【摘要】：癌癥是威脅人類健康的重大疾病,世界衛(wèi)生組織下屬的官方癌癥研究機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)統(tǒng)計(jì)了 2014年最新的世界癌癥病例,預(yù)計(jì)每年都會(huì)有1410萬人發(fā)展成為癌癥患者,而且癌癥尤其是在發(fā)展中國家具有很高的致死率。其中,白血病是一種發(fā)病率很高,危害性極大的造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病,白血病的致病病因主要有病毒感染、化學(xué)因素、輻射誘導(dǎo)、染色體畸變等因素。目前,白血病的治療手段主要有化學(xué)治療、靶向治療、免疫治療、干細(xì)胞移植等�，F(xiàn)如今臨床上用于治療白血病的化療藥物主要以促進(jìn)細(xì)胞分化為主,但是隨著用藥時(shí)間延長以及用藥量的增加,白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生抗藥性的幾率也在增加,因此尋找新的化療藥物對(duì)白血病的治療具有重要意義。許多傳統(tǒng)中藥被發(fā)現(xiàn)具有良好的抗腫瘤作用,漢防己甲素是一種從防己科植物根部提取的生物堿,近年來有研究表明漢防己甲素具有良好的抗腫瘤作用。本研究主要對(duì)漢防己甲素在體外、體內(nèi)抗白血病的作用以及對(duì)其分子機(jī)制做了進(jìn)一步研究。誘導(dǎo)細(xì)胞分化是化學(xué)藥物治療白血病的重要機(jī)制,且大量研究表明藥物誘導(dǎo)分化與自噬相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn):2μM漢防己甲素作用于K562、THP-1以及AML病人細(xì)胞后能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分化。瑞氏-姬姆薩染色、NBT還原實(shí)驗(yàn)、流式檢測細(xì)胞表面CD14與CD11b表達(dá)、Western blot檢測CD14蛋白表達(dá)都檢測到細(xì)胞分化的發(fā)生。另一方面,研究表明漢防己甲素能夠誘導(dǎo)白血病細(xì)胞自噬發(fā)生,并且具有時(shí)間及濃度梯度依賴性。Western blot檢測自噬標(biāo)志性蛋白LC3、吖啶橙熒光染料染自噬泡、GFP-LC3熒光點(diǎn)聚集實(shí)驗(yàn)顯示漢防己甲素能夠誘導(dǎo)血癌細(xì)胞發(fā)生自噬,ptf-LC3雙熒光、LC3-II轉(zhuǎn)化法檢測到藥物處理后細(xì)胞中自噬流的產(chǎn)生。自噬早期抑制劑3-MA能夠抑制細(xì)胞自噬的發(fā)生進(jìn)而抑制細(xì)胞分化,敲除自噬相關(guān)基因atg7后也阻斷了漢防己甲素誘導(dǎo)細(xì)胞分化的發(fā)生。以上實(shí)驗(yàn)表明漢防己甲素誘導(dǎo)的細(xì)胞分化與自噬相關(guān)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧(Reaction oxygen species,ROS)是氧化應(yīng)激反應(yīng)中的重要信號(hào)分子,研究表明細(xì)胞內(nèi)ROS水平變化是許多藥物誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化的重要機(jī)制。對(duì)漢防己甲素誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化的分子機(jī)制進(jìn)行研究,結(jié)果顯示漢防己甲素能夠誘導(dǎo)白血病細(xì)胞內(nèi)ROS的累積,并且ROS的累積能夠影響漢防己甲素誘導(dǎo)的細(xì)胞分化與細(xì)胞自噬,研究中發(fā)現(xiàn)使用NAC及Tiron清除ROS后能夠拯救其誘導(dǎo)的細(xì)胞分化以及自噬。c-myc是參與細(xì)胞命運(yùn)決定的重要基因,有報(bào)道稱一些化療藥物可以通過抑制c-MYC表達(dá)來促進(jìn)白血病細(xì)胞分化。在本研究中,通過對(duì)漢防己甲素誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化分子機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn),2 μM漢防己甲素能夠抑制c-MYC表達(dá),同時(shí)對(duì)c-myc的mRNA水平也具有一定的抑制作用,研究過程中通過外源過表達(dá)c-MYC能夠拯救漢防己甲素誘導(dǎo)的細(xì)胞分化,而且其小分子抑制劑與漢防己甲素具有協(xié)同誘導(dǎo)血癌細(xì)胞分化的作用。此外,研究檢測到c-MYC蛋白的變化可能位于細(xì)胞自噬的上游。為了研究漢防己甲素對(duì)正常造血細(xì)胞的作用,我們將受孕12.5天后的ICR小鼠的胚胎進(jìn)行剝離,收集小鼠胚胎中的造血細(xì)胞,通過MTS、細(xì)胞凋亡檢測發(fā)現(xiàn)2 μM漢防己甲素對(duì)正常造血細(xì)胞無殺傷作用,但檢測細(xì)胞自噬發(fā)現(xiàn)相同濃度的漢防己甲素能夠促進(jìn)造血細(xì)胞自噬的發(fā)生,同時(shí)我們利用分離的人臍帶血造血細(xì)胞研究也發(fā)現(xiàn)了相同結(jié)果。在本研究中,除了一些體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),我們利用THP-1 Vector、THP-1 c-MYC白血病細(xì)胞建立了裸鼠異種移植瘤模型,研究漢防己甲素在體內(nèi)對(duì)白血病細(xì)胞分化的影響,以及檢測c-MYC是否參與其中。通過比較腫瘤大小、瘤體的重量,結(jié)果顯示漢防己甲素在動(dòng)物體內(nèi)也有很好抑制腫瘤作用的效果;通過分析灌胃后動(dòng)物體重變化,發(fā)現(xiàn)25 mg/kg以及50 mg/kg的漢防己甲素對(duì)老鼠的毒性較低;免疫組化分析腫瘤中CD14和c-MYC蛋白表達(dá),結(jié)果顯示在體內(nèi)漢防己甲素能夠誘導(dǎo)血癌細(xì)胞發(fā)生分化,且與c-MYC蛋白表達(dá)緊密相關(guān);利用MDA試劑盒檢測腫瘤內(nèi)MDA水平的變化,能夠檢測到在動(dòng)物體內(nèi)漢防己甲素也能促進(jìn)ROS的累積;通過weasterm blot以及免疫組化檢測LC3以及weastern blot檢測c-MYC蛋白表達(dá)也得到了與體外實(shí)驗(yàn)相一致的結(jié)果。綜上所述,研究表明漢防己甲素可以通過抑制c-MYC表達(dá)以及促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)ROS的累積誘導(dǎo)細(xì)胞分化與自噬的發(fā)生。因此,研究表明漢防己甲素能夠作為誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化以及自噬的誘導(dǎo)劑,在白血病治療中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

