【摘要】：目的:觀察辛伐他汀對(duì)結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響,并從分子水平探討其作用機(jī)制。方法:采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT法)測(cè)定8種他汀類藥物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-116作用后增殖的情況,計(jì)算半抑濃度(IC50),篩選其中對(duì)HCT-116增殖抑制效果最好者并確定藥物作用有效劑量;劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室法檢測(cè)所篩選出的他汀藥物對(duì)HCT-116細(xì)胞0、24、48 h遷移與侵襲能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)該藥對(duì)HCT-116細(xì)胞的凋亡情況;利用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)檢測(cè)藥物處理后HCT-116中EMT相關(guān)基因E-cadherin、β-catenin、Twist的表達(dá)水平的變化情況;蛋白免疫印跡技術(shù)(WB)檢測(cè)藥物處理后HCT-116中EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、β-catenin、Twist水平的變化。結(jié)果:MTT法結(jié)果顯示辛伐他汀對(duì)HCT-116增殖的抑制作用最明顯,故選用辛伐他汀進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室法結(jié)果發(fā)現(xiàn)辛伐他汀在選擇的濃度下(4μM)均可以有效抑制HCT-116的侵襲和遷移;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在辛伐他汀的作用下,可促進(jìn)細(xì)胞的凋亡;q RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)辛伐他汀作用HCT-116細(xì)胞后,隨著辛伐他汀作用濃度的增高,E-cadherin m RNA上調(diào)、而β-catenin m RNA和Twist m RNA表達(dá)均下降,各實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組對(duì)比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并呈現(xiàn)濃度依賴性(P0.05);此外,WB結(jié)果顯示辛伐他汀隨著濃度的升高,E-cadherin上調(diào),但β-catenin和Twist蛋白表達(dá)均降低,各實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組對(duì)比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并呈現(xiàn)濃度依賴性(P0.05)。結(jié)論:辛伐他汀可抑制體外培養(yǎng)的HCT-116細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移,并促進(jìn)其凋亡;在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平下調(diào)E-cadherin的表達(dá)、上調(diào)β-catenin和Twist的表達(dá)可能是辛伐他汀抑制結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。
【圖文】：

圖 2 辛伐他汀對(duì) HCT-116 細(xì)胞遷移能力抑制實(shí)驗(yàn)注：*表示與空白對(duì)照組相比 P<0.053.3 辛伐他汀對(duì) HCT-116 細(xì)胞侵襲和遷移的影響通過比較未經(jīng)處理的細(xì)胞的遷移侵襲率以及加藥組的遷移侵襲率可以發(fā)現(xiàn)，下室細(xì)胞數(shù)量未經(jīng)處理組要明顯高于處理組，辛伐他汀在選擇的濃度下（4μM）可以有效抑制 HCT-116 的遷移和侵襲（圖 3，，P<0.05）。

圖 3 辛伐他汀對(duì) HCT-116 細(xì)胞遷移與侵襲能力抑制實(shí)驗(yàn)注：*表示與空白對(duì)照組相比 P<0.05伐他汀對(duì) HCT-116 細(xì)胞凋亡的影響照組的凋亡率為 9.76±2.05，實(shí)驗(yàn)組的凋亡率為 32.37±1.93（見圖 4）。上角象限代表機(jī)械損傷的細(xì)胞，左下角代表正常細(xì)胞，右下角代表早期右上角代表晚期凋亡的細(xì)胞，右側(cè)兩個(gè)象限相加便得到了凋亡細(xì)胞的百示，加入辛伐他汀后，細(xì)胞凋亡率有明顯的增加，并且有顯著性差異，的確可以誘使細(xì)胞發(fā)生凋亡（P<0.05）。B40*)
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

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1 邱慶崇;劉杰;邵嬌芳;樓小燕;陳辰;林標(biāo)揚(yáng);;結(jié)直腸癌患者二代測(cè)序鑒定微小RNA單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)及其對(duì)微小RNA功能的影響[J];中華腫瘤雜志;2015年10期

2 曲莉;劉宗武;趙學(xué)忠;;他汀類藥物多效性研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年02期

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1 Bikash Rai（畢卡斯）;Twist基因影響結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2701899