【摘要】：背景與目的:胃癌的早期診斷與及時治療是備受關(guān)注的公共衛(wèi)生事件,尋找新的診斷、治療和預(yù)后預(yù)測靶點至關(guān)重要�；旌线B鎖白血病因子(Mixed Lineage Leuemia factor,MLL)是目前備受關(guān)注的一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶[1-3],其基因表達(dá)不僅存在于各種造血細(xì)胞中,同時見于多種實體瘤組織細(xì)胞[4-7]。組蛋白甲基化酶在染色體修飾過程中所起的作用至關(guān)重要,它參與了基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞增殖分化等多種生命過程,其突變與異常表達(dá)所引起的多種遺傳性疾病和惡性腫瘤正在成為學(xué)者們的研究熱點。MLL家族蛋白(MLL1、MLL2、MLL3、MLL4、SET 1A、SET1B)是一類特異性針對H3K4的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,其活性依賴于C末端的保守SET結(jié)構(gòu)域。已證實,mll基因重排參與多種急性白血病的發(fā)生發(fā)展過程[2],m114基因在神經(jīng)膠質(zhì)瘤和胰腺癌組織細(xì)胞中存在過度擴增和異常表達(dá)的現(xiàn)象[8]。然而截至目前,關(guān)于MLL、MLL4蛋白在胃惡性腫瘤組織中的表達(dá)情況,及其表達(dá)異常對胃癌患者預(yù)后的影響罕有報道。本研究通過組織微陣列與免疫組化實驗技術(shù),對胃惡性腫瘤(胃腺癌為主)及胃癌癌旁組織中MLL、MLL4兩種蛋白的表達(dá)情況進行檢測,首次探討了它們各自的過度表達(dá)與胃惡性腫瘤相關(guān)臨床病理特征及患者預(yù)后之間的關(guān)系,試圖尋找與胃腺癌臨床診斷和治療相關(guān)的免疫標(biāo)記物。方法和材料:運用山東省立醫(yī)院病案管理系統(tǒng)搜集2008年1 月1日至2010年12月31日期間在胃腸外科施行胃惡性腫瘤切除術(shù)的患者病例約534例,通過電話隨訪等方式獲得患者術(shù)后治療情況與預(yù)后信息,最終得到隨訪資料可用的病例242例,于病理科獲取術(shù)后標(biāo)本蠟塊,制作成組織芯片。為保證研究變量的一致性,篩選入組的患者未接受任何新輔助治療。詳細(xì)核對患者信息,根據(jù)山東省立醫(yī)院術(shù)后病理報告,其中胃惡性腫瘤組織共190例,隨訪資料完整者180例,絕大多數(shù)(179例)為胃腺癌,其中2例為腺癌伴神經(jīng)內(nèi)分泌組織,1例為胃鱗狀細(xì)胞癌,胃癌旁組織共41例,胃間質(zhì)瘤組織9例,慢性胃潰瘍組織2例。運用兩塊相同的組織芯片,分別行MLL、MLL4免疫染色,檢測242例組織中MLL、MLL4蛋白的表達(dá)情況。MLL及MLL4組織染色情況的判讀及評分由2名病理科醫(yī)師單獨進行,他們不了解組織對應(yīng)的患者的臨床病理特征及預(yù)后。結(jié)果判定借鑒改良的IRS評分方法,最終評分綜合染色強度及陽性率兩項指標(biāo)進行判定,根據(jù)MLL組織染色最終評分分為MLL過表達(dá)、MLL低表達(dá)或陰性兩組,根據(jù)MLL4組織染色情況分為MLL4過表達(dá)、MLL4低表達(dá)或陰性兩組。運用SPSS(23.0 Mac版)軟件進行所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析,采用Spearman's相關(guān)性分析法分析MLL、MLL4的表達(dá)情況與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系,探討MLL的表達(dá)情況、MLL4的表達(dá)情況、患者的年齡、性別、腫瘤浸潤深度、術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量、TNM分期、腫瘤組織分化程度等因素對術(shù)后胃癌患者預(yù)后的影響時運用了 Kaplan-Meier法和log-rank統(tǒng)計檢驗分析,同時繪制MLL、MLL4表達(dá)分組的生存曲線,影響術(shù)后胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素由Cox多因素回歸分析獲得,應(yīng)用兩獨立樣本的t檢驗方法分別對比MLL、MLL4在胃癌組織與胃癌旁組織、胃間質(zhì)瘤組織、慢性胃潰瘍組織中的表達(dá)差異。結(jié)果:1、在180例胃惡性腫瘤細(xì)胞中,MLL的過表達(dá)主要分布在細(xì)胞漿中,部分癌細(xì)胞核呈現(xiàn)MLL低表達(dá),無細(xì)胞膜表達(dá);不同的是,癌組織的胞漿與胞核均有MLL4的過表達(dá),分布情況以胞漿為主,細(xì)胞膜未發(fā)現(xiàn)MLL4的表達(dá)。在41例胃癌旁組織中,部分組織胞漿呈現(xiàn)出MLL、MLL4的過表達(dá),少量組織胞核呈現(xiàn)MLL4的過表達(dá),包膜未發(fā)現(xiàn)MLL與MLL4的表達(dá)。9例胃惡性間質(zhì)瘤組織中,MLL、MLL4在部分組織胞漿成過表達(dá),胞核低表達(dá)。