危粒樱澹穹治鼋Y(jié)逡逑果中的顯著差異基因。結(jié)果顯示，在分析得到的差異表達(dá)基因中，ＥＧＲ１基因的逡逑ｍＲＮＡ水平變化最顯著（圖３．４）。結(jié)果提示，ＥＧＲ１可能是參與調(diào)控ＢＰＤＥ誘導(dǎo)逡逑ＢＥＡＳ－２Ｂ細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程的關(guān)鍵基因。逡逑１６逡逑

Ｉ１００＇逡逑＾邐°邐５邐１０邐１５邐２０邐２５邐３０邋（Ｄａｙｓ）逡逑圖３．３邋ＢＰＤＥ處理使ＢＥＡＳ－２Ｂ細(xì)胞具有皮下成瘤能力逡逑將對(duì)照組和ＢＰＤＥ處理姐ＩＸ邋１０７個(gè)細(xì)胞分別與Ｍａｔｒｉｇｅｌ以１：１的比例混合，以總體積１０（）逡逑ＵＬ進(jìn)行ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠的皮下注射。上圖為裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)所拍攝的照片。下圖逡逑為瘤塊體積增長的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，橫坐標(biāo)為天數(shù)，縱坐標(biāo)為瘤塊體積。１５天后，對(duì)照組瘤塊消逡逑失，無法達(dá)到測量標(biāo)準(zhǔn)。（＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑３．２邋ＥＧＲ１在ＢＰＤＥ誘導(dǎo)的ＢＥＡＳ－２Ｂ細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型中表達(dá)下調(diào)逡逑３．２．１邋ＢＰＤＥ誘導(dǎo)ＢＥＡＳ－２Ｂ細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化差異表達(dá)基因的篩選逡逑為揭示參與調(diào)控ＢＰＤＥ誘導(dǎo)的ＢＥＡＳ－２Ｂ細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵基因，首先提取逡逑對(duì)照姐及惡性轉(zhuǎn)化處理組細(xì)胞的完整ＲＮＡ，送至諾禾致源公司進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序逡逑（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）。根據(jù)ｐ值＜０．０５，倍數(shù)變化＞２的篩選標(biāo)準(zhǔn)，選取ＲＮＡ－Ｓｅｑ分析結(jié)逡逑果中的顯著差異基因。結(jié)果顯示，，在分析得到的差異表達(dá)基因中，ＥＧＲ１基因的逡逑ｍＲＮＡ水平變化最顯著（圖３．４）。結(jié)果提示
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2706142