隨著研究發(fā)展，越來越多的人們認(rèn)識(shí)到白血病的分型以及預(yù)后均十分復(fù)雜，逡逑所以臨床上用于治療白血病的方法也有多種多樣，具體治療方法的制定需要結(jié)合逡逑病人自身情況，通過嚴(yán)格檢測篩選出最適合病人的治療方案。圖１．２比較詳細(xì)的逡逑顯示了白血病研究及治療的相關(guān)進(jìn)程。逡逑２逡逑

１．１．４白血病分化治療逡逑細(xì)胞分化是機(jī)體的一種正常生理功能，，其中人體正常造血干細(xì)胞能夠向有功逡逑能的成熟血細(xì)胞分化。但是在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中，如圖１．３所示，正常造逡逑血干細(xì)胞不能夠進(jìn)行終末分化，導(dǎo)致一些具有分化能力的細(xì)胞不斷增殖累積逡逑（Ｔｓｉｆｔｓｏｇｌｏｕ，邋Ｐａｐｐａｓ邋ｅｔａｌ＿邋２００３）�，F(xiàn)階段有研究表明，造血干細(xì)胞細(xì)胞分化受多種逡逑轉(zhuǎn)錄因子、生長因子以及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等共同調(diào)節(jié)，如圖１．４所示，在生物逡逑體內(nèi)各種細(xì)胞因子能夠調(diào)控造血干細(xì)胞分化為血液中存在的多種正常細(xì)胞（Ｒｏｂｂ逡逑２００７）。逡逑ＬＥＵＫＥＭＩＡ邐＾邐Ｌｅｕｋｅｍｉｃ逡逑？邋邐？邋？邐一邋Ｖ逡逑ｒ邐Ｍａｔｕｒｅ逡逑ＬＴ－ＨＳＣ邐ＳＴ－ＨＳＣ邐？＇一＂一逡逑個(gè)邐個(gè)邐？娭邋Ｂｌｏｏｄ逡逑１邐—邐１邋Ｂｌｏｃｋａｄｅ邋ｏｆ逡逑ＨＳＣｓ邐Ｕ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ邋Ｊ邐Ｃｅｌｌｓ逡逑ｉｎ邋ｅａｒｌｙ逡逑ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ逡逑圖１．３造血干細(xì)胞分化被抑制導(dǎo)致白血病的發(fā)生（Ｔｓｉｆｔｓｏｇｌｏｕ，邋Ｐａｐｐａｓ邋ｅｔａｌ．邋２００３）逡逑４逡逑
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 朱小蘭;許文林;呂旭晶;羅文娟;周磊磊;陳巧云;;漢防己甲素預(yù)防K562細(xì)胞獲得性耐藥機(jī)制的研究[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2011年02期

2 王玨瓊;陳寶安;程堅(jiān);許文林;孫新臣;;5-溴漢防己甲素與漢防己甲素對(duì)K562/A02細(xì)胞多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)作用的比較[J];癌癥;2008年05期

3 ;Potential role of tetrandrine in cancer therapy[J];Acta Pharmacologica Sinica;2002年12期

本文編號(hào)：2700714