發(fā)布時(shí)間：2020-06-08 15:28

【摘要】：背景惡性淋巴瘤的發(fā)病率呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì),已經(jīng)成為最常見(jiàn)的十大惡性腫瘤之一。目前常規(guī)治療方法存在免疫抑制等毒副作用及藥物耐藥的缺點(diǎn)。我們需要尋找不同于常規(guī)方法,更為安全、有效、經(jīng)濟(jì)的藥物來(lái)預(yù)防和治療惡性淋巴瘤并提高患者的預(yù)后和改善生活質(zhì)量。前期研究發(fā)現(xiàn)中藥小復(fù)方芩黃合劑聯(lián)合常規(guī)治療可以提高初發(fā)中高危DLBCL的近期療效,更早取得完全緩解,減輕了化療毒副反應(yīng)。芩黃合劑的主要成分即為漢黃芩素等黃酮類化合物,當(dāng)前大量研究表明多種黃酮類化合物可以通過(guò)誘導(dǎo)凋亡和自噬抑制腫瘤細(xì)胞。本研究主要從調(diào)節(jié)免疫和提高生活質(zhì)量角度評(píng)價(jià)芩黃合劑對(duì)非霍奇金淋巴瘤的療效;并從凋亡和自噬的角度探討部分黃酮類化合物對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的抑制作用與機(jī)制。目的1.觀察芩黃合劑對(duì)非霍奇金淋巴瘤患者的生活質(zhì)量及免疫功能的影響。2.探討漢黃芩素、木犀草素、水飛薊素對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制。方法1.根據(jù)真實(shí)世界研究方法由患者自愿選擇入組,收集本院2015年1月~2016年12月治療或隨訪的非霍奇金淋巴瘤患者,分為觀察組和對(duì)照組,觀察組患者在常規(guī)化療或隨訪期間服用芩黃合劑。對(duì)照組患者在常規(guī)化療和隨訪期間不服用芩黃合劑。觀察期為6個(gè)月,全部患者到達(dá)研究終點(diǎn)后比較兩組患者卡氏評(píng)分(Kanofsky score,KPS)、生活質(zhì)量評(píng)分(EORTC-QLQ-C30)、外周血細(xì)胞免疫、體液免疫及免疫相關(guān)細(xì)胞因子水平。2.CCK-8檢測(cè)漢黃芩素、木犀草素、水飛薊素、山柰酚、槲皮素、染料木素、對(duì)淋巴瘤SUDHL-4細(xì)胞增殖的影響,測(cè)算IC50值。AnnexinV/PI雙染法使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡發(fā)生情況,熒光探針DCFH-DA結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行活性氧檢測(cè),使用抗氧化劑NAC驗(yàn)證ROS的殺傷作用。Western blot檢測(cè)cleaved caspase3、cleaved PARP、Cytochrome c、Bax、Bcl-2、LC3A、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62等蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.共收集有效病例222例,觀察組74例,其中20例處于化療期,54例處于隨訪期;對(duì)照組148例,其中87例處于化療期,61例處于隨訪期。治療后觀察組KPS評(píng)分好轉(zhuǎn)率顯著優(yōu)于對(duì)照組(P0.05),生活質(zhì)量(EORTC-QLQ-C30)評(píng)分中觀察組治療后疲乏、便秘、腹瀉癥狀評(píng)分低于對(duì)照組(P0.05),軀體、情緒功能及總體健康狀況評(píng)分高于對(duì)照組(P0.05)。治療后觀察組外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3~+水平、CD4~+水平、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、白細(xì)胞介素2(Interleukin 2,IL-2)、補(bǔ)體C3水平高于對(duì)照組(P0.05),白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素8(IL-8)、白細(xì)胞介素10(IL-10)水平低于對(duì)照組(P0.05)。2.漢黃芩素、木犀草素、水飛薊素均可以抑制SUDHL-4細(xì)胞增殖,且呈劑量和時(shí)間依賴性。25、50、100μM的漢黃芩素、木犀草素可以誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞凋亡,漢黃芩素組凋亡率分別為(8.43±0.57%)、(17.90±1.40%)、(35.07±1.72%),木犀草素組凋亡率分別為(15.93±0.82%)、(23.67±1.49%)、(24.20±1.82%),與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。25、50、100μM的水飛薊素不能誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞凋亡,水飛薊素組凋亡率分別為(3.89±0.62%)、(3.38±0.39%)、(3.49±0.64%),與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。漢黃芩素可以誘導(dǎo)ROS(reactive oxygen species)累積,木犀草素沒(méi)有誘導(dǎo)ROS累積的作用。漢黃芩素、木犀草素作用于SUDHL-4細(xì)胞均可上調(diào)cleaved PARP、cleaved caspase3、cleaved caspase8、cleaved caspase9、Cytochrome c、Bax的表達(dá)水平,下調(diào)Bcl-2的表達(dá)水平及Bcl-2/Bax的比值。水飛薊素作用于SUDHL-4細(xì)胞可以上調(diào)Beclin-1的表達(dá),下調(diào)SQSTM1/p62的表達(dá)及LC3A/LC3B的比值。結(jié)論1.芩黃合劑能有效地改善非霍奇金淋巴瘤患者的生活質(zhì)量及免疫功能。2.漢黃芩素、木犀草素、水飛薊素均可抑制SUDHL-4細(xì)胞增殖,漢黃芩素可以誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞內(nèi)ROS積聚,漢黃芩素、木犀草素誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞凋亡,水飛薊素誘導(dǎo)SUDHL-4細(xì)胞自噬。
【圖文】：

Fig.1 Liquid chromatography result of Qinhuang Mixture圖 1 芩黃顆粒的液相色譜圖黃芩苷可以誘導(dǎo)宮頸癌 HeLa 細(xì)胞、卵巢癌 A2780 細(xì)胞、骨肉瘤 HOS 細(xì)胞凋

Fig.2 Effect of kaempferide, wogonoside, quercetin, wogonin, luteolin, silybin, apigenin, genistein onSUDHL-4 cell proliferation圖 2 山柰素、漢黃芩苷、槲皮素、漢黃芩素、木犀草素、水飛薊素、芹菜素、染料木素對(duì) SUDHL4 細(xì)胞增殖的影響。SUDHL-4 細(xì)胞經(jīng)不同濃度山柰素、漢黃芩苷、槲皮素、漢黃芩素、木犀草素、
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R733.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2703282