2例慢性胃潰瘍組織中,1例慢性胃潰瘍組織細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)MLL4過表達(dá)。2、對于180例胃惡性腫瘤組織,我們發(fā)現(xiàn),患者的發(fā)病年齡影響MLL4在胃腺癌組織胞漿中的表達(dá)。MLL4在胃癌組織細(xì)胞核中的過表達(dá)、MLL在胃癌組織細(xì)胞漿中的過表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān),表達(dá)程度更高的組織病理上對應(yīng)更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期,提示MLL、MLL4在胃癌組織中的過表達(dá)與胃癌的腫瘤侵襲性相關(guān)。3、獨立樣本的Mann-whitneyU檢驗發(fā)現(xiàn),對照胃癌與癌旁組織的免疫組化染色結(jié)果,無論是MLL還是MLL4的表達(dá)均存在顯著性差異。MLL、MLL4在胃癌組織中的表達(dá)程度明顯高于胃癌癌旁組織,提示MLL、MLL4的免疫組化檢測或可為胃癌的診斷提供依據(jù)。4、Life Table預(yù)后分析:存在MLL細(xì)胞漿高表達(dá)的胃癌患者的五年生存率為41.0%,對比MLL細(xì)胞漿低表達(dá)或陰性者的結(jié)果48.3%,兩者無顯著性差異;存在MLL4細(xì)胞漿高表達(dá)的胃癌患者的五年生存率為44.5%,對比MLL4細(xì)胞漿低表達(dá)或陰性者的結(jié)果40.4%,兩者無顯著性差異;MLL4細(xì)胞核高表達(dá)患者的五年生存率為42.1%,MLL4細(xì)胞核低表達(dá)或陰性患者的5年生存率為43.5%,兩者無顯著性差異。5、生存分析結(jié)果表明,術(shù)后胃癌患者的總生存期OS與患者的腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、手術(shù)方式、術(shù)后是否進行輔助治療有關(guān)。術(shù)前區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量過多是術(shù)后胃癌患者預(yù)后差的獨立危險因素。MLL、MLL4的過表達(dá)或許不是胃惡性腫瘤患者預(yù)后的獨立危險因素。結(jié)論:1、與癌旁組織和胃良性疾病組織相比,組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶MLL、MLL4在胃腺癌組織中呈現(xiàn)出明顯的更高的表達(dá)水平,提示MLL、MLL4的免疫組化檢測或許可以協(xié)助臨床上胃癌的診斷。2、MLL、MLL4在胃惡性腫瘤細(xì)胞中的過表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān),MLL、MLL4的高表達(dá)預(yù)示更多的腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,提示MLL、MLL4的過表達(dá)與胃癌的侵襲性相關(guān)。3、本研究未充分論證MLL、MLL4在胃惡性腫瘤組織中過度表達(dá)是否直接影響胃癌患者的總生存期(OS),但發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)與更多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),同時胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是患者預(yù)后的獨立危險因素,因此MLL、MLL4的過表達(dá)對胃癌患者生存預(yù)后的影響值得大樣本實驗進一步探討。4、術(shù)后胃癌患者的預(yù)后與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量、TNM分期、術(shù)后是否進行輔助治療、胃癌手術(shù)方式密切相關(guān),與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、術(shù)前腫瘤標(biāo)志物狀態(tài)無關(guān),術(shù)前區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量是影響術(shù)后胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素。
【圖文】：

圖３邋Ｋａｐｌａｎ－ｍｅｉｅｒ曲線示ＭＬＬ的表達(dá)與術(shù)后胃癌患者的０Ｓ無顯著相關(guān)性逡逑生存分析函數(shù)逡逑ｉ．0－ｎ邐｜表達(dá)逡逑Ｖ，邐：口雷逡逑１１邐＋陽？檢》垢逡逑Ｉ邋Ｉ，邐‘陰－檢RG＆逡逑０－８－邋Ｘ，，邋Ｋ逡逑ｒ逡逑ＶＴ邋０．４－逡逑０．２－逡逑０．０－逡逑．００邐２０．００邐４０．００邐６０．００邐８０．００邋丨邋００．００逡逑生存時間逡逑３０逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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本文編號：2701615